乳癌病人血清sB7-H3表達(dá)及其臨床意義

[摘要] 目的

探討乳癌病人血清可溶性人B7同源體3（sB7-H3）表達(dá)及其臨床意義。

方法 采用ELISA法，檢測(cè)106例乳癌病人（乳癌組）和43例健康體檢者（健康組）血清中sB7-H3表達(dá)，并分析乳癌病人血清sB7-H3表達(dá)與病理參數(shù)的關(guān)系。

結(jié)果 乳癌組血清sB7-H3表達(dá)明顯高于健康組，差異有顯著意義（t=8.530，Plt;0.01）;血清sB7-H3最佳診斷截?cái)嘀禐?1.73 μg/L。單因素分析顯示，血清中sB7-H3表達(dá)與乳癌病人術(shù)后的病理分期（pTNM）、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞表達(dá)高低有關(guān)（t=-2.219～2.067，Plt;0.05），而與腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、分子分型等無(wú)關(guān)（Pgt;0.05）。

結(jié)論 血清sB7-H3可能成為篩選乳癌的重要腫瘤標(biāo)志物，高表達(dá)的血清sB7-H3可能與乳癌預(yù)后不良有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 乳房腫瘤;sB7-H3;血清;診斷;病理學(xué)，臨床

[中圖分類號(hào)] R737.9

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼] A

[文章編號(hào)] 2096-5532（2021）03-0361-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2021.57.087

[開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）]

[網(wǎng)絡(luò)出版] https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20210426.1111.003.html;2021-04-26 16：17：22

EXPRESSION OF SERUM SOLUBLE HUMAN B7 HOMOLOG 3 AND ITS CLINICAL VALUE IN BREAST CANCER PATIENTS

YU Chao， ZHOU Xiaofeng， L Zhidong， MAO Yan， HAN Qingxin， WU Li

（Breast Center， The Affiliated Hospital of Qingdao University， Qingdao 266100， China）

[ABSTRACT]Objective To investigate the expression of serum soluble human B7 homolog 3 （sB7-H3） and its clinical va-

lue in breast cancer patients.

Methods ELISA was used to measure the expression of sB7-H3 in the serum of 106 breast cancer patients （breast cancer group） and 43 healthy subjects who underwent physical examination （healthy group）， and the association between serum sB7-H3 expression and pathological parameters was analyzed for breast cancer patients.

Results The breast can-

cer group had significantly higher expression of serum sB7-H3 than the healthy group （t=8.530，Plt;0.01）， and the optimal cut-off value for diagnosis was 21.73 μg/L. The univariate analysis showed that the expression of sB7-H3 in serum was associated with postoperative pathological staging， presence or absence of lymph node metastasis， and expression of tumor-infiltrating lymphocytes （t=-2.219 to 2.067，Plt;0.05）， while it was not associated with tumor size， histological grade， and molecular typing （Pgt;0.05）.

Conclusion Serum sB7-H3 is expected to become an important tumor marker for breast cancer screening， and highly expressed serum sB7-H3 may be associated with the poor prognosis of breast cancer.

[KEY WORDS]breast neoplasms; sB7-H3; serum; diagnosis; pathology， clinical

目前，乳癌已成為全球女性癌癥死亡的第二大原因[1]，并占全球女性癌癥病例總數(shù)的1/4[2]。在中國(guó)，乳癌的致死人數(shù)逐年增加，已成為導(dǎo)致45歲以下女性死亡的主要原因和發(fā)病率較高的女性疾病[3-5]。乳癌早期診斷不理想[6]。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，血清中可溶性人B7同源體3（sB7-H3）在多種癌癥病人中異常高表達(dá)[7-9]，并與腫瘤惡性進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)[10-11]。sB7-H3對(duì)于癌癥診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)可能有重要價(jià)值。本研究探討乳癌病人血清中sB7-H3表達(dá)及其臨床意義，為乳癌早期診斷提供依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 對(duì)象與分組

2018年8月—2019年4月，選取我院收治乳癌病人106例作為研究對(duì)象（乳癌組），均為女性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①自愿參加本次研究;②病歷及術(shù)后病理資料完整;③穿刺及術(shù)后病理診斷為浸潤(rùn)性乳癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)疾病和炎癥性疾病;②術(shù)前有新輔助治療史;③近3個(gè)月有藥物應(yīng)用史。以同期來(lái)我院體檢中心體檢的健康者43例作為對(duì)照組，所有對(duì)象均為女性。乳癌組病人年齡25～76歲，平均（53.42±10.26）歲;對(duì)照組年齡為19～62歲，平均（44.53±11.28）歲。本文研究取得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)和病人知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法

