羊肚菌菌種培養基的比較試驗

崔文浩 葉勇金 鄭明海 鄭江程*

（1衢州市農業科學研究院，浙江衢州324000；2衢州市柯城區珍客來家庭農場，浙江衢州324000；3 開化縣農業科學研究所，浙江衢州324000）

羊肚菌（Morchella）隸屬子囊菌門、盤菌綱、盤菌目、羊肚菌科、羊肚菌屬[1]，是子囊菌中一類著名的食藥用真菌。目前各地栽培羊肚菌菌種來源不一，生產中常出現產量不穩定等問題。蔡英麗等[2]、李玉[3]研究發現，不同羊肚菌栽培菌株的種性存在差異。為此，筆者對收集的5 個羊肚菌菌株進行不同母種培養基配方、栽培種培養基配方、出菇試驗，篩選出綜合形狀優良的羊肚菌菌株及其適宜母種與栽培種的培養基，為衢州地區羊肚菌品種選育和菌種制作提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試羊肚菌菌株

Y-Q1、Y-Q2、Y-Q3、Y-Q4、Y-Q5為筆者采集、組織分離并保存的菌株，其中Y-Q1、Y-Q3、Y-Q4為四川省、浙江省衢州、武漢地區栽培的六妹系列菌株（M.sextelata），Y-Q2為重慶當地企業自主選育菌株，Y-Q5為武漢栽培的梯棱系列菌株（M.importuna）。

1.2 試驗方法

1.2.1 母種培養基配方試驗

設4 個母種培養基配方，配方1：馬鈴薯200 g，葡萄糖 20 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO41 g，瓊脂20 g，加水定容至1 000 mL；配方2：土壤200 g，葡萄糖20 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO41 g，瓊脂20 g，加水定容至1 000 mL；配方3：馬鈴薯200 g，麩皮10 g，葡萄糖 20 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO41 g，瓊脂20 g，加水定容至1 000 mL；配方4：麥粒200 g，葡萄糖 20 g，蛋白胨 2 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO41 g，瓊脂20 g，加水定容至1 000 mL。配方中的馬鈴薯、麩皮和麥粒加水煮20 min 后取浸提液；土壤烘干磨碎過篩（2 mm），放入錐形瓶內加水振蕩10 min 后取浸提液[4]。培養基滅菌后在無菌環境下倒入平皿內，冷卻凝固后接入活化的菌絲塊（用已滅菌的接種針挑取）。每個配方3個重復。

1.2.2 栽培種培養基配方試驗

設4 個栽培種培養基配方，配方①：木屑30%，礱糠30%，麥粒30%，土10%；配方②：木屑60%，麥粒30%，土10%；配方③：木屑30%，礱糠30%，麥粒30%，土5%，生物炭5%；配方④：木屑30%，豆皮30%，麥粒30%，土10%。配方中的小麥需提前用石灰水浸泡2 d。

采用14 cm×30 cm×0.004 cm 規格的聚丙烯袋手工裝料，要求邊裝料邊抖動袋使料裝得均勻，最后輕壓料面。每袋裝料量550～650 g。培養料袋121 ℃滅菌120 min，待冷卻后在無菌條件下接種（配方1 活化菌種）。用打孔器（直徑6 mm）截取活化菌絲塊，之后用接種針挑去3塊接種于料袋內，然后將料袋擺放在23 ℃、黑暗條件下培養菌絲。每個配方設15個重復。

1.2.3 出菇試驗

鋼架大棚內共設15個栽培小區，小區規格為畦寬1 m，畦間溝寬50 cm，畦面長5 m（折算小區面積為5 m2）。每個菌株隨機播種3個小區。

栽培種培養基選擇配方③（木屑30%，礱糠30%，麥粒30%，土壤10%），按1.5 袋菌種用量均勻撒播在小區內，覆土14 d 內擺放營養包，按照常規方式進行栽培管理。出菇前14 d 撤掉外源營養袋，澆大水催菇。出菇期間保持空氣相對濕度80%～95%[5]。

1.3 考察項目及方法

菌絲塊接種萌發后，給平皿統一劃起始線，2 d后劃終止線，計算菌絲日均長速，最后取3個重復的平均值；栽培種菌絲生長至菌袋肩下3 cm 左右劃起始線，5 d 后再劃終止線，計算菌絲日均長速，取15個重復的平均值。同時觀察記錄供試配方菌絲長勢和顏色，菌核出現時間、菌核顏色和數量。

菌絲日均長速（mm/d）=（終止線菌落長度-起始線菌落長度）/培養天數

羊肚菌采收標準參考文獻[6]，當羊肚菌子囊果棱紋展開、蜂窩狀凹陷基本展開時采收。采收時用小刀齊土割下菌柄基部，統計各小區羊肚菌產量。每個小區選取20 個形態正常的羊肚菌樣品稱量單菇重。

