高血壓腦出血后T淋巴細胞亞群的動態變化

樊華聲，魏風，鐘仕茂，胡北泉，楊松，劉海峰，吳靜

高血壓腦出血是病死率和致殘率均較高的一種疾病[1-2]。有研究顯示，高血壓腦出血后常伴有T淋巴細胞亞群水平的動態變化，并可對患者的預后產生一定影響[3-4]。目前，對缺血性卒中后炎癥反應及免疫抑制的相關研究較多，但針對腦出血后免疫系統變化的研究相對較少。本研究通過分析高血壓腦出血后患者外周血T淋巴細胞亞群的動態變化，探討其免疫系統的變化規律。

1 對象與方法

1.1 研究對象 本研究為前瞻性對照研究，在2014年8月-2017年12月南寧市第一人民醫院神經外科收治的高血壓腦出血患者中根據病情嚴重程度選擇輕型組、中型組和重型組各30例；選擇同時期收治的無腦出血的原發性高血壓病患者30例作為對照組。本研究通過南寧市第一人民醫院倫理委員會批準，患者或家屬均簽署知情同意書。

高血壓腦出血組入組標準：①年齡≥18歲；②符合全國第5屆腦血管病學術會議修訂的腦出血診斷標準[5]；③腦出血發病24 h內；④高血壓性腦出血。排除標準：①非高血壓導致的腦出血；②有輸血及近期服用過調節免疫藥物；③有免疫系統疾病或服用調節免疫藥物；④嚴重肝、腎功能損傷及惡性腫瘤。

對照組入組標準：①年齡≥18歲；②原發性高血壓病；③無腦出血。排除標準：①合并有其他心腦血管疾病；②1個月內有感染和其他急性病史；③有免疫系統疾病或服用調節免疫藥物；④嚴重肝、腎功能損傷及惡性腫瘤。

按入院時GCS評分對高血壓腦出血患者嚴重程度進行分級：輕型為GCS 12～15分，中型為GCS 9～11分，重型為GCS 3～8分[6]。

1.2 方法 收集患者的性別、年齡等一般資料，既往卒中（出血性和缺血性卒中）、冠心病、高脂血癥等病史，吸煙和飲酒等個人史。

高血壓腦出血患者于發病1 d、3 d、7 d、14 d和28 d，對照組于住院第二日清晨采集空腹肘靜脈血6 mL于肝素抗凝瓶中，4 ℃存放，于4 h內檢測CD4+、CD8+淋巴細胞比例，并計算CD4+/CD8+比值。本研究樣本采集時間點較多，如患者已經出院，則由隨訪人員聯系患者至門診完成隨訪和血液采集，持續住院的患者則在病房內采集血液。

比較高血壓腦出血輕型組、中型組、重型組及對照組四組間基線資料及發病后CD4+、CD8+淋巴細胞比例和CD4+/CD8+比值變化的差異。

1.3 T淋巴細胞亞群檢測方法 取10 μL CD4+、CD8+分別熒光標記的單克隆抗體加入試管中，CD4+由異硫氰酸熒光素標記，CD8+由熒光素標記，再取10 μL全血加入試管中，輕微振蕩。18～25 ℃放置15 min標記，加入溶血劑甲600 μL于螺旋振蕩器振蕩6 s后再加入260 μL溶血劑乙振蕩。以1000 r/min離心5 min，棄去上清液，加磷酸緩沖鹽溶液1 mL振蕩后通過流式細胞儀檢測外周血CD4+、CD8+淋巴細胞的比例。

1.4 統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析，計量資料符合正態分布，用表示，多組間整體比較采用方差分析（F檢驗），整體差異有統計學意義再進一步采用LSD-t檢驗進行兩兩比較。計數資料用率（%）表示，組間差異采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料比較 研究期間，對照組和腦出血輕型組無死亡病例；中型組累計死亡3例，分別在7～14 d隨訪期間死亡2例，14～28 d死亡1例；重型組累計死亡5例，分別在7～14 d死亡3例，14～28 d死亡2例。

