七星茶顆粒的薄層色譜鑒別研究

劉春蓉，劉 佳，王亞芳，周艷飛，鐘昆芮，鞏 浩，楊彥平

(1西安雨田農(nóng)業(yè)科技有限公司，西安710075；2北京市獸藥監(jiān)察所，北京102629)

七星茶顆粒是由薏苡仁、稻芽、山楂、淡竹葉、鉤藤、蟬蛻、甘草組方制成的中藥顆粒劑，具有開(kāi)胃消滯、清熱定驚的功效[1]，為 “小兒七星茶顆粒”[2]人轉(zhuǎn)獸產(chǎn)品，原方收載于《中國(guó)藥典》用于治療小兒積滯化熱，消化不良，不思飲食。研究表明其用于治療積滯化熱癥仔豬的治療具有可行性，臨床應(yīng)用安全性好。經(jīng)臨床擴(kuò)大試驗(yàn)，證明在推薦劑量“每公斤飼料加入4.0 g七星茶顆粒，連續(xù)用藥3天”下可有效防治仔豬積滯化熱證。按新獸藥注冊(cè)完成技術(shù)評(píng)審(藥學(xué)部分)并取得新獸藥證書(shū)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布于中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第253號(hào)。

《中國(guó)藥典》中“小兒七星茶顆?！辫b別方法包含山楂、甘草兩味藥材的薄層鑒別，本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)方法[2～5]增加了薏苡仁、鉤藤的薄層鑒別，優(yōu)化了山楂、甘草薄層鑒別條件，方法更簡(jiǎn)便，控制更全面，是產(chǎn)品質(zhì)量控制方法的有益補(bǔ)充。

1 材 料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 HZY-A100 電光分析天平(福州華志科學(xué)儀器有限公司)；AUW220D雙量程電子天平(日本島津)；2F-2三用紫外儀(上海安亭電子儀器廠)；KQ2200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；甲醇、乙醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷、石油醚、甲酸、醋酸、冰醋酸、氨水等均為分析純、試驗(yàn)用水為純化水；硅膠板自制。

1.2 對(duì)照藥材 山楂對(duì)照藥材(批號(hào)﹕121626-201402)、甘草對(duì)照藥材(批號(hào)﹕120904-201212)；薏苡仁對(duì)照藥材(批號(hào)﹕12154-2013)、鉤藤對(duì)照藥材(批號(hào)﹕121254-201301)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

1.3 樣品 七星茶顆粒，每1 g相當(dāng)于原生藥3.461 g；河北地邦動(dòng)物保健科技有限公司中試生產(chǎn)，批號(hào)分別為20140609、20140610、20140611。

2 鑒別方法及結(jié)果

2.1 山楂的鑒別

2.1.1 供試品溶液制備 取七星茶顆粒7 g，研細(xì)，置錐形瓶中，加2%鹽酸乙醇溶液20 mL，浸漬30分鐘，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇5 mL溶解，轉(zhuǎn)移至離心管中，離心，取上清液，揮散至1 mL，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照藥材溶液制備 取山楂對(duì)照藥材1 g，加2%鹽酸乙醇溶液20 mL，超聲30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇5 mL使溶解，轉(zhuǎn)移至離心管中，離心，取上清液，揮散至1 mL，作為對(duì)照藥材溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液制備 取缺山楂的陰性樣品，同供試品溶液制法操作，作為陰性對(duì)照溶液。

2.1.4 薄層條件及結(jié)果 吸取以上三種溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙醚-三氯甲烷-甲酸(5∶5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距8～10 cm，取出，晾干，在105 ℃加熱15 min，趁熱噴以溴酚藍(lán)指示液。日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯兩個(gè)相同的淺黃色斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。

1-山楂對(duì)照藥材；2-供試品20140609；3-供試品20140610；4-供試品20140611；5-陰性對(duì)照

2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙醚-三氯甲烷-甲酸(5∶5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，三批供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯兩個(gè)相同的淺黃色斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖2展距8～10 cm，取出，晾干，在105 ℃加熱15 min，趁熱噴以溴酚藍(lán)指示液。日光下檢視。

1-山楂對(duì)照藥材；2-供試品20140609；3-供試品20140610；4-供試品20140611

2.2 甘草的鑒別

2.2.1 供試品溶液制備 取七星茶顆粒7 g，研細(xì)，加水20 mL，溫?zé)崾谷芙猓靡宜嵋阴フ駬u提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照藥材溶液制備 取甘草對(duì)照藥材0.2 g，加乙醚20 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，棄去濾液，藥渣加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 取缺甘草藥材的陰性樣品，同供試品溶液制法操作，作為陰性對(duì)照溶液。

