微酸性氧化電位水和低濃度過氧乙酸協同消毒消化內鏡效果評價

浙江省醫療器械檢驗研究院，浙江省醫療器械安全性評價研究重點實驗室 （浙江 杭州 310018）

內容提要：通過消毒劑菌懸液定量殺菌試驗和對消化內鏡的現場模擬試驗，比較微酸性氧化電位水（Slightly Electrolyzed Oxidizing Water，SEOW）和濃度為0.23%的過氧乙酸溶液（Peroxyacetic Acid，PAA）復合而成的新型消毒劑和2%戊二醛對消化內鏡消毒效果。結果顯示，當消毒時間為10min時，兩者殺滅率均大于99.99%，差異無統計學意義（P＞0.05），但時間縮短30%。由此可見，該種新型消毒劑對消化內鏡的短時間消毒能力優于2%戊二醛。

據美國食品藥品監督管理局（FDA）數據，2010年～2015年，全球有41家以上醫院報告了與內窺鏡相關的細菌感染，有300～500名患者因接受污染的內窺鏡檢查而感染致命細菌，在這其中，有80%以上的感染事件原因是內窺鏡消毒不充分或消毒劑使用方法不當[1-3]。

在我國，戊二醛因其低廉的價格和較好的消毒效果，在各大醫院作為內鏡消毒劑的使用率高達70%以上[4]。據研究表明，若內鏡有戊二醛殘留，反復接觸患者皮膚、黏膜，會造成皮膚或黏膜損傷，而酸性氧化電位水具有高氧化還原電位、低有效氯濃度等優點，有效解決了戊二醛存在的缺陷[5,6]。本研究主要通過比較微酸性氧化電位水（Slightly Electrolyzed Oxidizing Water，SEOW）和濃度為0.23%的過氧乙酸溶液（Peroxyacetic Acid，PAA）按不同比例配置為新型復合消毒劑的消毒效果，確定兩者復合消毒劑的最佳比例和最短作用時間。

1.材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 試驗菌株

大腸埃希菌（Escherichia coli）[ATCC8099]、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[ATCC6538]、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[ATCC15442]，白色念珠菌（candida Albicans）[ATCC10231]，枯草桿菌黑色變種芽孢（Bacillus subtilis var.niger）[ATCC 9372]，購買自廣東環凱微生物科技有限公司。

1.1.2 試劑和培養基

①0.23%過氧乙酸，楷騰公司；②胰酪胨大豆瓊脂培養基（TSA），北京三藥；③沙氏瓊脂培養基（SDA），北京三藥；④胰蛋白胨大豆肉湯培養基（TSB），北京三藥；⑤根據文獻[2-4]選擇用含10g/L硫代硫酸鈉+3g/L卵磷脂+10g/L吐溫80的磷酸緩沖液（PBS）組成的中和劑。

1.1.3 儀器設備

內鏡清洗消毒機：DSD－201全自動內鏡洗消機，美國明泰科公司。

微酸性氧化電位水生成器：HHEOW-1000，山東淄博醫療器械廠。

恒溫水浴鍋：上海躍進醫療器械廠。

移液器：德國Eppendorf公司。

麥氏比濁儀：DensiCHEK，法國生物梅里埃公司。

生物安全柜：TYPEA2，LABCONEO，USA。

生物培養箱：KBK400，Binder，Germany。

立式蒸汽壓力滅菌器：MLS-3780，SANYO，Japan。

1.2 方法

1.2.1 新型消毒劑內鏡和2%戊二醛消毒效果比較

實驗組：取1mL菌懸液加入至9mL新型復合消毒劑消毒劑中，混勻，作用10min后，取1mL混合液加入到9mL中和劑中作用10min。取1mL加入相對應的培養基中，采用平板傾注計數法進行菌落總數測定，實驗重復三次。