1.4 數據分析

對試驗數據進行SPSS 19.0 統計分析，用Duncan法比較差異顯著性。

2 結果與分析

2.1 供試母種培養基上各羊肚菌菌株生長情況

5 株羊肚菌菌絲在供試配方培養基上均能生長，但菌絲平均長速及菌落特征有差異（表1、表2）。配方1 培養基上5 個羊肚菌菌株菌絲長速最快，其中Y-Q4菌絲平均長速為1.4 mm/d，快于其他4個菌株；Y-Q1 在配方2 培養基上菌絲生長最慢，Y-Q2、Y-Q4 在配方4 培養基上菌絲長速最慢，Y-Q5 在配方3 培養基上菌絲生長長最慢，均與配方1 差異顯著。Y-Q3 菌絲平均長速在供試配方間無顯著差異。

由圖1，表2 可見，配方1 培養基上的羊肚菌菌絲密度為中等至濃密，顏色呈白色至淡黃色，供試羊肚菌菌株均產生白色絨毛狀的菌核；配方2 的羊肚菌菌絲稀疏，菌絲長勢較差，但菌核形成最早，菌核呈白色顆粒狀，其中Y-Q5 的菌核在平皿中央聚集；配方3 與配方1 相比，羊肚菌菌絲更加濃密，菌絲顏色更黃，沒有產生菌核，只有Y-Q4 有少量菌絲扭結；配方4 羊肚菌菌絲稀疏，菌絲顏色黃色為主。結合羊肚菌菌絲生長情況可得，配方1 培養基較適合供試羊肚菌母種菌絲生長。

表1 5株羊肚菌在不同母種培養基中的菌絲平均長速（P＜0.05）

表2 5株羊肚菌在供試母種培養基上的菌落特征

圖1 5株羊肚菌在供試母種培養基上的菌絲及菌核特征

表3 5株羊肚菌在不同栽培種培養基中的菌絲生長速度（P＜0.05）

2.2 供試栽培種培養基中供試羊肚菌菌株生長情況

由表3可知，Y-Q1、Y-Q2、Y-Q4、Y-Q5在供試栽培種培養基中菌絲平均長速無顯著差異；Y-Q3在配方④培養基中的菌絲平均長速快于其他3個配方，且差異顯著（P＜0.05），可能是培養基中含有豆皮的緣故。由表4可知，供試栽培種培養基配方中，各羊肚菌菌株菌絲長勢中等，顏色呈淡黃至黃色。菌核特征，Y-Q5 在配方①、配方②上無菌核形成；Y-Q4 在配方①、配方②中形成顆粒狀菌核，在配方④上為白色塊狀菌核；其他菌株形成的菌核均為黃色或淡黃色，絨毛狀。Y-Q1、Y-Q2、Y-Q3在供試栽培種培養基中菌絲長勢、形態、菌核形態相似。

表4 5株羊肚菌在供試栽培種培養基上的菌落特征

2.3 5株羊肚菌菌株產量統計分析

菌株Y-Q2 雖在補水后產生大量原基，但原基迅速變黃枯萎，未能發育成子實體。其他4 個菌株均正常出菇，結果見表5。由表5可知，試驗條件下，供試羊肚菌菌株單位平均產量和單菇質量有顯著差異（P＜0.05）。菌株Y-Q1 的單位平均產量最高，而菌株Y-Q4 的平均單菇重最高。菌株Y-Q5 的單位平均產量和單菇重都是最低的，且與其他菌株有顯著性差異。

表5 供試羊肚菌栽培結果

圖2 大棚栽培羊肚菌出菇狀態

3 小結與討論

5 個羊肚菌菌株在4 種母種培養基和4 種栽培種培養基中均能生長。母種培養基配方1中供試的5 個羊肚菌菌株菌絲長速、顏色、密度和菌核等性狀最優，可作為羊肚菌母種培養基的配方。配方④栽培種培養基適合Y-Q3 菌株生長。綜合栽培試驗結果，Y-Q1、Y-Q4 菌株綜合性狀最優，具有較好的推廣價值。

Y-Q5 菌株菌絲長速、形態，菌核量及子實體產量等最差，不具有推廣價值。Y-Q2 菌株菌絲長勢良好，補水后產生大量原基，但后期均枯萎而死，可能與該菌株原基不耐高溫有關。Y-Q1 菌株在供試栽培種培養基中長速最快，菌核量最多，小區單產最高；Y-Q4 菌株在供試母種培養基中菌絲生長最快，且子實體單菇重最高。Y-Q1、YQ4 這兩個菌株均為六妹系列（M.sextelata），說明六妹系列羊肚菌菌株比較適宜衢州環境條件。

相比配方1 母種培養基，供試羊肚菌菌株在配方3、配方4培養基上菌絲生長慢，菌核量少或無，是否與培養基中添加麩皮、麥粒導致氮素過量有關；配方2菌核形成最早，菌核多呈白色顆粒狀，是否與培養基加入土壤浸出液有關。這些有待進一步研究。