宮頸上皮內(nèi)瘤變組織P16、Ki67表達及臨床意義

游娟 旦措毛 湛秀蓮 馮爽

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，具有高發(fā)病率與高病死率等特征，且近些年隨著生活方式改變，發(fā)病群體逐漸偏向年輕化[1]。宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN） 與 宮 頸 癌 密 切 相關(guān)，亦屬于一種子宮頸病變，其按嚴重程度可分為CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級，其中Ⅰ級CIN大多數(shù)可自行消退，而Ⅱ、Ⅲ級CIN則具有較大癌變可能[2]。目前臨床針對CIN的主要治療方式為手術(shù)治療，其中以宮頸高頻電波刀電圈切除術(shù)（loop electrosurgical excision procedure，LEEP）最為常見，其具有操作簡便、微創(chuàng)等優(yōu)勢[3]。但相關(guān)研究顯示，手術(shù)治療雖安全有效，但手術(shù)引起的并發(fā)癥仍是一大難題[4]。因此對CIN患者進行精準分級對治療方案的制定有重要意義。近些年，組織標本活檢逐漸成為進行CIN分級的重要方式，其中主要以P16、Ki67為主[5]。鑒于此，本研究分析CIN組織中P16、Ki67的表達，分析其與CIN分級的相關(guān)性，旨在為臨床治療方案制定提供參考依據(jù)。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月-2020年1月本院病理科手術(shù)切除100例CIN患者的組織標本。納入標準：患者均經(jīng)第二代雜交捕獲試驗（hybrid Capture Ⅱ，HC-2）和術(shù)后病理檢查確診為CIN。排除標準：（1）合并盆腔炎、尖銳濕疣或婦科腫瘤；（2）合并中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變；（3）合并血液性疾病；（4）合并免疫功能障礙。患者年齡32～71歲，平均（48.73±2.59）歲；CIN分級：CINⅠ級65例，Ⅱ級35例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準后，患者及其家屬均知情且自愿簽署知情同意書。

1.2 方法

組織樣本P16、Ki67的表達檢測。將所有標本放置進10%甲醛溶液中行固定處理，石蠟包埋后，作4 μm連續(xù)切片處理，而后行HE染色與免疫組化SP法染色，采用枸橘酸鈉進行高壓抗原修復，DAB溶液下行顯色處理。采用PBS溶液作為陰性對照，取已知P16、Ki67高表達的宮頸癌組織作為陽性對照。其中P16、Ki67鼠抗人單克隆抗體、SP試劑盒、DAB顯色溶液均購自福州邁新供公司。

1.3 觀察指標及評價標準

（1）比較P16、Ki67在 CIN P16 Ⅰ、Ⅱ 級中的表達情況。P16判定標準：胞核著色或胞核與胞漿同時著色判定為陽性，計數(shù)陽性細胞百分比，0～10%細胞陽性為陰性（-）；10%～50%細胞陽性為弱陽性（±）；＞50%細胞陽性為陽性（+）。Ki67判定標準：陽性信號位于胞核。陽性細胞僅位于基底或基底旁層為陰性（-）；陽性細胞達上皮下1/3層為弱陽性（±）；陽性細胞達上皮中1/3層為陽性（+）；陽性細胞達上皮上1/3層為強陽性（++）。陽性表達=陽性+強陽性。（2）分析P16和Ki67與CIN分級的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0統(tǒng)計學軟件進行分析和處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)系數(shù)進行描述，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 P16、Ki67在各分級CIN病變中活檢表達情況

CINⅠ級中P16、Ki67多為陰性與弱陽性表達，分別為69.23%、80.77%；而CINⅡ級中P16、Ki67多為陽性或強陽性表達，均為77.14%；CINⅠ級、Ⅱ級患者P16和Ki67陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1、表2。

表1 P16在各分級CIN病變中活檢表達情況[例（%）]

表2 Ki67在各分級CIN病變中活檢表達情況[例（%）]

2.2 P16、Ki67表達與CIN病變分級的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，P16、Ki67表達與宮頸病變程度均呈正相關(guān)（r=0.653、0.692，P＜0.05）。

3 討論

宮頸癌是臨床常見惡性腫瘤之一，CIN是發(fā)生于宮頸癌早期的一種子宮頸病變，根據(jù)異常程度分3級CIN（CINⅠ級、CINⅡ級和CINⅢ級），從CIN自然病史來看，極少數(shù)的CINⅠ級患者將發(fā)展成浸潤性癌，大約23%的CINⅡ級患者將發(fā)展成浸潤癌或者原位癌，大約15%的CINⅢ級患者可發(fā)展成浸潤性癌[6]。目前臨床對于大多數(shù)CINⅠ級患者主要采用保守治療，而對于CINⅡ級、Ⅲ級主要為宮頸局部治療，如宮頸消融或LEEP術(shù)。有研究顯示，CIN各級具有一定自然消退可能性，且目前所采用的LEEP術(shù)具有一定的安全風險，術(shù)后伴有諸如組織增生、宮頸管縮短等并發(fā)癥，不利于患者預后[7]。因此對于CIN患者的病理分級準確判定對于治療方案制定具有重要臨床意義。