高血壓腦出血輕型組、中型組、重型組與對照組在性別、年齡、既往病史、吸煙和飲酒方面差異均無統計學意義（表1）。

2.2 不同嚴重程度高血壓腦出血患者T淋巴細胞亞群水平比較 對照組與不同嚴重程度高血壓腦出血組發病1 d（F=9.523，P＜0.001）、3 d（F=13.441，P＜0.001）、7 d（F=6.542，P＜0.001）、14 d（F=3.342，P=0.002）時CD4+淋巴細胞比例的整體差異均有統計學意義，但與發病28 d時各高血壓腦出血組CD4+淋巴細胞比例整體差異無統計學意義。進一步兩兩比較結果顯示，發病1 d時，輕型組（P=0.002）、中型組（P＜0.001）、重型組（P＜0.001）CD4+淋巴細胞比例均低于對照組，中型組低于輕型組（P=0.008），重型組低于輕型組（P＜0.001）和中型組（P=0.015）；發病3 d時，輕型組、中型組、重型組CD4+淋巴細胞比例均低于對照組（均P＜0.001），中型組低于輕型組（P=0.008），重型組低于輕型組（P＜0.001）；發病7 d時，輕型組（P=0.020）、中型組（P＜0.001）、重型組（P＜0.001）CD4+T淋巴細胞比例均低于對照組，中型組低于輕型組（P=0.008），重型組低于輕型組（P＜0.001）和中型組（P=0.009）；發病14 d時僅重型組的CD4+淋巴細胞比例低于對照組（P=0.001）和輕型組（P=0.044），其他組間差異均未達到統計學意義。

對照組與不同嚴重程度高血壓腦出血組發病1 d（F=8.997，P＜0.001）、3 d（F=7.564，P＜0.001）、7 d（F=6.443，P＜0.001）、14 d（F=5.998，P＜0.001）CD8+淋巴細胞比例的整體差異均有統計學意義，但與發病28 d時各高血壓腦出血組CD8+淋巴細胞比例整體差異無統計學意義。進一步兩兩比較結果顯示，發病1 d時，輕型組、中型組、重型組CD8+淋巴細胞比例均低于對照組（均P＜0.001），重型組低于輕型組（P=0.001），中型組低于輕型組（P=0.032）；發病3 d時，輕型組、中型組、重型組CD8+淋巴細胞比例均低于對照組（均P＜0.001），重型組低于輕型組（P=0.007）；發病7 d時，輕型組、中型組、重型組CD8+比例均低于對照組（均P＜0.001），重型組低于輕型組（P=0.014）；發病14 d時僅重型組的CD8+淋巴細胞比例低于對照組（P＜0.001），其余組間差異無統計學意義。

表1 一般資料比較

另外，四組間CD4+/CD8+比值在發病1 d（F=2.611，P=0.011）、3 d（F=3.808，P＜0.001）、7 d（F=2.778，P=0.042）時整體差異均有統計學意義，發病14 d和28 d時整體差異無統計學意義。兩兩比較結果顯示，發病1 d時，高血壓腦出血輕型組（P＜0.001）、中型組（P=0.001）、重型組（P=0.011）CD4+/CD8+比值均高于對照組，其余組間差異均無統計學意義；發病3 d時，中型組、重型組CD4+/CD8+比值均低于對照組（均P＜0.001），重型組低于輕型組（P＜0.001），中型組低于輕型組（P=0.009），其余組間差異均無統計學意義；發病7 d時，輕型組（P=0.002）、中型組（P＜0.001）、重型組（P=0.047）CD4+/CD8+比值均高于對照組，其余組間差異均無統計學意義（表2）。

2.3 高血壓腦出血不同時間點T淋巴細胞亞群的變化 對于CD4+淋巴細胞比例，高血壓腦出血輕型組（F=3.914，P＜0.001）、中型組（F=8.419，P＜0.001）和重型組（F=10.242，P＜0.001）同組間不同時間點的差異均有統計學意義，且均呈發病后先降低后升高的趨勢，發病3 d時CD4+淋巴細胞比例最低，7 d時開始升高，28 d時最高。

CD8+淋巴細胞比例在高血壓腦出血輕型組（F=6.273，P＜0.001）、中型組（F=8.642，P＜0.001）和重型組（F=9.752，P＜0.001）同組間不同時間點的差異均有統計學意義，其變化與CD4+淋巴細胞比例相似，呈現先降低后升高的趨勢，但是3 d和7 d時有輕微起伏，14 d時開始升高。

