HPV E6/E7 mRNA結(jié)合HPV L1衣殼蛋白檢測(cè)診斷子宮頸癌前病變的臨床意義

高坤

子宮頸上皮不典型增生（CIN）屬癌前病變，發(fā)病原因與人乳頭瘤病毒（HPV）感染、性伴侶較多等因素相關(guān)，盡早診斷治療，對(duì)阻斷病情發(fā)展、改善預(yù)后具積極意義[1-2]。HPV E6/E7與細(xì)胞結(jié)合產(chǎn)物，可改變細(xì)胞周期循環(huán)，影響基因組穩(wěn)定性，引發(fā)宮頸上皮細(xì)胞永生化，屬HPV早期開(kāi)放讀碼框架，因此在對(duì)子宮頸癌前病變?cè)\斷中，可通過(guò)HPV E6/E7 mRNA 檢查診斷[3]。HPV L1 衣殼蛋白表達(dá)與HPV復(fù)制過(guò)程相關(guān)，屬晚期讀碼框，與L2基因編碼的次要衣殼蛋白共同組成HPV衣殼。相關(guān)研究表示，在對(duì)子宮頸癌前病變?cè)\斷中，HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣殼蛋白均具良好診斷價(jià)值，且兩者聯(lián)合后可進(jìn)一步提升診斷質(zhì)量[4]。為此，本次研究選泰安市婦幼保健院2019年1月-2020年12月HPV DNA陽(yáng)性樣本94例，探究以上兩種診斷辦法單獨(dú)、聯(lián)合診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選泰安市婦幼保健院2019年1月-2020年12月宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）HPV DNA陽(yáng)性患者94例為研究對(duì)象，根據(jù)組織細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果將其設(shè)為觀察組（宮頸上皮內(nèi)瘤變，n=84）、對(duì)照組（正常宮頸，n=10）；其中觀察組包括CIN1（n=31）、CIN2（n=29）、CIN3（n=24）。納入標(biāo)準(zhǔn)：精神狀態(tài)正常，可配合完成檢查；取樣理想，可有效完成檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌等惡性腫瘤患者；近期妊娠史；宮頸手術(shù)史；免疫系統(tǒng)疾病、長(zhǎng)期糖皮質(zhì)激素治療史。患者知情同意本研究，研究獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

HPV E6/E7 mRNA 檢測(cè)：應(yīng)用分支鏈 DNA 技術(shù)，將TCT樣本進(jìn)行定量檢測(cè)；樣本常規(guī)包埋切片，脫蠟后使用刀片刮下組織后放入離心管，加入裂解液，在65 ℃環(huán)境下反應(yīng)1 h。依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行雜交捕獲mRNA，信號(hào)放大，標(biāo)記熒光物質(zhì)的發(fā)光底物，經(jīng)計(jì)算機(jī)自動(dòng)判定結(jié)果。

HPV L1衣殼蛋白檢測(cè)：宮頸病理組織包埋切片、抗原修復(fù)，加3% H2O2消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，血清封閉，加HPV L1衣殼蛋白抗體，抗體濃度為1∶200；過(guò)夜，加二抗（山羊抗鼠），清洗，DAB、蘇木素處理，梯度酒精脫水，二甲苯透明處理，最后使用中性樹(shù)膠封片，鏡下觀察。鏡下見(jiàn)1個(gè)細(xì)胞紅染即為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)及診斷標(biāo)準(zhǔn)

以組織細(xì)胞學(xué)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣殼蛋白對(duì)樣本單獨(dú)、聯(lián)合診斷結(jié)果；聯(lián)合診斷兩者其中一方為陽(yáng)性，即判斷為聯(lián)合陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組年齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、分娩次數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較（±s）

表1 兩組一般資料比較（±s）

分娩次數(shù)（次）組別 年齡（歲）BMI（kg/m2）對(duì)照組（n=10） 38.10±6.24 24.70±2.96 0.96±0.24觀察組 CIN1（n=31） 38.97±5.40 24.76±1.75 1.11±0.20 CIN2（n=29） 38.76±6.33 25.00±2.34 1.08±0.19 CIN3（n=24） 38.02±5.41 25.49±2.40 1.16±0.31 F值 0.154 0.554 1.801 P值 0.927 0.647 0.153

2.2 兩組 HPV E6/E7 mRNA 陽(yáng)性檢出率

觀 察 組 HPV E6/E7 mRNA 總 陽(yáng)性 檢出 率為67.86%（57/84），較對(duì)照組的20.00%（2/10）高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中CIN1、CIN2、CIN3陽(yáng)性檢出率均較對(duì)照組高，且三組陽(yáng)性檢出率呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性檢出率比較

2.3 兩組HPV L1衣殼蛋白陽(yáng)性檢出率

觀察組HPV L1衣殼蛋白陽(yáng)性檢出率為35.71%（30/84），較對(duì)照組的10.00%（1/10）高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），CIN1中 HPV L1衣殼蛋白陽(yáng)性檢出率較對(duì)照組高，且CIN1、CIN2、CIN3陽(yáng)性檢出率呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表 3。

表3 兩組HPV L1衣殼蛋白陽(yáng)性檢出率比較

2.4 不同檢測(cè)方式的診斷價(jià)值比較

HPV E6/E7 mRNA+HPV L1 衣 殼 蛋 白 聯(lián) 合 診斷的準(zhǔn)確度、靈敏度分別為82.98%、82.14%，較HPV E6/E7 mRNA（69.15%、67.86%）、HPV L1 衣殼蛋白（41.49%、35.71%）單獨(dú)檢驗(yàn)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 不同檢測(cè)方式的診斷價(jià)值比較（%）