采集受檢者清晨空腹靜脈血5 mL，靜置0.5 h后，以3 000 r/min離心5 min，取血清并將其保存于-80 ℃冰箱內(nèi)備用。應(yīng)用ELISA法測(cè)定標(biāo)本中sB7-H3表達(dá)，試劑盒購(gòu)自江蘇寶萊生物科技有限公司，操作參照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以±s表示，兩組數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析。采用Med Calc 19.0.2軟件繪制ROC曲線。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)" 果

2.1 兩組血清sB7-H3表達(dá)比較

乳癌組、對(duì)照組血清sB7-H3表達(dá)量分別為（26.27±4.21）、（19.44±4.91） μg/L，兩組比較差異有顯著性（t=8.530，Plt;0.01）。

2.2 血清中sB7-H3表達(dá)篩選乳癌的最佳截?cái)嘀?/p>

ROC曲線分析顯示，曲線下面積為0.854（95%CI=0.787～0.907，Plt;0.01）; 最佳診斷截?cái)嘀禐?1.73 μg/L，靈敏度為84.0%，特異度為76.7%，約登指數(shù)0.607。即以血清sB7-H3水平21.73 μg/L作為區(qū)分乳癌和健康人的篩選界值時(shí)，診斷價(jià)值最高。見圖1。

2.3 乳癌病人sB7-H3表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

pTNM分期較高（Ⅲ期和Ⅳ期）的乳癌病人血清中sB7-H3表達(dá)高于分期較低乳癌病人（Ⅰ期和Ⅱ期），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.219，Plt;0.05）。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的病人血清sB7-H3明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-2.205，Plt;0.05）。腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TILS）≤5%的病人sB7-H3表達(dá)高于TILSgt;5%的病人，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.067，Plt;0.05）。而腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、分子分型等病理特征與sB7-H3表達(dá)無(wú)關(guān)（Pgt;0.05）。見表1。

3 討" 論

近年來(lái)，人們致力于與腫瘤的診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)具有較高臨床相關(guān)性的血液生物標(biāo)志物研究[12]。B7-H3為一種表達(dá)于人體各類免疫細(xì)胞膜上的Ⅰ型跨膜蛋白，愈來(lái)愈多研究證實(shí)其具有免疫相關(guān)作用[13]。對(duì)B7-H3生物學(xué)功能的研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3在調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化過(guò)程同時(shí)具有共刺激和共抑制作用[14-16];同時(shí)有研究顯示，B7-H3在特異性和非特異性免疫調(diào)節(jié)中均具有重要意義[17]。但B7-H3的作用機(jī)制仍不明確。有研究顯示，B7-H3與T細(xì)胞上的髓樣細(xì)胞（TREM-）樣轉(zhuǎn)錄物（TLT-2）分子上表達(dá)的受體結(jié)合可增強(qiáng)T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞毒性[18]。但這一觀點(diǎn)并沒有被普遍接受。一些研究人員認(rèn)為，T細(xì)胞上可能有其他潛在受體[19-20]。B7-H3抑制T細(xì)胞活化的相關(guān)機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

有研究顯示，B7-H3在人體體液中的可溶性形式sB7-H3能夠與B7-H3受體結(jié)合。正常人血清，甚至人的成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞的上清液和前列腺分泌物中均可檢測(cè)到sB7-H3的表達(dá)[21-22]，多種疾病病人體內(nèi)檢測(cè)到sB7-H3表達(dá)水平與健康人群不同[23]。對(duì)于sB7-H3的來(lái)源，絕大多數(shù)研究認(rèn)為，其是通過(guò)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）切割單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞、活化的T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜上的B7-H3而釋放出來(lái)，其支持證據(jù)是MMP抑制劑能夠增強(qiáng)B7-H3在細(xì)胞膜上的表達(dá)[21]。

關(guān)于sB7-H3的生物學(xué)功能，有研究認(rèn)為在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中，外周血中的游離sB7-H3可以競(jìng)爭(zhēng)性地與T細(xì)胞表面上的B7-H3受體結(jié)合，阻斷B7-H3的T細(xì)胞活化作用，從而具有與B7-H3相反的免疫調(diào)節(jié)功能[24-25]。CHEN等[9]研究結(jié)果顯示，剪切型sB7-H3能夠抑制T細(xì)胞增殖，減少細(xì)胞因子的分泌。

而XIE等[12]研究結(jié)果證明，sB7-H3通過(guò)TLR4/NF-κB途徑促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。提示sB7-H3可能與人體免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，并可能在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