對照組：取1mL菌懸液加入至9mL 2%戊二醛中，混勻，作用10min后，取1mL混合液加入到9mL中和劑中作用10min。取1mL加入相對應的培養基中，采用平板傾注計數法進行菌落總數測定，實驗重復三次。

陽性對照組：將等量的接種菌接入與實驗組消毒劑相同體積的PBS中，充分混合至接種菌完全分散，取合適的稀釋液，取1mL加入相對應的培養基中，采用平板傾注計數法進行菌落總數測定，實驗重復三次。

1.2.2 新型消毒劑內鏡和2%戊二醛消毒消化內鏡消毒效果比較

內鏡清洗消毒與檢測方法：參照衛生部《內鏡清洗消毒機消毒效果檢驗技術規范》的要求進行檢測，實驗重復三次。

2.結果

2.1 相同時間內新型消毒劑和2%戊二醛消毒效果比較結果

新型消毒劑和2%戊二醛對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌作用10min，其陽性對照組結果見表1。

表1. 陽性對照組試驗

兩種消毒劑對各個菌株的消毒效果比較見圖1～4。

圖1. 兩種消毒劑對大腸埃希菌的消毒效果

圖2. 兩種消毒劑對銅綠假單胞菌的消毒效果

圖3. 兩種消毒劑對金黃色葡萄球菌的消毒效果

圖4. 兩種消毒劑對白色念珠菌的消毒效果

由圖1可得，該新型消毒劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌作用時間10min后，兩者殺滅率均大于99.99%，兩種消毒劑對菌株殺菌效果差異無統計學意義（P＞0.05），但新型消毒劑所需時間明顯比2%戊二醛少。

2.2 最短時間內新型消毒劑和2%戊二醛消毒效果比較結果

新型消毒劑最佳作用時間為7min，因此，比較新型消毒劑和2%戊二醛對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和白色念珠菌作用7min的消毒效果，結果見表2。

表2. 新型消毒劑和2%戊二醛消毒效果比較結果

由表2可見，當消毒時間為7min時，該新型消毒劑對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌殺滅后的恢復生長菌數對數減少值均比2%戊二醛大了至少1個數量級。

2.3 消毒劑對消化內鏡的現場模擬試驗

新型消毒劑和2%戊二醛對消化內鏡現場模擬試驗結果見圖5，由此可得，該新型消毒劑放入內鏡清洗消毒機中運行消毒7min程序對連接于模擬內鏡體不同位置模擬管腔內芽孢清除恢復生長菌數對數減少值為5.04～5.83，而2%戊二醛進行同樣運行程序消除恢復生長菌數對數減少值為4.18～4.41。該新型消毒劑對枯草桿菌黑色變種芽孢消毒后的菌液濃度對數減少值均比2%戊二醛大至少1個數量級。由此可見，該種新型消毒劑的短時間消毒能力優于2%戊二醛。

圖5. 新型消毒劑和2%戊二醛對消化內鏡現場模擬試驗結果

3.討論

近些年，消化內鏡行業內一直在探索快速、有效、安全、環保的消毒方法和消毒劑[7]。微酸性氧化電位水和新型過氧乙酸溶液是目前國內外研究較多的消化內鏡消毒劑，但是其安全性和有效性缺乏相關試驗依據[8]。

但本研究中，對該新型消毒劑對消化內鏡的消毒效果只進行到模擬現場試驗階段，將其應用于醫院臨床的消毒效果研究將是一個值得關注和探討的方向。另外，關于微酸性氧化水和過氧乙酸殺菌機制的研究非常少，所以關于兩者協同作用的殺菌機制更趨向于零，所以，研究該復合消毒劑的殺菌機制也是一個非常有意義的課題。

目前我國絕大多數的消化內鏡室（中心）仍以戊二醛作為內鏡清洗消毒的主要消毒劑之一[9]。從臨床應用看，戊二醛存在消毒時間長、污染環境、對內鏡腐蝕性較強等諸多缺陷，因此，探索快速、有效、安全、環保的消毒方法和消毒劑還需要更多的突破[10]。