3 討論

HPV感染為子宮頸癌主要發(fā)病因素，可誘導(dǎo)宮頸上皮細(xì)胞非典型增生，并逐漸誘發(fā)子宮頸癌，威脅女性生命安全。HPV DNA檢查為子宮頸癌前病變主要檢查方式，有效提升診斷敏感性，多與TCT聯(lián)合應(yīng)用，可顯著提升診斷準(zhǔn)確性，但診斷費(fèi)用較高[5]。HPV E6/E7編碼的E6、E7蛋白為引起宮頸上皮細(xì)胞永生化主要基因，使宮頸癌前病變向子宮頸癌進(jìn)展，因此在對(duì)子宮頸癌前病變?cè)\斷中，以HPV E6/E7 mRNA為標(biāo)志物的檢查在臨床應(yīng)用頻率逐漸增高[6]。相關(guān)研究表示，在對(duì)早期子宮頸癌及癌前病變?cè)\斷中，應(yīng)用HPV E6/E7診斷靈敏度較好，其水平增高提示腫瘤細(xì)胞增殖分裂速度增快，處于疾病進(jìn)展期[7]；同時(shí)此種診斷方式也可用于低危HPV隨訪觀察，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)、治療宮頸癌前病變具積極意義[8]。本次研究中，對(duì)所有患者均進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常宮頸組織相比，子宮頸癌前病變患者HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性檢出率顯著升高，且CIN1、CIN2、CIN3陽(yáng)性檢出率呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)（P＜0.05），證實(shí)HPV E6/E7 mRNA對(duì)子宮頸癌變進(jìn)展評(píng)估、診斷價(jià)值。

HPV L1衣殼蛋白能夠反映病毒復(fù)制狀態(tài)，為免疫反應(yīng)攻擊病毒感染細(xì)胞主要靶位，可與T細(xì)胞、主要組織相容性復(fù)合物形成免疫復(fù)合物，激活機(jī)體免疫反應(yīng)，而加強(qiáng)子宮頸自愈傾向[9]。HPV DNA與宿主染色體整合后，病毒DNA基因在激活狀態(tài)下不斷表達(dá)，阻斷上皮細(xì)胞成熟過(guò)程，病毒無(wú)法完成完整生活周期，HPV L1衣殼蛋白表達(dá)逐漸消失，機(jī)體無(wú)法有效刺激免疫反應(yīng)，發(fā)生免疫逃逸，最終引發(fā)宮頸癌變進(jìn)展[10]。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，觀察組HPV L1陽(yáng)性檢出率顯著較高，且CIN1組HPV L1衣殼蛋白陽(yáng)性檢出率較對(duì)照組高（P＜0.05），可說(shuō)明，HPV L1衣殼蛋白水平升高，提示病毒DNA表達(dá)速度加快，HPV L1衣殼蛋白可用于子宮頸癌前病變?cè)\斷。

本次研究中，對(duì)94例患者進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣殼蛋白單獨(dú)及聯(lián)合診斷，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HPV E6/E7 mRNA+HPV L1 衣殼蛋白診斷準(zhǔn)確度、靈敏度分別為82.98%、82.14%，較兩者單獨(dú)檢驗(yàn)高（P＜0.05），考慮原因?yàn)椋趩渭儜?yīng)用HPV E6/E7 mRNA診斷中，因早期疾病進(jìn)展時(shí)，病毒增殖分裂速度相對(duì)較慢，可能會(huì)影響HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性檢出率，因此對(duì)早期子宮頸癌前病變?cè)\斷敏感性較低[11]；部分患者合并HPV感染，但未發(fā)生細(xì)胞組織病變時(shí)，會(huì)出現(xiàn)HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性情況，可能會(huì)出現(xiàn)誤診情況[12-13]；單獨(dú)使用HPV L1衣殼蛋白診斷時(shí)，在CIN2、CIN3級(jí)癌前病變?cè)\斷中陽(yáng)性檢出率偏低，難以滿足臨床診斷效率[14]；而兩者聯(lián)合診斷后，可滿足子宮頸癌前病變各個(gè)階段病變檢出情況，實(shí)現(xiàn)兩種診斷方式優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，因此兩者聯(lián)合后可提升診斷準(zhǔn)確度及敏感度。葉建紅等[15]在對(duì)127例HPV DNA陽(yáng)性樣本研究中發(fā)現(xiàn)，HPV E6/E7 mRNA、HPV L1衣殼蛋白聯(lián)合診斷后，特異度顯著提升（87.50% vs 75.00% vs 62.50%），說(shuō)明聯(lián)合診斷后可提升診斷效果，減少誤診率，但本次研究其單獨(dú)診斷、聯(lián)合診斷特異度無(wú)顯著差異，與本次研究不一致，考慮原因可能與本次陰性樣本數(shù)量較少、患者疾病特征差異性等因素有關(guān)。

綜上，對(duì)子宮頸癌前病變?cè)\斷中，隨病癥進(jìn)展，HPV E6/E7 mRNA 陽(yáng)性檢出率逐漸上升，HPV L1 衣殼蛋白陽(yáng)性檢出率逐漸下降；兩種診斷辦法聯(lián)合可提升診斷準(zhǔn)確度及靈敏度。