冠心病病人DDAH2基因-449G/C多態性對血漿ADMA水平的影響

蘇 銳，白 瑞，邊云飛，肖傳實

冠心病發病過程復雜，目前研究認為內皮功能不全參與冠心病發生發展。內皮功能障礙的主要原因是一氧化氮(NO)生物利用度降低，NO是血管內皮細胞合成的一種有效的生物血管舒張劑[1-2]。非對稱二甲基精氨酸(ADMA)是在甲基化核蛋白水解過程中產生的，通過與L-精氨酸競爭，作為內源性的內皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制劑，導致內皮功能障礙和血管疾病[3-4]。ADMA已證明是心血管疾病的獨立預測因子。二甲基精氨酸二甲基氨基氫化酶2(DDAH2)可促進ADMA代謝，在調節急性炎癥反應中發揮重要作用。本研究分析冠心病病人DDAH2基因-449G/C多態性對血漿ADMA水平的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年12月—2018年12月在我院心內科住院行冠狀動脈造影檢查的412例病人，年齡31～80歲。根據造影結果將分支中任何1支狹窄≥50%的病人作為冠心病組，共212例，男121例，女91例；無狹窄病人200例作為對照組，其中男114例，女86例。同時將冠心病病人根據年齡分組，即31～40歲組、41～0歲組、51～60歲組、61～70歲組、71～80歲組。各組性別比較，差異無統計學意義(P>0.05)。所有病人均簽署知情同意書。冠心病根據1979年世界衛生組織制定的缺血性心臟病診斷標準，同時行冠狀動脈造影，將冠狀動脈管腔狹窄程度≥50%確診為冠心病。

1.2 觀察指標

1.2.1 冠狀動脈造影 經橈動脈進行兩個或兩個以上體位投照，結果由兩位專業介入醫師評定。

1.2.2 DDAH2基因-449G/C多態性分析 通過聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)技術檢測兩組DDAH2基因-449G/C多態性。詳見圖1。

圖1 DDAH2基因的SNPrs805305位點酶切產物電泳圖

1.2.3 ADMA水平測定 抽取所有病人晨起空腹肘靜脈血5 mL，將血標本進行離心，取上清血漿，在-20 ℃保存，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血漿ADMA水平。

2 結 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗 DDAH2基因-449G/C多態性基因頻數分布采用χ2 檢驗，結果符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=2.981，P>0.05)。

2.2 兩組DDAH2基因-449G/C多態性位點基因型及等位基因頻率 冠心病組CG、GG基因型頻率及G等位基因頻率高于對照組。詳見表1。

表1 兩組DDAH2基因-449G/C多態性位點基因型及等位基因頻率 單位：例(%)

2.3 兩組血漿ADMA水平比較(見表2)

表2 兩組血漿ADMA水平比較(±s) 單位：μmol/L

2.4 冠心病病人DDAH2基因多態性對ADMA水平的影響 不同DDAH2基因型之間ADMA呈增加趨勢，ADMA在GG型中含量最高(0.517±0.090)μmol/L，在CC型中含量最低(0.316±0.080)μmol/L，CG型為(0.461±0.012)μmol/L。詳見圖2。

圖2 DDAH2基因多態性對冠心病病人ADMA水平的影響

2.5 冠心病病人血漿ADMA水平與年齡的關系 冠心病組血漿ADMA水平與年齡呈正相關(r=0.479，P<0.05)。詳見圖3。

圖3 冠心病病人血漿ADMA水平與年齡的關系

3 討 論

血管內皮細胞產生的NO是重要的內源性血管舒張因子，而ADMA是精氨酸類似物，是eNOS內源性競爭性抑制劑。DDAH可將ADMA水解為瓜氨酸和二甲胺，是一種具有分解代謝ADMA的胞質蛋白酶，可調節血漿ADMA水平。ADMA水平升高導致血管內皮細胞產生的NO含量降低，進而導致血管內皮功能紊亂、血小板聚集、白細胞和單核細胞在血管壁聚集、血栓形成，促進動脈粥樣硬化發生發展[5-6]。血漿ADMA水平升高參與冠狀動脈粥樣硬化的眾多環節[7]，伴有心血管危險因素(包括高血壓、高脂血癥、吸煙、糖尿病和高同型半胱氨酸血癥)病人均表現為NOS生物活性降低，ADMA升高是冠狀動脈粥樣硬化的危險因素[2-3]。本研究結果顯示，冠心病病人血清ADMA水平較對照組增高。

DDAH2主要存在于血管內皮細胞，血管內皮細胞是eNOS表達的部位。DDAH2定位于6p21.3，該區域包含多個參與免疫和炎癥反應的基因，與自身免疫性疾病易感性有關。DDAH2在ADMA代謝和心血管疾病中的作用存在爭議。相關研究表明，DDAH2基因變異與血清ADMA水平顯著相關[8-10]。本研究分析冠心病病人DDAH2基因-449G/C多態性對血漿ADMA水平的影響。結果顯示：攜帶DDAH2基因+GG基因型冠心病病人血漿ADMA水平較高。DDAH2基因-449G/C多態性與多種心腦血管疾病有關，包括2型糖尿病、高血壓、腦出血和休克等。DDAH2不僅直接影響血漿ADMA水平，且NO參與細胞分化或在細胞周期調控過程中發揮重要作用。但有研究顯示，DDAH2多態性與冠心病風險無關[10-11]。總之，DDAH2基因遺傳多態性(-449G/C，rs805305)與冠心病病人血漿ADMA水平有關。隨著年齡增長，冠心病發病率增高，且病情加重，尤其是男性50歲或女性60歲之后，冠狀動脈粥樣硬化發展迅速[12-13]。本研究結果表明，冠心病病人血漿ADMA水平隨著年齡增加而逐漸升高，表明血漿ADMA水平可作為冠狀動脈粥樣硬化的新型標志物。