氣相色譜歸一化法測定高油酸花生中油酸、亞油酸含量

金誠誠 楊振中 曹瑩 于慧佳

摘要：油酸和亞油酸是花生中主要不飽和脂肪酸，且油酸/亞油酸（O/L）是決定花生油貨架期的重要指標，因此油酸與亞油酸含量的測定對于花生品質評價具有重要意義。采用氣相色譜歸一化法，以37種脂肪酸甲酯（FAME）標準物為基礎，初步建立測定花生中油酸和亞油酸含量的方法，通過校正響應因子對面積百分比法進行比較與優化。該方法可以補償儀器的響應差異，提高檢測結果的準確性。

關鍵詞：花生;油酸;亞油酸;氣相色譜;歸一化法;響應因子

中圖分類號：S565.2;O657.71? ? 文獻標識碼：A? ? 文章編號：1674-1161（2021）01-0052-04

油酸普遍存在于植物的油脂中，是人體有益脂肪酸，具有降低高血脂癥患者血脂水平及預防心血管疾病的作用。脂肪酸中的不飽和鍵越多，就越容易氧化變質。油酸只有一個不飽和鍵，比有兩個不飽和鍵的亞油酸穩定，所以高油酸低亞油酸的花生穩定性好、抗氧化性強、營養價值高。普通花生中油酸含量為36%～67%，而高油酸花生品種中能達到75%以上。利用氣相色譜法（濕化學方法）分析花生中脂肪酸可以獲得準確的參考值，主要方法包括面積百分比法、歸一化法、內標法和外標法。其中，面積百分比法操作最為簡單，但其以檢測器響應都相同為假定，多用于探索性研究及平行比較試驗;以十七烷酸甲酯為內標物的內標法目前廣泛用于測定花生中脂肪酸，其缺點是在未知樣品中加入內標化合物，引入的內標量必須相同、準確。為了探索花生中各脂肪酸甲酯最優化分離效果的色譜條件，更好地為未知樣品中各脂肪酸甲酯定性，本課題以37種脂肪酸甲酯標準物為基礎，通過校正響應因子來校正檢測器對不同組分的不同響應，對面積百分比法進行比較與優化，同時引入脂肪酸甲酯與脂肪酸的換算系數，準確地得到歸一化結果。

1 材料與方法

1.1 供試樣品

37種FAME標準物質：美國NU-CHEK公司。

1.2 儀器設備

Agilent GC7890B氣相色譜儀：美國Agilent公司;HP-88色譜柱：美國Agilent公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 測試條件 毛細管色譜柱：HP-88柱，柱長100 m，內徑0.25 mm，膜厚0.2 μm，最高使用溫度260 °C。進樣口溫度：270 °C。檢測器溫度：280 °C。程序升溫：初始溫度100 °C，持續13.0 min;100～180 °C，升溫速率10 °C/min，保持6.0 min;180～200 °C，升溫速率1

°C/min，保持20.0 min;200～230 °C，升溫速率4

°C/min，保持10.5 min。載氣：氮氣。分流比：80∶1。進樣體積：1.0 μL。恒流：2 mL/min。檢測器氣體：氫氣，40 mL/min;空氣，450 mL/min;氮氣尾吹氣，30 mL/min。

1.3.2 樣品制備 1） 標準樣品配制：使用1個含有37種組分的混合物，其中含有100 mg純凈物質，包含C4—C24的脂肪酸甲酯（相對濃度2%～4%）。使用前所有樣品在10 mL正庚烷中稀釋（每種脂肪酸甲酯最后的濃度為0.2～0.4 mg/mL）。2） 未知樣品脂肪酸的甲酯化：將風干后的花生籽粒研磨粉碎，稱取0.5 g置于具塞試管中，加入1∶1的乙醚—石油醚混合溶液5 mL，振蕩1 min，于45 °C下超聲（功率250 W）提取10 min，再向試管中加入5.4%的KOH-CH3OH溶液2 mL，超聲振蕩20 min，靜置1 h，加入5%的NaCl溶液10 mL，再靜置30 min，取上清液0.5 mL注入樣品瓶，待氣相色譜分析。

2 結果與分析

在優化色譜條件下，取脂肪酸甲酯混合標準溶液注入氣相色譜，對色譜峰進行定性分析。37種FAME混合物在100 m×0.25 mm×0.2 μm HP-88柱上的GC-FID分析結果如圖1所示。

由圖1可以看出：化合物都能得到很好的分離，只有C18：3n6和C20：0在38.325 min處一起洗脫出來、C22：0和C20：3n6在44.924 min處一起洗脫出來，但在積分面積上都出現了約2倍面積峰，37種脂肪酸甲酯達到了預期的分離效果。