本研究結(jié)果顯示，乳癌組血清sB7-H3表達(dá)明顯高于健康組，提示血清sB7-H3檢測(cè)可作為乳癌篩選和輔助診斷的潛在標(biāo)志物;同時(shí)對(duì)血清sB7-H3與臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析顯示，血清中sB7-H3表達(dá)與乳癌病人pTNM分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TILS表達(dá)高低等有關(guān)，而與年齡、腫瘤大小及組織學(xué)分級(jí)等無(wú)關(guān)，sB7-H3高表達(dá)可能提示乳癌分期更高，預(yù)后更差。

大量研究認(rèn)為，TILS是人體對(duì)腫瘤抗原進(jìn)行免疫反應(yīng)的標(biāo)志，其具有潛在預(yù)測(cè)乳癌病人預(yù)后的價(jià)值[26-27]。尤其在三陰性與Her-2陽(yáng)性乳癌病灶中TILS浸潤(rùn)程度較高，可能與這兩種類型腫瘤的免疫原性相對(duì)較高有關(guān)[28]。值得注意的是，本研究結(jié)果顯示，血清sB7-H3表達(dá)與乳癌組織中TILS水平有關(guān)，提示sB7-H3可能參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞對(duì)乳癌腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)，并有可能抑制T細(xì)胞活化，這與SUN等[25]研究結(jié)果類似。此外有研究發(fā)現(xiàn)，MMP除可能參與切割mB7-H3產(chǎn)生sB7-H3，還介導(dǎo)組成腫瘤微環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)的降解，使乳癌組織間質(zhì)中T細(xì)胞穿透細(xì)胞外基質(zhì)形成的屏障，促進(jìn)其免疫活性[29]，提示血清sB7-H3可能與腫瘤浸潤(rùn)微環(huán)境形成存在某種聯(lián)系。其具體作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，sB7-H3在乳癌病人中高表達(dá)，具有成為篩查乳癌血清標(biāo)志物的良好前景;sB7-H3與乳癌病人術(shù)后病理參數(shù)存在密切相關(guān)性，提示其具有預(yù)測(cè)乳癌病人臨床預(yù)后的潛力。sB7-H3可能通過(guò)抑制B7-H3對(duì)T細(xì)胞的活化功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]LI M Q， LAO Y H， MINTZ R L， et al. A multifunctional mesoporous silica-gold nanocluster hybrid platform for selective breast cancer cell detection using a catalytic amplification-based colorimetric assay[J]." Nanoscale， 2019，11（6）：2631-2636.

[2]BRAY F， FERLAY J， SOERJOMATARAM I， et al. Global cancer statistics 2018： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J]." CA： a Cancer Journal for Clinicians， 2018，68（6）：394-424.

[3]CHEN W， ZHENG R， BAADE P D， et al. Cancer statistics in China， 2015[J]." CA： A Cancer Journal for Clinicians， 2016，66（2）：115-132.

[4]KHAN S I， AUMSUWAN P， KHAN I A， et al. Epigenetic events associated with breast cancer and their prevention by dietary components targeting the epigenome[J]." Chemical Research in Toxicology， 2012，25（1）：61-73.

[5]JIA M M， ZHENG R S， ZHANG S W， et al. Female breast cancer incidence and mortality in 2011， China[J]." Journal of Thoracic Disease， 2015，7（7）：1221-1226.

[6]LUO L， DONG L Y， YAN Q G， et al. Research progress in applying proteomics technology to explore early diagnosis biomarkers of breast cancer， lung cancer and ovarian cancer[J].Asian Pacific Journal of Cancer Prevention： APJCP， 2014，15（20）：8529-8538.

[7]YE Z M， ZHENG Z J， LI X D， et al. B7-H3 overexpression predicts poor survival of cancer patients： a meta-analysis[J]." Cellular Physiology and Biochemistry， 2016，39（4）：1568-1580.

[8]ZHANG G B， XU Y H， LU X D， et al. Diagnosis value of serum B7-H3 expression in non-small cell lung cancer[J]." Lung Cancer （Amsterdam， Netherlands）， 2009，66（2）：245-249.

[9]CHEN W W， LIU P X， WANG Y D， et al. Characterization of a soluble B7-H3 （sB7-H3） spliced from the intron and ana-

lysis of sB7-H3 in the sera of patients with hepatocellular carcinoma[J]." PLoS One， 2013，8（10）： e76965. doi：10.1371/journal.pone.0076965.

[10]MASUDA A， ARAI K， NISHIHARA D， et al. Clinical significance of serum soluble T cell regulatory molecules in clear cell renal cell carcinoma[J]." BioMed Research International， 2014， 2014：396064.

