分子生物學(xué)技術(shù)在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品中的應(yīng)用分析

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摘要：最近幾年，我國(guó)食品行業(yè)在不斷進(jìn)步和發(fā)展，尤其是轉(zhuǎn)基因食品行業(yè)，給人們帶來(lái)了諸多經(jīng)濟(jì)效益，但是與此同時(shí)也存在一些安全隱患問(wèn)題。現(xiàn)如今，注重檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品成為了重點(diǎn)工作內(nèi)容。在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品中，分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用較為廣泛，且獲得了不錯(cuò)的效果。下文針對(duì)分子生物學(xué)技術(shù)在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品中的應(yīng)用進(jìn)行深入分析，希望可以有效提升檢測(cè)水平，保證轉(zhuǎn)基因食品安全。

關(guān)鍵詞：分子生物學(xué)技術(shù);檢測(cè)應(yīng)用;轉(zhuǎn)基因食品

引言：轉(zhuǎn)基因食品，主要通過(guò)基因工程技術(shù)，把有助于人們的外源基因進(jìn)行轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移到受體生物體中，對(duì)其遺傳特性進(jìn)行改變，獲的原有不具備的特性和品質(zhì)。近幾年我國(guó)非常注重開(kāi)發(fā)與生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因作物。在轉(zhuǎn)基因食品研究過(guò)程中，有關(guān)轉(zhuǎn)基因食品過(guò)敏性、抗生素抗性、有無(wú)毒性等安全問(wèn)題成為了人們關(guān)注的熱點(diǎn)話(huà)題。因?yàn)檗D(zhuǎn)基因食品和人們的身體健康、生態(tài)環(huán)境有著一定的聯(lián)系，我國(guó)應(yīng)頒布了相關(guān)法規(guī)，提出了跟蹤標(biāo)識(shí)轉(zhuǎn)基因食品。而想要滿(mǎn)足該要求，需要不斷優(yōu)化和完善各種基因食品檢測(cè)方法，尤其是分子生物學(xué)技術(shù)，其應(yīng)用廣泛，種類(lèi)較多，包括基因水平檢測(cè)、轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)、翻譯水平檢測(cè)等，有效保證了轉(zhuǎn)基因食品的安全性。

一、基因水平檢測(cè)

轉(zhuǎn)基因食品中，加工原料生物體內(nèi)具有導(dǎo)入的外源DNA，因此可以直接尋找被導(dǎo)入的外源DNA序列。現(xiàn)階段，常見(jiàn)的基因水平檢測(cè)方法有以下幾種：

1.基因芯片法

該種方法融合了諸多種學(xué)科，如計(jì)算機(jī)科學(xué)、化學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、生命科學(xué)、生命信息學(xué)、微電子技術(shù)等。基因芯片，主要是利用微加工、微電子技術(shù)，把大量經(jīng)過(guò)人工設(shè)計(jì)的基因片段，高密度、有序的在玻璃片或者是纖維膜等載體上進(jìn)行排列，進(jìn)而得出信息監(jiān)測(cè)芯片。從本質(zhì)上來(lái)講，其屬于脫氧核糖核酸微陣列[1]。實(shí)際上，該種檢測(cè)方法的原理就是堿基配對(duì)，對(duì)樣品基因進(jìn)行檢測(cè)，利用PCR擴(kuò)增和體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)，把待測(cè)DNA摻入標(biāo)記分子，然后和在芯片中的DNA探針雜交，利用掃描系統(tǒng)，檢測(cè)探針雜交信號(hào)強(qiáng)度情況，通過(guò)計(jì)算機(jī)技術(shù)綜合性分析信號(hào)，便可以對(duì)樣品中的表達(dá)信息、基因序列進(jìn)行獲取，最終進(jìn)行定性和定量。從中可以看出，該種檢測(cè)方法自動(dòng)化程度較高，且還有較高的檢測(cè)效率、較低的檢測(cè)成本等特點(diǎn)。現(xiàn)階段，基因芯片發(fā)被廣泛應(yīng)用到轉(zhuǎn)基因食品定性檢測(cè)和定量檢測(cè)中。

2.2Southern雜交技術(shù)

