生物堿和黃酮類化合物的分析方法以及相互配伍的研究*

張瀟晗，牛麗穎,2,3，畢曉東,2,3

(1 河北中醫學院，河北 石家莊 050091；2 河北省中藥配方顆粒創新中心，河北 石家莊 050091；3 河北省中藥材品質評價與標準化工程研究中心，河北 石家莊 050091)

生物堿是一類廣泛存在于自然界中的含N多環化合物，主要以結合鹽的形式存在[1]。按植物來源，常見的生物堿有毛茛科生物堿、百合科生物堿、罌粟科生物堿、茄科生物堿等[2]。目前的研究表明某些生物堿在抗腫瘤，抗癌，抗心律失常等的方面具有一定的作用，所以對于生物堿的開發與利用變得尤為重要。黃酮類化合物為植物次代謝產物，廣泛存在于自然界中的具有2-苯基色原酮結構的一類化合物[3]。可用于抗心腦血管疾病，抗炎鎮痛，抗癌，抗腫瘤等多種疾病。近些年來，中藥有效成分的相互配伍在研究中得到了很高的關注。本文主要對生物堿和黃酮類化合物的分析方法，以及兩者之間的配伍進行一定的概括，例如“三物黃芩湯”是比較經典的生物堿類與含有黃酮類化合物中藥成分的著名方劑。本文將從上述幾個方面進行總結歸納。

1 生物堿的分析方法

1.1 薄層色譜法

薄層色譜法(thin-layer chromatography，TLC)是一種常用的雜質檢查、含量測定、藥品鑒定的色譜法。該方法操作簡單，顯色明顯，展開速率快，價格便宜。在儀器自動化方面還存在一些不足，需要耗費大量的人力。但基于上述優點，TCL仍是被廣泛應用的色譜法之一。張睿涵等[4]嘗試了27種展開系統展開，醉馬芨芨草生物堿工業酒精提取部分酸性氯仿萃取段，最后確定V(氯仿):V(甲醇):V(氨水)=11: 1: 1為最佳分離效果，為醉馬芨芨草的成分鑒定、毒性研究提供參考。

1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)是到目前為止，中藥以及中藥復方分析最常用的一種分析方法。HPLC具有高壓，高效，高靈敏度，應用范圍廣，分析速度快，色譜柱可以重復利用等優點。同時由于近年來各種靈敏檢測器的出現，讓HPLC在中藥分析領域變得越來越重要。超高效液相色譜法(ultra performance liquid chromatography，UPLC)是在高效液相色譜法的基礎上出現的，不同的是UPLC的固定相為小顆粒，高性能微粒填料，更加有利于物質的分離。以下是近年來測定中藥中生物堿的一些相關報道。

表1 生物堿類化合物HPLC條件以及文獻來源

1.3 毛細管電泳法

毛細管電泳技術(capillary electrophoresis，CE)是近年來高速發展的一種技術，廣泛的應用于藥物分析領域。毛細管電泳法是依據樣品間各組分的電泳淌度不同，以電場為驅動力的一種分離速度快，柱效高的分析分離技術[12]。王超海等[13]利用高效毛細管電泳法測定苦參中生物堿含量，能夠測定出苦參中所含的苦參堿和氧化苦參堿的含量，生物堿的分離效果比較好。武曦等[14]將毛細管電泳法用于苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、三種苦參生物堿的分離，優化了分離條件。結果表明毛細管電泳法分析速度快，效率高，可作為苦參活性成分檢測新途徑。

1.4 氣相色譜法

氣相色譜法(gas chromatography，GC)，流動相是氣體因此稱為氣相色譜。其分為兩大類，固定相是固體的叫做氣固色譜法，固定相是液體的叫做氣液色譜法。氣相色譜分析速度快，能進行痕量分析，大部分物質都可以檢測。但是氣相色譜的也存在許多缺點，比如不能直接給出定性結果，所以在研究中氣相色譜常與質譜聯用，可得到一個進行復雜有機化合物高效的定性、定量分析工具。劉小波等[15]運用氣相色譜-質譜分析見血青總生物堿，結果顯示可以從見血青總生物堿中檢測出101種成分，具有很大的研究價值。孫化鵬等[16]運用氣質聯用技術分析海南粗榧中三尖杉生物堿類化合物，結果顯示該方法專屬性好、靈敏度高、操作簡單、結果準確可靠，可為海南粗榧中三尖杉生物堿類化合物的分析提供參考。

1.5 質譜聯用技術

質譜法(mass spectrometry，MS)是一種用來鑒定純物質的不可替代的工具之一，它的原理是用高能電子流轟擊原子，使它失去電子，變成一些碎片離子或者分子離子。由于這些離子的相對質量都不同，從離子源出發，在磁場的作用下不同質量的離子到達時間存在差異，記錄結果就可以得到相應的質譜圖。根據質量分析器的不同，質譜儀可分為四極桿質譜儀，飛行時間質譜儀，離子阱質譜儀，傅里葉變換質譜儀等等。根據近年來的文獻報道來看，質譜經常用來與氣相色譜、液相色譜、高效液相色譜等聯用來分析分離一些復雜的藥物體系。閆靜等[17]運用質譜分析中藥馬錢子總生物堿提取物中微量生物堿16-羥基-α-可魯勃林、異番木鱉堿質譜碎裂規律及與結構間的關系。為馬錢生物堿類化合物快速、靈敏分析方法的建立提供了重要依據。

