香芹酚的解酒護肝作用的研究

易 杭 徐啟鐘 陳楨昌 歐仲越 謝曉桐 黃樂琪 朱曉琴

1 廣州醫科大學第二臨床學院(廣州 510045) 2 廣州醫科大學基礎學院機能實驗中心(廣州 510045)

近年來，酒精性肝病發病率在我國有明顯增多的趨勢，世界衛生組織報告指出，全球每年因飲酒死亡的 280 萬人中，中國男性占了一定的比例，對酒精的過度依賴已然成為了中國社會的嚴峻的問題之一[1- 2]。

香芹酚( carvacrol，CAR) 是對異基甲苯的衍生物，它的生物效應主要為抗菌和抗氧化[3- 4]。據報道，香芹酚對D-氨基半乳糖( D-Ga1N) 誘導的大鼠肝損傷及缺血再灌注肝損傷有保護作用[5]。香芹酚主要通過維持肝細胞膜結構的完整性和維持肝細胞內的氧化—抗氧化平衡，從而發揮保護作用。目前，對香芹酚的研究大多側重于探索其抗菌作用以及對其他器官的抗氧化作用，尚未發現有關香芹酚通過抗氧化應激來發揮解酒護肝功效的報道。本研究擬通過小鼠實驗，探討香芹酚的解酒護肝作用。

1 資料與方法

1.1 主要實驗材料

香芹酚(濃度：99%，Macklin生產)；陽性對照藥：海王金樽片，深圳市海王健康科技發展有限公司。水飛薊賓(Macklin生產) ；56°紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)。超氧化物歧化酶(SOD)測試盒、 丙二醛(MDA)測試盒(Elabscience公司)，BCA 蛋白定量測試盒(上海碧云天生物技術有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 SPF級KM種小鼠，健康，雄性，6～8周齡，購自廣州中醫藥大學實驗動物中 心。所有小鼠均遵循實驗動物倫理學要求進行飼養及實驗操作。飼養環境模擬自然晝夜條件，養殖3天后，隨機分成5組，每組8只，每只體質量(24±2.0)g。①生理鹽水對照組：生理鹽水灌胃；②低劑量香芹酚組：10 mg/kg香芹酚灌胃；③中等劑量香芹酚組：20 mg/kg香芹酚灌胃；④高劑量香芹酚組：40 mg/kg香芹酚灌胃[6]。

1.2.2 醉酒最適濃度探索 SPF級KM種小鼠，雄性，40只，6～8周齡，養殖3天后，隨機分成5組。各組分別給予12 mL/kg,13 mL/kg,14 mL/kg,15 mL/kg,16 mL/kg的56°白酒灌胃，對照組給予等量的生理鹽水，觀察醉酒數量和死亡數量[7]。

1.2.3 小鼠防醉實驗 生理鹽水對照組用等量的生理鹽水灌胃，香芹酚各組先以相應劑量的香芹酚灌胃， 30 min后再以 56°白酒 ( 14 mL/kg) 灌胃處理，空白對照組給予等量生理鹽水。醉酒的指標為翻正反射消失，記錄給藥時間、翻正反射消失時間，翻正反射恢復時間，醉酒潛伏期和醉酒時間。其中，翻正反射消失時間減去給藥時間為醉酒潛伏期；翻正反射恢復時間減去翻正消失時間為醉酒時間。

1.2.4 香芹酚對小鼠血液中的乙醇濃度 生理鹽水對照組用等量的生理鹽水灌胃，香芹酚各組先以相應劑量的香芹酚灌胃， 30 min后再分別給予56°紅星二鍋頭( 14 mL/kg) 灌胃，生理鹽水對照組以等體積生理鹽水灌胃，以小鼠翻正反射消失作為醉酒指標，1 h后眼球取血，通過重鉻酸鉀-分光光度計法測定血液乙醇濃度。取90%的硫酸和2%的重鉻酸鉀溶液，體積比為1:1，配備重鉻酸鉀酸性溶液2 mL，再加入0.3 mL含有乙醇的血液，100 ℃水浴加熱10 min，觀察顏色變化，在600 nm波長測量吸光度。通過公式換算出血液乙醇濃度。

1.2.5 肝臟大體的的影響的探究 取出完整的肝組織，用濾紙吸干表面血漬，觀察肝臟大體，稱量肝臟重量，算出肝指數。

1.2.6 香芹酚的保肝作用研究 生理鹽水對照組用等量的生理鹽水灌胃，香芹酚各組先以相應劑量的香芹酚灌胃， 水飛薊賓組以37.8 mg/kg灌胃，30 min后再以 56°白酒 ( 14 mL/kg) 灌胃，連續7天。各組小鼠末次灌胃1 h后，處死小鼠(頸椎脫臼法)，取出肝，用4 ℃的0.9%氯化鈉沖洗除肝表面的血液，制備10% 肝勻漿，分別用于 MDA 含量(TBA 法) 和 SOD檢測。

