子宮內膜癌中Matriptase、HAI-1及uPA的表達及臨床意義*

薛秀珍 熊麗麗 范麗麗 焦 娜 馬會峰 代娟霞 賈源君 張鏞鏞

河南科技大學第一附屬醫院婦產科，河南省洛陽市 471000

在我國，作為繼宮頸癌之后第二種常見的婦科惡性腫瘤，子宮內膜癌占婦科惡性腫瘤的 20%～30%，部分發達城市的子宮內膜癌發病率已達婦科惡性腫瘤第一位。且10%～20%早期子宮內膜癌術后的轉移，中晚期的子宮內膜癌的復發轉移，仍然是子宮內膜癌預后不良的主要問題[1]。子宮內膜癌的臨床參數，如疾病的分期、核分級、組織學亞型和腫瘤大小與疾病的預后相關。目前從分子遺傳學角度分析其預后，腫瘤的侵襲和轉移是個復雜的病理過程，包括細胞基質的降解、組織重建、信號傳導等。近年來，研究發現新型Ⅱ型絲氨酸蛋白酶(Matriptase)、尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)及其同源性抑制物肝細胞生長因子活化因子抑制劑1(Hepatocyte growth factor activator inhibitor-1，HAI-1)在多種上皮源性惡性腫瘤發生、發展及侵襲過程中相互作用[2]。鑒于此，結合子宮內膜癌同為上皮源性腫瘤的理論基礎，推測Matriptase、HAI-1及uPA在子宮內膜癌中也可能表達異常，但相關的研究較少，尚無明確定論，本研究采用免疫組織化學方法檢測子宮內膜癌組織中Matriptase、HAI-1及uPA的表達情況，結合子宮內膜癌的臨床病理特征進行分析，為患者的預后及治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 標本來源及臨床資料 選取 2016年1月—2018 年6月在我院病理科存檔的內膜組織石蠟標本160例，術前未接受放、化療及激素類藥物治療，無其他器官的原發惡性腫瘤，其中正常子宮內膜組：因子宮肌瘤行全子宮切除術，術后經病理確診的正常子宮內膜組織40例，平均年齡(51.06±5.21)歲。不典型增生組：全子宮切除或子宮內膜電切術，術后經病理確診為子宮內膜不典型增生50例，平均年齡(51.89±6.14)歲。子宮內膜癌組(選擇患者有淋巴清掃指征或術前影像學提示淋巴腫大，故給予子宮雙附件切除術+盆腹腔淋巴結清掃術)：術后病理確診為子宮內膜癌組織70例，平均年齡(51.23±5.97)歲，按 FIGO(2000) 臨床病理分期標本劃分：Ⅰ期26例，Ⅱ期16例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例；組織學類型：腺癌60例，其他病理類型10例；組織學分級: 高分化和中分化40例，低分化30例；有區域淋巴結轉移28例，無淋巴結轉移42例；有淋巴血管間隙浸潤10例，無浸潤的60例；肌層浸潤深度≥1/2的30例，<1/2的40例。

1.2 檢測方法 采用免疫組織化學方法檢測組織Matriptase、HAI-1及uPA的表達，制備石蠟切片，厚約3μm，逐級脫蠟至蒸餾水，3% H2O2室溫下浸泡8min，蒸餾水沖洗，抗原修復，抗體稀釋液濃度均為1∶100，DAB顯色，蘇木素復染，脫水透明，封片，光鏡觀察，所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行，免疫組織化學試劑盒(PV-9000)，DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，兔抗Matriptase及兔抗HAI-1單克隆抗體，兔抗uPA多抗分別購于武漢博士德生物工程有限公司和北京博奧森生物有限公司。

1.3 結果判定 Matriptase、HAI-1及uPA定位于細胞漿，呈淺黃色至棕黃色染色，采用IP( Intensity + percentages) 評分方法，綜合考慮染色強度和陽性細胞數，(1)染色強度計分：細胞漿無染色計0分，細胞漿淡黃色計1分，細胞漿棕黃色計2分，細胞漿棕褐色計3分。(2)陽性細胞數計分：細胞漿無染色計0分，染色細胞數<1%計1分，染色細胞數1%～10%計2分，染色細胞數11%～33% 計3分，染色細胞數34%～66%計4分，染色細胞數>66%計5分。染色強度計分及陽性細胞數計分之和即為總分。總分<2分為陰性，總分2～4分為低表達(+)，總分5～6分為中等表達(++)，總分 7～8分為高表達(+ + +),且(-)和(+)為陰性表達，(++)和(+++)為陽性表達，判定結果由兩位病理學專家獨立閱片確定。

1.4 統計學方法 采用SPSS23.0統計軟件分析數據，樣本率的比較用χ2檢驗,相關分析采用Spearman秩相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Matriptase、HAI-1及uPA在不同性質子宮內膜組織中的表達 正常子宮內膜、不典型增生、子宮內膜癌組織中Matriptase及uPA表達陽性率逐漸升高，HAI-1表達陽性率逐漸降低，差異均有統計學意義(P<0.01)。在子宮內膜癌組中Matriptase、HAI-1及uPA的陽性表達情況構成比也不完全相同，即Matriptase及uPA是高表達，而HAI-1是低表達，差異具有統計學意義(P<0.01)。見表1及圖1～3。

表1 Matriptase、HAI-1及uPA在不同性質子宮內膜組織中的表達陽性率比較[n(%)]