2 黃酮類化合物的分析方法

2.1 薄層色譜法

劉淑等[18]對補肺顆粒進行薄層色譜鑒別。其中對于黃芩的鑒別，以乙酸-水(10:0.9)為展開劑，三氯化鐵乙醇溶液為顯色劑，在日光下與對照品、對照藥材在同一位置顯示同一斑點。吳國華等[19]對蒙藥材黃花黃芩定性定量方法研究。以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10:3:1:2)為展開劑，對7批不同產地黃花黃芩藥材進行薄層色譜鑒別，結果表明七批黃花黃芩薄層色譜與對照品薄層色譜相應位置顯示相同斑點，分離顯色好。

2.2 高效液相色譜法

表2 黃酮類化合物HPLC、UPLC的條件以及文獻來源

2.3 毛細管電泳法

吳明花等[27]利用高效毛細管電泳內標法測定三黃瀉心湯中黃芩苷含量，比較3種三黃瀉心湯不同制備方式樣品中黃芩苷含量差異，最終選擇了以3,5-二硝基苯甲酸為本實驗內標物，實驗效果良好。陳寶龍等[28]采用毛細管電泳法建立山楂藥材黃酮類成分的指紋圖譜，以硼砂水溶液作為基本電解質，利用絡合作用拉大不同成分的淌度差異，使分離度加大，成功建立了CE指紋圖譜，為山楂質量控制提供了研究參考。

2.4 氣相色譜

朱鳳妮等[29]利用高效液相色譜法以及氣質聯用(GC-MS)對江西省6種主要寬皮柑橘黃酮及揮發油成分研究。利用(GC-MC)分離鑒定揮發油組分，結果表明不同品種、部位的橙皮苷含量以及揮發油成分都存在顯著差異。王桂臻等采用GC-MS對黃芪花中的糖類和氨基酸類化學成分進行分析，為黃芪花的資源開發利用提供了有效的參考依據。

2.5 聯用技術

質譜法靈敏度高，分析范圍廣，用量少，可直接分析氣體液體固體等。近年來質譜常與各種色譜聯用，取代色譜儀的多種檢測器，使得對一些化合物的分析更加方便快捷，得到物質的結構信息。林志燕等[30]運用液相色譜-質譜聯用(LC-MS)技術分析8個黃酮類化合物的色譜、質譜特性。結果顯示，該8個黃酮化合物的色譜和質譜行為對于未知結構的黃酮化合物的結構解析具有一定的指導意義。孫東國等[31]采用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質譜技術分析不同產地槐角的共性成分和差異成分，結果表明該方法檢測快速準確，為槐角藥材的道地性提供了依據。侯建波等采用(SPE-LC-MS/MS)同時測定16種黃酮類化合物和阿魏酸，結果顯示該方法取樣量少，操作簡單快捷，可用于蜂蜜中黃酮類化合物的分析。

3 生物堿和黃酮類化合物相互配伍作用分析

在中醫臨床上常用的固定兩對藥的配伍稱之為“對藥”，具有協同以及減毒的作用，是長期的臨床經驗的積累與傳承[32]。本文主要對生物堿和黃酮類化合物的配伍進行分析，選取的苦參和黃芩兩味中藥。經典名方中對于苦參和黃芩的配伍比較典型的有“三物黃芩湯”，該方由黃芩、苦參、干地黃3味藥組成，功效為清熱瀉火，燥濕涼血。主治產后血虧氣虛，四肢煩熱頭不痛者[33]。方中苦參為臣藥，其主要有效成分為苦參堿，氧化苦參堿以及槐果堿。“三物黃芩湯”在臨床上的運用已經非常成熟，但是它的作用原理尚不能用現代科學來解釋。蔡凡等[34]運用高效液相色譜法同時測定三物黃芩湯中苦參堿、氧化苦參堿、氧化槐果堿含量。結果表明采用水煎提取方法，乙腈-水(10:90)，等度洗脫，可使得藥材中有效成分得到了較好提取，為三物黃芩湯的質量控制提供了科學依據。

4 結 語

生物堿作為中草藥中重要的有效成分之一，具有很大的研究意義。生物堿對人體具有特異性的作用機制，適量則具有止痛、催眠等功效，反復過量攝入則會成癮。因此近年來對于生物堿的研究開發更加的深入，有巨大的研發潛力。由于人體不能直接合成黃酮類化合物，近年來黃酮類成分的開發與利用成為研究熱點。隨著分析測定方法的不斷發展，對于藥物的開發和利用更加的準確、快速、便捷，為藥物質量控制以及新藥研究提供很好的思路和依據。