在此條件下，選擇高油酸花生樣品花育52、花育655、花育910、花育951、農花1號5個品種進行比較分析。農花1號采集于沈陽農業大學花生試驗基地，其他樣品均為外購產品。5個高油酸花生樣品在100 m×0.25 mm×0.2 μm HP-88柱上的GC-FID分析結果如圖2所示。

由圖2可以看出：8種常見脂肪酸甲酯按流出順序分別為棕櫚酸甲酯（檢出限為0.782 μg/mL）、硬脂酸甲酯（檢出限為0.677 μg/mL）、油酸甲酯（檢出限為1.053 μg/mL）、亞油酸甲酯（檢出限為0.824 μg/mL）、棕櫚酸甲酯（檢出限為0.782 μg/mL）、硬脂酸甲酯（檢出限為0.677 μg/mL）、花生酸甲酯（檢出限為1.120 μg/mL）、花生四烯酸甲酯（檢出限為1.026 μg/mL）、山萮酸甲酯（檢出限為1.231 μg/mL）、二十四烷酸甲酯（檢出限為1.010 μg/mL），保留時間分別為28.603，32.745，34.173，36.347，38.029，39.742，

44.549，52.456 min。

面積百分比法默認檢測器對組分響應都相同，但響應因子在儀器與儀器之間、同一個儀器不同條件之間都會有所不同，可通過校正響應因子來校正檢測器對不同組分的不同響應。在用標準樣品做校正表時，響應因子為已知組分含量與該組分的峰面積的比值，即響應因子=組分含量/峰面積。響應因子計算結果見表1。

通過測定相應校正后峰面積對所有成分校正后峰面積總和的百分數來計算給定組分的百分含量，即為歸一化法計算方式：

Yi=×100%

以花育655為例，計算其中各脂肪酸占總脂肪酸的百分比，結果見表2。

由表2可知：各脂肪酸百分含量歸一化結果與面積百分比法有差異，8種主要脂肪酸的含量差異（變幅）有增加有減少，其中油酸含量最高，校正前后油酸的差異也最大，約為0.164%。

對5種高油酸花生中的油酸、亞油酸含量進行對比分析，結果見表3。

由表3可知：5種花生校正后油酸含量均有減少，各品種之間差異不大，變幅在0.142%～0.177%之間;校正后亞油酸含量均有增加，但差異很小。

引入轉化系數FFAME-FA，由各脂肪酸甲酯含量轉換為各脂肪酸含量，對試驗結果影響并不是很大，歸一化結果與面積百分比差異主要來源于校正前后響應因子差異。

油亞比值與油酸和亞油酸的校正峰面積相關，在不需要計算油酸和亞油酸百分含量的前提下，可直接求得油亞比值。測定校正后油酸峰面積與校正后亞油酸峰面積的比值，即為油亞比（O/L）：

油亞比（O/L）=

計算5種高油酸花生樣品中油亞比（O/L），結果見表4。

由表4可知：5種花生的油酸含量均依次增加，同時亞油酸含量依次減少;油亞比值越大，歸一化法與面積百分比法差異也越大。花育655的油亞比值為33.759，變幅約為0.108，明顯高于其他品種，這對高品質花生的育種、種子篩選和脂肪酸基因改良提供了數據幫助。

3 結論

油酸是決定花生及其衍生品營養及穩定性的主要脂肪酸，準確測定花生中油酸、亞油酸含量及油亞比值（O/L）對于高油酸花生的品種評價及選育具有重要意義。本課題通過歸一化法校正響應因子，得到花生中油酸、亞油酸含量及油亞比（O/L）計算公式，同時對比了歸一化法和面積百分比法結果的差異。在實際的檢測工作中，使用歸一化法可以補償儀器的響應差異，提高檢測結果的準確性。

參考文獻

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Determination of Oleic Acid and Linoleic Acid Content of High Oleic Acid

Peanut by GC and Normalization Method

JIN Chengcheng， YANG Zhenzhong， CAO Ying， YU Huijia

（Agronomy College of Shenyang Agricultural University， Shenyang， 110866， China）

Abstract： Oleic acid and linoleic acid are the main unsaturated fatty acids in Peanut， and oleic acid/linoleic acid （O/L） is an important index to determine the shelf life of peanut oil， therefore the content determination of oleic acid and linoleic acid is of great significance to the quality evaluation of peanut. This research uses gas chromatography and area normalization method based on 37 FAME standard materials， preliminary establishes method of determination of oleic acid and linoleic acid in peanut. By correcting a response factor compares and optimizes the area percentage method. This method can compensate the response difference of the instrument and improve the accuracy of the detection results.

Key words： peanut; oleic acid; linoleic acid; gas chromatography; normalization method; response factor