圖1 Matriptase在不同性質子宮內膜組織中的表達(×400)A.正常子宮內膜組織 B.子宮內膜不典型增生組織 C.子宮內膜癌組織

圖2 HAI-1在不同性質子宮內膜組織中的表達(×400)D.正常子宮內膜組織 E.子宮內膜不典型增生組織 F.子宮內膜癌組織

圖3 uPA在不同性質子宮內膜組織中的表達(×400)G.正常子宮內膜組織 H.子宮內膜不典型增生組織 I.子宮內膜癌組織

2.2 Matriptase、HAI-1及uPA與子宮內膜癌臨床病理特征的關系 Matriptase及uPA在子宮內膜癌組織中的表達陽性率與組織學分化、淋巴結轉移及臨床分期、肌肉浸潤深度、淋巴血管間隙浸潤有關。與組織高分化、無淋巴結轉移及臨床分期Ⅰ～Ⅱ期、淺肌層、無淋巴血管間質侵犯組織比較，組織低分化、有淋巴結轉移、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、肌肉浸潤深度≥1/2、淋巴血管間隙浸潤的Matriptase及uPA陽性率明顯升高，HAI-1陽性率明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)，Matriptase、HAI-1及uPA的陽性率在患者年齡<50歲與≥50歲之間，及腺癌與其他病理類型之間無統計學差異(P>0.05)，見表2。

表2 Matriptase、HAI-1及uPA在子宮內膜癌組織中的表達與臨床病理參數的關系

2.3 子宮內膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達的相關性 用Spearman等級相關分析顯示在子宮內膜癌組織中Matriptase與HAI-1的表達呈負相關(r=-0.514，P=0.000)，見表3。

表3 子宮內膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達的相關性

3 討論

惡性腫瘤的侵襲和轉移過程主要由蛋白水解酶的表達調控，是導致癌癥患者治療失敗和死亡的主要原因之一。已有研究報道腫瘤細胞浸潤轉移能力與蛋白酶產生程度密切相關[3]，腫瘤細胞產生大量蛋白水解酶降解基質，促進腫瘤細胞遷移[4]。在惡性腫瘤組織和細胞中，有四種主要的蛋白水解酶：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬基質蛋白酶。目前認為Matriptase可能參與腫瘤的侵襲轉移過程[5-6]，已確定Matriptase作用底物有4個：HGF/SF、uPA、蛋白酶活化受體2(PAR-2)和前列腺蛋白酶原[7]。HGFA受兩種抑制劑即HAI-1和HAI-2的調控。可見HAI對癌癥的發生、轉移可能有抑制作用。故有學者發現當HAI-1表達減少可能與前列腺癌、乳腺癌和胃癌的進展有關[8-10]。本研究也發現在子宮內膜癌中Matriptase為高表達而HAI低表達。Matriptase最初是在乳腺癌細胞中發現的，它與多種上皮源性實體瘤的臨床分期、病理分級及預后等密切相關。據報道， Matriptase在食管鱗癌中過表達，在晚期和預后較差的食管癌中尤為顯著，且高表達 Matriptase的患者預后明顯較差，因而提出Matriptase高表達是食管癌預后不良的獨立危險因素[5]。uPA是一種重要的絲氨酸蛋白酶，參與腫瘤發生、發展的同時也參與了這些腫瘤的浸潤、轉移[11-12]。故同樣在本研究中發現正常子宮內膜、不典型增生、子宮內膜癌組織中uPA表達逐漸升高。本文采用免疫組織化學方法檢測結果顯示：正常子宮內膜、不典型增生、子宮內膜癌組織中Matriptase表達逐漸升高，HAI-1表達逐漸降低，子宮內膜癌組Matriptase高表達所占比例高于正常子宮內膜組和不典型增生組，HAI-1高表達所占比例低于正常子宮內膜組和不典型增生組，值得一提的是不典型增生組HAI-1高表達的比例也低于正常子宮內膜組，推測Matriptase高表達及HAI-1低表達在子宮內膜正常到癌變的轉變過程中發揮了重要的作用。本研究同樣也發現，在組織低分化、有淋巴結轉移、臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、肌肉浸潤深度≥1/2、淋巴脈管間隙浸潤的Matriptase及uPA陽性率明顯升高，HAI-1陽性率明顯降低，差異具有統計學意義(P<0.05)，Matriptase、HAI-1及uPA的陽性率在不同年齡、組織學類型之間無統計學差異(P>0.05)。考慮Matriptase及uPA高表達、HAI-1低表達也可能是子宮內膜癌預后不良、腫瘤轉移的因素。

在直腸癌中發現Matriptase/HAI比值失調，與正常對照組織相比，Matriptase/HAI比值在取自結直腸癌、腺瘤、中重度異型增生的病變組織中增高，差異有統計學意義。可見，Matriptase/HAI比值失調存在于整個腫瘤惡性進展過程[8，13]。這與本研究一致，即子宮內膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達呈現負相關，進一步證明了HAI-1是通過抑制Matriptase來發揮生物學作用的。Matriptase的底物包括HGF/SF、uPA，而HGFA受兩種抑制劑即HAI-1和HAI-2的調控。故在整個腫瘤浸潤、轉移過程中Matriptase、HAI-1及uPA有著千絲萬縷的關系。

總之，Matriptase、HAI-1、HGF/SF和uPA等形成的調控網絡可能共同調節惡性腫瘤的侵襲和轉移這一復雜的過程。作為HGF/SF和 uPA上游調控分子的Matriptase有望成為腫瘤診斷和預后判斷新的生物標記物，同時Matriptase基因表達的調節分子如HAI亦有望成為新的治療靶標，為中晚期腫瘤患者帶來福音。由于本研究中病例數較少，且并未對患者進行隨訪，這將是我們下一步的研究方向。