[11]ZHAO L， XIE C， LIU D Q， et al. Early detection of hepatocellular carcinoma in patients with hepatocirrhosis by soluble B7-H3[J]." Journal of Gastrointestinal Surgery： Official Journal of the Society for Surgery of the Alimentary Tract， 2017，21（5）：807-812.

[12]XIE C， LIU D Q， CHEN Q J， et al. Soluble B7-H3 promotes the invasion and metastasis of pancreatic carcinoma cells through the TLR4/NF-κB pathway[J]." Scientific Reports， 2016，6：27528.

[13]WANG L， KANG F B， ZHANG G C， et al. Clinical significance of serum soluble B7-H3 in patients with osteosarcoma[J]." Cancer Cell International， 2018，18：115.

[14]STEINBERGER P， MAJDIC O， DERDAK S V， et al. Mole-

cular characterization of human 4Ig-B7-H3， a member of the B7 family with four Ig-like domains[J]." Journal of Immunology （Baltimore， Md：1950）， 2004，172（4）：2352-2359.

[15]KANG F B， WANG L， JIA H C， et al. B7-H3 promotes aggression and invasion of hepatocellular carcinoma by targeting epithelial-to-mesenchymal transition via JAK2/STAT3/Slug signaling pathway[J]." Cancer Cell International， 2015，15：45.

[16]KREYMBORG K， HAAK S， MURALI R， et al. Ablation of B7-H3 but not B7-H4 results in highly increased tumor burden in a murine model of spontaneous prostate cancer[J]." Cancer Immunology Research， 2015，3（8）：849-854.

[17]LIU F， ZHANG T， ZOU S T， et al. B7-H3 promotes cell migration and invasion through the Jak2/Stat3/MMP9 signaling pathway in colorectal cancer[J]." Molecular Medicine Reports， 2015，12（4）：5455-5460.

[18]PODOJIL J R， MILLER S D. Targeting the B7 family of co-stimulatory molecules： successes and challenges[J]." BioDrugs， 2013，27（1）：1-13.

[19]ZHANG S S， TANG J， YU S Y， et al. Expression levels of B7-H3 and TLT-2 in human oral squamous cell carcinoma[J]." Oncology Letters， 2015，10（2）：1063-1068.

[20]LEITNER J， KLAUSER C， PICKL W F， et al. B7-H3 is a potent inhibitor of human T-cell activation： no evidence for B7-H3 and TREML2 interaction[J]." European Journal of Immunology， 2009，39（7）：1754-1764.

[21]LEE Y H， MARTIN-OROZCO N， ZHENG P L， et al. Inhibition of the B7-H3 immune checkpoint limits tumor growth by enhancing cytotoxic lymphocyte function[J]." Cell Research， 2017，27（8）：1034-1045.

[22]ZHANG G B， HOU J Q， SHI J F， et al. Soluble CD276 （B7-H3） is released from monocytes， dendritic cells and activated T cells and is detectable in normal human serum[J]." Immuno-

logy， 2008，123（4）：538-546.

[23]CHEN L W， ZHANG G B， SHENG S Q， et al. Upregulation of soluble B7-H3 in NSCLC-derived malignant pleural effusion： a potential diagnostic biomarker correlated with NSCLC staging[J]." Clinica Chimica Acta; International Journal of Clinical Chemistry， 2016，457：81-85.

[24]LEE H， KIM J H， YANG S Y， et al. Peripheral blood gene expression of B7 and CD28 family members associated with tumor progression and microscopic lymphovascular invasion in colon cancer patients[J]." Journal of Cancer Research and Clinical Oncology， 2010，136（9）：1445-1452.

[25]SUN J， LAI H J， SHEN D， et al. Reduced sB7-H3 expression in the peripheral blood of systemic lupus erythematosus patients[J]." Journal of Immunology Research， 2017， 2017：5728512.

[26]JIANG J A， JIANG J H， LIU C P， et al. Enhancement of membrane B7-H3 costimulatory molecule but reduction of its soluble form in multiple sclerosis[J]." Journal of Clinical Immunology， 2013，33（1）：118-126.

[27]袁靜萍，袁修學(xué)，閻紅琳. 腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞在乳腺癌腫瘤微環(huán)境中的角色[J]." 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志， 2018，34（12）：1356-1359.

[28]黃佳慧，陳小松，沈坤煒. 腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞在乳腺癌中的研究進(jìn)展[J]." 中華外科雜志， 2015，53（9）：714-717.

[29]COHEN I J， BLASBERG R. Impact of the tumor microenvironment on tumor-infiltrating lymphocytes： focus on breast cancer[J]." Breast Cancer： Basic and Clinical Research， 2017，11. https：//doi.org/10.1.1178223417731565.

（本文編輯 黃建鄉(xiāng)）