羅勒的提取和抗菌活性研究*

孫丁立，邵 敬，王 森，顧晶晶

(亳州學院中藥學院,安徽 亳州 236800)

羅勒(Ocimumbasilicum)，唇形科羅勒屬藥食兼用芳香植物，其味似茴香，全株小巧，葉色翠綠，芳香四溢，別名九層塔、香花子、蘭香等。總狀花序頂生于莖、枝上，各部均被微絨毛，其莖、葉及花穗均含有芳香油，主要用作調配化妝品、香料等原料及食用香精，嫩葉可食，具有驅風、健胃及發汗作用。全草入藥，治療胃腸脹氣、腸炎腹瀉、外感風寒、瘀腫、風濕性關節炎、蛇咬傷，煎水洗濕疹及皮炎。羅勒味辛甘，性溫，有解毒，活血，疏風解表的功效，可應用于日用品、醫藥保健等多個方面[1]。

目前大部分學者主要研究的是羅勒揮發油及粗提取物的提取方法和抗氧化、抗菌性能[2-3]，而對羅勒化學成分抗菌的研究不深入[4-5]。方茹等[6]對羅勒的揮發油及粗多糖進行了抑菌作用的初步探究，發現揮發油和粗多糖對革蘭氏陽性菌和陰性菌的生長均表現出很好的抑制作用，并且受不同濃度影響會產生明顯的差異。據報道顯示羅勒的水提物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及克雷伯桿菌產生很好的抑菌效果，而羅勒醇提物對霍亂弧菌具有較好的抑菌作用。

近年來，隨著對羅勒的研究不斷深入，對其化學成分和抗氧化、抗菌作用的研究逐漸加深，其臨床的研究價值也引起了科研工作者們的關注。因此本項目對亳州產的羅勒進行各個部位的提取，進行抗菌測試，篩選出抗菌性比較強的提取部位，以期為進一步探索羅勒單體化學成分的抗菌性能提供依據。

1 實 驗

1.1 材 料

羅勒：安徽省亳州市疏毛羅勒(Ocimumbasilicum)。

試劑：乙醇(90%)、蒸餾水、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二甲基亞砜，國藥集團化學試劑有限公司；胰酪大豆胨瓊脂培養基(TSA)和胰酪大豆胨液體培養基(TSB)，北京三藥科技開發公司；醫用生理鹽水。

標準菌株：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙門氏菌(Salmonella)、大腸桿菌(Escherichia coli)。

1.2 儀 器

XSE104電子天平，梅特勒-托利多；4IK3ORA-C型旋轉蒸發器，鞏義予華儀器有限公司；Rephile超純水器，上海樂楓生物科技有限公司；SW-CJ-1F/1FD單人單面垂直送風凈化工作臺，蘇州凈化設備有限公司；PWT-P75B恒溫培養箱，合肥達斯卡特科學器材有限公司；ZEALWAYGR85DA滅菌容器，北京盛科信德科技有限公司；DW-86L338J超低溫保存箱，青島海爾生物醫療股份有限公司。

2 方 法

2.1 供試品的提取及配制

取適量羅勒全草，粉碎，在60 ℃水浴中，通過90%的乙醇-水對羅勒進行浸泡，每24 h提取1次，共3次，合并提取液，減壓濃縮得到總提物。然后采用石油醚，乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，共獲得5個提取部位，分別是總提物部位、石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位和水溶性部位，對其進行三種標準菌株測試，探究其抗菌活性，如圖1所示。

圖1 實驗技術路線

分別稱取上述5個提取部位的待測樣品256 mg，放置在20 mL的無菌離心管內，加入盡量少的二甲基亞砜溶解并加入無菌水至10 mL，得25.6 mg/mL儲備液。分別取4 mL、2 mL、1 mL上述儲備液于20 mL無菌離心管內，對應加入4 mL、6 mL、7 mL無菌水，可得8 mL 12.8 mg/mL、8 mL 6.4 mg/mL、8 mL 3.2 mg/mL，分別取4 mL、2 mL、1 mL上述已配置的3.2 mg/mL溶液于20 mL無菌離心管內，對應加入4 mL、6 mL、7 mL無菌水，分別得8 mL 1.6 mg/mL、8 mL 0.8 mg/mL、8 mL 0.4 mg/mL，分別取4 mL、2 mL、1 mL上述0.4 mg/mL溶液于20 mL無菌離心管內，對應加入4 mL、6 mL、7 mL無菌水，可得8 mL 0.2 mg/mL、8 mL 0.1 mg/mL、8 mL 0.05 mg/mL或按照比例稀釋分別取3.2 mg/mL溶液0.5 mL，分別加入0.5 mL、1.5 mL、3.5 mL無菌水，分別得1 mL 1.6 mg/mL、2 mL 0.8 mg/mL、4 mL 0.4 mg/mL，以此類推。