1.3 統計學分析

采用 SPSS 19.0 統計軟件進行處理， 計量資料以均數±標準差表示， 組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，P<0.05為差異有顯著統計學意義。

2 結 果

2.1 最適的醉酒濃度探索

由此分析可得，最佳醉酒濃度為14 mL/kg。隨后實驗中，小鼠攝入酒精濃度均為14 mL/kg。見表1。

表1酒精濃度對小鼠醉酒的影響

2.2 小鼠防醉實驗

由表2可知，與生理鹽水對照組比較，香芹酚低中高劑量可小鼠延長醉酒潛伏期(P<0.05)。與生理鹽水對照組相比，對減短醉酒時間不具作用(P>0.05)。

表2香芹酚對小鼠醉酒的預防作用

2.3 香芹酚對小鼠血液中的乙醇濃度的影響

由表3可知，香芹酚低中劑量組與生理鹽水對照組相比有差異(P<0.05)，其余各組與生理鹽水對照組相對比沒有差異。

表3 香芹酚對小鼠血液中的乙醇濃度的影響 (n=8)

2.4 香芹酚對小鼠肝臟大體的影響

實驗表明，各濃度香芹酚均具有良好的護肝作用(P<0.05)。見表4。

表4香芹酚對小鼠肝臟大體的影響 (n=8)

2.5 香芹酚對小鼠肝組織的SOD，MDA含量的影響

實驗表明，各濃度香芹酚可有效降低炎癥反應，提高SOD含量，降低MDA活性。見表5。

表5 香芹酚對小鼠肝組織中SOD,MDA的影響(n=6)

3 討 論

飲酒過多會引起一系列的問題，而對身體造成嚴重的威脅：飲酒會導致肝臟、腎臟、大腦等器官的炎癥。醉酒是指人體攝入過多的酒精，過多的酒精經血液循環進入大腦，造成的行為異常。

酒精進入循環系統后，90%均需通過肝臟進行氧化代謝[8]。在肝內，酒精代謝為乙醛，乙醛在體內蓄積，導致肝微粒體自由基產生增多，自由基能引起肝細胞損傷，從而引起氧化應激[9-10]。造成肝細胞損傷。長期地過量飲酒會導致酒精性脂肪肝，酒精性肝炎，肝硬化甚至是肝細胞癌。而目前市面上的解酒護肝藥主要通過加快酒精在體內代謝而發揮作用。加快酒精在體內代謝的機理包括加快肝臟中乙醇的氧化代謝、增強清除自由基的能力等[11]。

本文探討了不同劑量的香芹酚在實驗條件下的解酒護肝效應，實驗中發現，低、中、高劑量香芹酚能顯著延長醉酒時間，而低、中劑量的香芹酚能降低血液中的乙醇濃度，進而對醉酒小鼠有一定的解酒作用。實驗結果充分表明，香芹酚對急性酒精性肝損傷小鼠具有較為顯著的解酒作用。但由于高劑量的香芹酚對降低血液中的乙醇濃度缺乏統計學差異，該數據有待進一步考究。實驗中還發現，與生理鹽水對照組比較，香芹酚組能夠減輕酒精對小鼠肝細胞的損傷，顯著降低肝組織中MDA，但低、中、高濃度之間缺乏統計學差異，該數據有待進一步考究；肝組織中SOD活性明顯增高，低、中、高濃度之間缺乏統計學差異間，該數據有待進一步考究。由此可見，香芹酚有一定的解酒護肝作用。但目前香芹酚在酒精性肝損傷的小鼠中的解酒護肝作用尚不明確。有文獻表明，香芹酚具有良好的抗氧化活性以及清除自由基的能力[12]，香芹酚對 D-氨基半乳糖( D-Ga1N) 誘導的大鼠肝損傷具有明顯保護作用。另有實驗證明，香芹酚對缺血再灌注肝損傷也有保護作用，而香芹酚對肝損傷的保護作用與其維持肝細胞膜結構的完整性和肝臟的氧化—抗氧化平衡有關[13]。因此，我們推測，香芹酚主要是通過抗氧化活性、清除氧自由基來降低醉酒反應、保護肝臟，這為香芹酚作為解酒護藥提供一定理論支撐。