2.2.4 薄層條件及結(jié)果 吸取以上三種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一1%氫氧化鈉硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距16～20 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。三批供試品在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖3。

1-甘草對(duì)照藥材；2-供試品20140609；3-供試品20140610；4-供試品20140611；5-陰性對(duì)照

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一1%氫氧化鈉硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距16～20 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。三批供試品在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的熒光斑點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)圖4。

1-甘草對(duì)照藥材；2-供試品20140609；3-供試品20140610；4-供試品20140611

2.3 鉤藤的鑒別

2.3.1 供試品溶液制備 取七星茶顆粒10 g，研細(xì)，加水30 mL，溫?zé)崾谷芙?，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9，用三氯甲烷振搖提取3次，每次25 mL，合并三氯甲烷液，揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 對(duì)照藥材溶液制備 取鉤藤對(duì)照藥材1 g，加濃氨試液1 mL潤(rùn)濕，加三氯甲烷20 mL，超聲處理20 min，濾過(guò)，濾液用3%硫酸溶液振搖提取3次，每次20 mL，合并酸液，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，再用三氯甲烷振搖提取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.3.3 陰性對(duì)照溶液制備 取缺鉤藤藥材的陰性樣品，同供試品溶液制法操作，作為陰性對(duì)照溶液。

2.3.4 薄層條件及結(jié)果 吸取以上三種溶液各15 μL，分別點(diǎn)于同一GF254薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-丙酮(6∶4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距8～10 cm。取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖5。

1-鉤藤對(duì)照藥材；2-供試品20140609；3-供試品20140610；4-供試品20140611；5-陰性對(duì)照

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各15 μL，分別點(diǎn)于同一GF254薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-丙酮(6∶4)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距8～10 cm。取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖6。

1-鉤藤對(duì)照藥材；2-供試品20140609；3-供試品20140610；4-供試品20140611

2.4 薏苡仁的鑒別

2.4.1 供試品溶液制備 取七星茶顆粒5 g，研細(xì)，置分液漏斗中，加水20 mL，搖勻，加乙酸乙酯振搖提取2次，每次15 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.4.2 對(duì)照藥材溶液制備 取薏苡仁對(duì)照藥材1 g，加乙酸乙酯30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.4.3 陰性對(duì)照溶液制備 取缺薏苡仁藥材的陰性樣品，同供試品溶液制法操作，作為陰性對(duì)照溶液。

2.4.4 薄層條件及結(jié)果 吸取以上三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙醚-冰醋酸(83∶17∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距8～10 cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖7。

1-薏苡仁對(duì)照藥材；2-供試品20140609；3-供試品20140610；4-供試品20140611；5-陰性樣品

2.1.5 重復(fù)性試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙醚-冰醋酸(83∶17∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距8～10 cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰在紫外燈(365 nm)下檢視，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖8。

1-薏苡仁對(duì)照藥材；2-供試品20140609；3-供試品20140610；4-供試品20140611

3 討論與結(jié)論

七星茶顆粒處方來(lái)源于人藥《中國(guó)藥典》中“小兒七星茶顆?！?，是由薏苡仁、稻芽、山楂、淡竹葉、鉤藤、蟬蛻、甘草七味藥材提取精制制成的中藥顆粒劑。《中國(guó)藥典》 “小兒七星茶顆?！睂?duì)山楂和甘草進(jìn)行了薄層色譜鑒別。

本研究增加了鉤藤的薄層鑒別方法。對(duì)展開(kāi)劑進(jìn)行了優(yōu)化研究，參照《中國(guó)藥典》2010增補(bǔ)版“小兒七星茶口服液”方法展開(kāi)劑為石油醚(60～90 ℃)-三氯甲烷(3∶7)，其中的三氯甲烷有蓄積毒性，對(duì)人體危害較大，研究中將其更換為丙酮，調(diào)整為石油醚(60～90 ℃)-丙酮(6∶4)，結(jié)果顯示鉤藤對(duì)照藥材及供試品色譜中各對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)分離度好，斑點(diǎn)圓整、無(wú)拖尾，達(dá)到了滿意的分析效果。

研究通過(guò)薄層色譜法對(duì)山楂、甘草、鉤藤、薏苡仁四味藥材進(jìn)行了定性鑒別，結(jié)果表明，所擬定的TLC色譜條件，分離效果佳，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性良好，專屬性強(qiáng)，陰性無(wú)干擾，可用于產(chǎn)品的質(zhì)量控制。