2.2 測試方法

本實驗結合了濾紙片擴散法和瓊脂培養基涂布法[6-9]的優點，采取的測試方法是：取100 μL待測樣品加入離心管中，然后加入100 μL菌液，混合均勻，涂布在已經固化的瓊脂培養基上。靜置5 min左右，倒置放置，在培養箱中37 ℃下培養16 h左右，觀察菌落生長情況。

3 結果與討論

3.1 羅勒5個提取部位對3種菌的抑制作用

將羅勒5個提取部位的提取物分別按照上述配制方法配置備用，A1、A2分別為總提物12.8 mg/mL、6.4 mg/mL；B1、B2為石油醚提取部位12.8 mg/mL、6.4 mg/mL；C1、C2為乙酸乙酯提取部位12.8 mg/mL、6.4 mg/mL；D1、D2為正丁醇提取部位12.8 mg/mL、6.4 mg/mL；E1、E2水溶性部位12.8 mg/mL、6.4 mg/mL。

按照2.1配置待測樣品和2.2測試方法進行沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑菌測試，平行2次。結果發現，5個提取部位的12.8 mg/mL和6.4 mg/mL提取物對沙門氏菌抑菌效果最為顯著，且乙酸乙酯部位抑菌效果最好，石油醚部位次之，提取物的濃度變化對抑菌效果的影響比較明顯，如圖2所示。

圖2 羅勒各提取部位對沙門氏菌的抑制作用

3.2 不同提取部位的不同濃度對沙門氏菌的抑制影響

5個不同部位的提取物逐一按照12.8 mg/mL、6.4 mg/mL、3.2 mg/mL、1.6 mg/mL、0.8mg/mL、0.4 mg/mL、0.2 mg/mL、0.1 mg/mL、0.05 mg/mL配制溶液，進行沙門氏菌的抗菌活性測試，分別將不同濃度標記在照片上。

3.2.1 不同濃度乙酸乙酯提取部位對沙門氏菌抑菌測試

乙酸乙酯部位結果顯示：與空白對比，乙酸乙酯部位的提取物，對沙門氏菌抑菌效果明顯，12.8 mg/mL時抑菌最好，但是濃度的變化對抑菌效果影響不明顯，如圖3所示。

圖3 不同濃度乙酸乙酯提取部位對沙門氏菌的抑制作用

3.2.2 不同濃度總提取物、石油醚、正丁醇以及水部位對沙門氏菌的抑制影響

圖4 石油醚提取部位對沙門氏菌抑菌測試圖

圖5 總提物部位對沙門氏菌抑菌測試圖

圖6 正丁醇提取部位對沙門氏菌的抑制作用

圖7 水部位對沙門氏菌的抑制作用

與空白對比，石油醚提取部位、總提物部位在12.8 mg/mL時抑菌效果最好，隨著濃度降低，抑菌效果逐漸減弱，如圖4、圖5所示。但正丁醇提取部位、水部位在上述相同情況下抗菌效果比較差，濃度對其抑菌效果較小，如圖6、圖7所示。

4 結 論

羅勒(Ocimumbasilicum)是唇形科羅勒屬藥食兼用芳香植物，其味辛甘，性溫，有解毒，活血，疏風解表的功效，為了開發與利用這一自然資源，我們對羅勒的抗菌效果進行了實驗測試，結果顯示羅勒的5個提取部位對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌均有抑制作用，且抑制效果在天然藥物中較為理想，其中乙酸乙酯提取部位的抗菌效果較優異，石油醚提取部位次之。此外，本課題組在進行抗菌實驗的同時也在進行亳州疏毛羅勒化學成分抗氧化及抗炎能力的研究，希望能為亳州地區羅勒的進一步開發和利用提供參考依據。