有研究指出，對于CINⅠ級的分級判斷與術(shù)后病理學診斷一致性僅為64%，而CINⅡ級與術(shù)后病理學診斷的一致性則低于50%，因此尋找一種高效、敏感的CINⅠ級、Ⅱ級判斷標志物對于CIN患者治療方式制定迫在眉睫[8]。細胞分子生物學研究認為，惡性腫瘤發(fā)生的本質(zhì)上是由于細胞周期的調(diào)控紊亂，呈現(xiàn)出過度增殖和凋亡不足的狀態(tài)。近年來，隨著對細胞周期調(diào)控研究的不斷深入，大多數(shù)學者認同了腫瘤的發(fā)生多與細胞周期調(diào)控有關(guān)的觀點，因而檢測影響細胞周期調(diào)控的生物標志物，可以預測腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，P16在CINⅠ級、Ⅱ級病變中陽性表達率分別為30.77%（20/65）、77.14%（27/35）；Ki67在CINⅠ級、Ⅱ級病變中陽性表達率分別為20.00%（13/65）、77.14%（27/35），差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。CINⅠ級中P16、Ki67多為陰性與弱陽性表達，分別為69.23%、80.77%；而CINⅡ級中P16、Ki67多為陽性或強陽性表達，均為77.14%。CIN患者P16、Ki67表達與CIN分級正相關(guān)（r=0.653、0.692，P＜0.05），提示P16、Ki67可作為CIN臨床病理分級參考依據(jù)。分析其原因可能在于，目前臨床對于CIN分級主要采用傳統(tǒng)的組織病理學判斷，有研究指出醫(yī)師的自身觀念、資歷不同可能對CIN分級做出不同判斷[9]。P16是一個腫瘤抑制基因，位于9p21，全長8.5 kb，由3個外顯子和2個內(nèi)含子組成，作為一種細胞周期素依賴性激酶（CDKs）抑制物，其可通過抑制CDK活性以達到抑制pRb的磷酸化效果，較低水平磷酸化的pRb可通過與轉(zhuǎn)錄因子E2F結(jié)合并抑制其活性，使得細胞處于較早期階段。人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）E7蛋白通過與pRb結(jié)合導致其失去活性并釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，促進細胞繁殖，而細胞繁殖則可使P16呈高表達狀態(tài)，但因E7蛋白與pRb具有更高親和力，導致P16失去對于細胞周期的抑制效果從而聚集于細胞中[10-11]。Ki67是細胞增殖的標志物，在細胞周期的G1、S、G2和M期表達，但在G0期不表達，Ki67增殖指數(shù)與腫瘤分化、侵襲、轉(zhuǎn)移和預后密切相關(guān)，它被廣泛用于檢測各種惡性腫瘤細胞的增殖和惡性程度。Ki67是一種細胞增殖活性相關(guān)抗體，其陽性表達程度可反映細胞增殖活躍度。丁莉利等[12]研究結(jié)果顯示，P16、Ki67在高度CIN中陽性表達率高于低度CIN，與本研究結(jié)果相似，提示P16、Ki67表達與CIN分級密切相關(guān)。P16在宮頸鱗狀上皮非腫瘤性病變中的陽性率很低，但在CIN中的陽性率較高，尤其是在高級別CIN中，陽性率極高，作為輔助診斷標志物，P16可以有效區(qū)分CIN病變。Ki67在宮頸癌的不同CIN中逐漸增加，并且在預測低水平CIN是否可以發(fā)展為高水平CIN方面具有很強的預測價值。部分宮頸病變的病理學診斷及鑒別非常困難，絕經(jīng)后女性的鱗狀上皮萎縮及CIN病變，尤其是高度的CIN病變；宮頸腺體的鱗化及化生性增生與CIN病變；嚴重的宮頸炎可能刺激上皮反應性增生或掩蓋高度的CIN，應當引起臨床重視。

綜上所述，CIN患者P16、Ki67在CINⅠ級、Ⅱ級病變中均有不同程度表達，且P16、Ki67陽性表達與CIN分級呈正相關(guān)，可作為CIN臨床病理分級參考依據(jù)。但由于納入樣本量有限及并未探討P16、Ki67對于CIN患者預后的影響等因素，導致本研究結(jié)果可能不夠全面，因此后續(xù)研究中應納入充足樣本量并將P16、Ki67對于CIN患者預后的影響納入研究范圍，以獲取更準確、全面的研究結(jié)論，為臨床治療方案制定及預后判斷提供更全面準確的依據(jù)。