高血壓腦出血輕型組（F=4.027，P＜0.001）、中型組（F=8.15 4，P＜0.0 01）和重型組（F=6.919，P＜0.001）CD4+/CD8+比值不同時間點的差異也均有統計學意義。發病1 d或7 d時比例最高，3 d時有所降低，7 d時再次升高，到28 d時基本接近對照組水平（表2）。

3 討論

腦出血后血腫周圍繼發的炎癥反應對神經功能障礙及疾病嚴重程度有重要影響[7]。有研究者認為高血壓腦出血后患者機體處于應激狀態，表現出高代謝、負氮平衡狀態，細胞免疫功能受損，從而加重繼發性腦損傷，影響預后[8]。還有研究顯示，包括高血壓腦出血在內的急性中樞神經系統損傷患者存在外周免疫反應功能下降，導致患者感染率和死亡率升高[9-11]。

免疫系統的淋巴細胞主要包括B淋巴細胞和T淋巴細胞。T淋巴細胞在體內數量較多，是細胞免疫最主要的免疫細胞，在免疫調節方面發揮重要作用，不同T淋巴細胞亞群相互作用，從而維持正常免疫功能。CD3+代表總T淋巴細胞，有輔助性T細胞（CD4+）和抑制性T細胞（CD8+）2個主要亞群，CD4+主要功能為調節免疫反應的活性，CD8+能抑制B淋巴細胞產生抗體，抑制細胞毒性T細胞的殺傷功能。CD4+、CD8+淋巴細胞比例及CD4+／CD8+比值可反映機體免疫功能。王國華[10]研究認為老年高血壓患者患腦出血后，身體免疫系統受到破壞，CD4+、CD8+比例降低，且其降低的程度越大表明腦出血病情越嚴重，預后越差。劉秋紅等[11]研究發現急性腦出血患者的CD3+、CD4+淋巴細胞比例和CD4+/CD8+比值均下降，但CD8+T淋巴細胞比例則升高。目前對T淋巴細胞亞群的臨床試驗多數樣本量偏小，且由于選擇的研究對象入組標準、診斷標準、檢驗方法均有所不同，故各研究報道的淋巴細胞亞群正常范圍和對感染的預測值亦不同[12-13]。

本研究通過對各組患者發病后1、3、7、14、28 dT淋巴細胞亞群水平的變化進行探討，結果顯示與無腦出血的高血壓患者相比，輕、中、重型高血壓腦出血患者在發病1 d時CD4+、CD8+淋巴細胞比例開始降低，然后逐漸上升，到28 d時升至接近對照組水平；高血壓腦出血患者CD4+/CD8+比值在發病1 d后明顯升高，隨后水平有所波動，發病7 d時比值高于3 d，但整體呈現逐漸下降的趨勢。另外，隨著患者腦出血病情的加重，CD4+、CD8+淋巴細胞比例在發病初期下降的程度更大，特別是在發病7 d內，高血壓腦出血輕、中、重型三組之間淋巴細胞亞群的比例差異兩兩比較均有統計學意義，且重型患者CD4+、CD8+淋巴細胞比例的恢復期更長，輕、中型患者在發病14 d時淋巴細胞亞群比例與對照組比較差異無統計學意義，但重型患者要延后到發病28 d才可恢復至對照組水平。

本研究結果表明，高血壓腦出血后患者T淋巴細胞亞群（CD4+、CD8+）均出現先下降再升高直至正常的現象。在患者發病早期（7 d內），免疫細胞水平明顯低于正常水平，提示免疫功能處于抑制狀態，輕、中型組在發病14 d時免疫細胞水平接近正常，而重型組在發病28 d后免疫細胞才接近正常水平。由于本研究納入病例數偏少，可繼續增大樣本量進一步研究高血壓腦出血后免疫功能的變化，并針對抗炎和免疫調理治療進行探索，為高血壓腦出血后免疫調節的藥物選擇、用藥方法以及治療的時間窗選擇提供更多的理論依據。

【點睛】本研究對高血壓腦出血患者發病28 d內多個時間點的外周血CD4+、CD8+淋巴細胞變化情況進行了檢測，并與無腦出血的高血壓患者CD4+、CD8+淋巴細胞水平相比較，結果顯示，腦出血發病后，CD4+、CD8+淋巴細胞比例均呈現先降低后升高的趨勢，在發病28 d時恢復至高血壓對照組水平。