該種方法主要是通過(guò)對(duì)特異性探針結(jié)合的基因組片斷內(nèi)或者是周?chē)蛄校瑢?shí)施限制性?xún)?nèi)切核酸酶酶切為點(diǎn)作圖，進(jìn)而對(duì)基因在基因組內(nèi)部組織排列進(jìn)行研究，分析過(guò)程涉及到以下幾個(gè)步驟：在待測(cè)樣品中對(duì)DNA進(jìn)行提取，利用限制性?xún)?nèi)切酶，開(kāi)展酶解工作，然后通過(guò)瓊脂糖凝膠電游分離，轉(zhuǎn)移到固相支持無(wú)，利用對(duì)特異性探針的標(biāo)記，結(jié)合在膜上的轉(zhuǎn)基因成分，進(jìn)行雜交反應(yīng)，最后利用放射自顯影技術(shù)或者是利用熒光分析法，對(duì)待測(cè)樣品中靶標(biāo)DNA是否存在進(jìn)行判斷[2]。該種方法應(yīng)用效果良好，可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因成分，但是想要利用該種方法對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行檢測(cè)需要對(duì)轉(zhuǎn)入的外源基因序列進(jìn)行明確，并且待見(jiàn)樣品需要保證一定純度、基因組中需要具有較高轉(zhuǎn)基因成分豐度。

二、轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)

在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品中，最為常用的一種轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)方法為N o r t h e r n 雜 交 技術(shù)，該種技術(shù)原理和上述So r t h e r n 雜 交技術(shù)大致相同，反應(yīng)步驟也基本相同。但是，N o r t h e r n 雜 交 技術(shù)的對(duì)象是mRNA，mRNA是食品中特定外源基因DNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，在提取RNA時(shí)并不用利用限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行消化，可以省去該步驟，直接通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)移到合適的膜上，進(jìn)行交雜檢測(cè)。由于RNA較為活躍，在食品中對(duì)RNA進(jìn)行提取時(shí)非常容易被各種污染源影響，進(jìn)而發(fā)生降解，而其質(zhì)量、含量也和食品完整性、新鮮度相關(guān)，若食品是被深度加工的，那么其RNA加工時(shí)更加容易被降解，因此在檢測(cè)鮮活動(dòng)物、植物性食品時(shí)可以利用該種檢測(cè)技術(shù)[3]。此外，N o r t h e r n 雜 交 技術(shù)雜交信號(hào)的強(qiáng)弱與mRNA豐度之間存在一定的聯(lián)系，若mRNA豐度過(guò)低，這時(shí)需要把其進(jìn)行分離，進(jìn)而增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)。因?yàn)樵摋l件的限制，該種檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用并不是較為廣泛。

三、翻譯水平檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法是常用的一種翻譯水平檢測(cè)方法，其原理是抗原抗體特異性結(jié)合，對(duì)轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，利用自顯影等手段對(duì)信號(hào)強(qiáng)弱進(jìn)行檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法，可以定性檢測(cè)食品中轉(zhuǎn)基因成分，也可以定量分析食品中轉(zhuǎn)基因成分。該種檢測(cè)方法主要有間接法與直接法兩種類(lèi)型，且需要利用到三種試劑，其中包括酶標(biāo)記抗原或抗體、固定相抗原或抗體、酶作用底物。在檢測(cè)過(guò)程中，在固相載體平板微孔中，把抗原或抗體進(jìn)行結(jié)合，在載體表面，結(jié)合待測(cè)溶液特殊抗原或抗體，然后把酶標(biāo)記康球蛋白與抗原結(jié)合，利用酶標(biāo)記物、底物顏色改變這兩種方式，檢測(cè)結(jié)合物，利用最后溶液顏色的深淺開(kāi)展定量分析[4]。該種檢測(cè)技術(shù)特異性較強(qiáng)、靈敏度較高，操作較為簡(jiǎn)單，通量性較高，可以對(duì)很多樣品進(jìn)行同時(shí)。但是該種檢測(cè)方法也有一些不足之處，如果外源基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含量過(guò)低，檢測(cè)能力會(huì)有所降低，并且僅僅適用于檢測(cè)食品原材料，因?yàn)槭称芳庸r(shí)容易出現(xiàn)蛋白質(zhì)降解和失活問(wèn)題。

結(jié)束語(yǔ)：

總而言之，在新時(shí)代背景下，在檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品中分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用是非常重要的，可以保證轉(zhuǎn)基因食品安全。轉(zhuǎn)基因食品和人們的身體健康、經(jīng)濟(jì)效益有著直接的聯(lián)系。最近幾年，人們對(duì)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品技術(shù)要求的提升，當(dāng)下急需發(fā)展低消耗、高效、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)。但是，在具體檢測(cè)中，不同檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)也是不同的，需要不斷完善和優(yōu)化，有時(shí)還需要和其他檢測(cè)方法配合使用進(jìn)行驗(yàn)證。在未來(lái)，隨著科技不斷發(fā)展，將會(huì)研究出更先進(jìn)、更科學(xué)、更多的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品技術(shù)。

參考文獻(xiàn)：

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