2020年新疆部分地區豬瘟病毒抗體檢測及分析

孫瓊飛 王紫陽 張小玉 黨瑞瑩 常軍帥 屈勇剛*李 巖

（1石河子大學動物科技學院，新疆石河子 832003；2動物疾病防控兵團重點實驗室，新疆石河子 832003；3新疆生產建設兵團畜牧獸醫工作總站，新疆烏魯木齊 830063）

豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的家豬和野豬的一種急性、烈性、接觸性傳染病，是危害世界養豬業最嚴重的傳染病之一，被世界動物衛生組織（OIE）列為必須報告的動物疫病之一[1]，被我國列為一類動物傳染病。目前國內受非洲豬瘟疫情的影響，中國的生豬存欄量受到較大影響。豬瘟的防控工作，也是重中之重。通過豬瘟疫苗免疫措施的實施，我國基本控制了豬瘟的大范圍發病。但在生產中，由于各樣的影響因素，豬瘟免疫失敗現象時常發生，造成非典型性和隱性感染豬的存在。因此，通過免疫抗體水平監測，制定合理的免疫程序，對提高疫苗免疫效果具有重要意義。為了解2020年全年新疆部分地區CSFV抗體水平，本試驗選擇烏蘇、庫車、石河子、雙河、塔城、克拉瑪依等6個地區的18個規模化豬場進行豬瘟病毒抗體檢測與分析，以期為新疆地區規模化豬場的豬瘟免疫防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

血液樣品隨機采自于烏蘇（A）、庫車（B）、石河子（C）、雙河（D）、塔城（E）、克拉瑪依（F）等6個地區的18個規模豬場，共采集血樣1 085份。其中大型規模化豬場4個，采集血清樣品557份；中型規模化豬場8個，采集血清樣品392份；小型規模化豬場6個，采集血清樣品136份。

1.2 材料與儀器

豬瘟病毒（CSFV）抗體檢測試劑盒購自北京IDEXX公司，自動酶標儀購自美國BioTek公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品采集

豬只前腔靜脈部位消毒，用一次性針管，從消毒部位刺入，采集血液3～5 mL，經室溫靜置，待血液凝固血清析出后，按照順序吸取1 mL血清逐份轉入滅菌后1.5 mL的離心管中，逐管編號，必要時經4 000 r/min的轉速離心10 min，-20℃保存備用。

1.3.2 間接ELISA檢測法

按照CSFV的ELISA抗體檢測試劑盒說明書要求進行操作。使用前，試劑盒所有組分恢復到18～26℃。將陰性對照、陽性對照、1∶1稀釋的待檢血清樣品（50 μL樣品血清加50 μL稀釋液）對應加入酶標板，震蕩均勻后放入18～26℃的恒溫箱孵育2 h，用洗滌液洗3次，扣板除去殘留液體，加入酶標抗體，放入18～26℃的恒溫箱中孵育30 min，再用洗滌液洗3次，扣板除去殘留液體后，加入底物溶液，避光放入18～26℃的恒溫箱，10 min后加入終止液終止反應，使用酶標儀于450 nm波長測定吸光度值，并進行結果分析。

1.3.3 結果判定

試驗有效性判定：陰性對照OD450值（NCX）＞0.500，陽性對照OD450值（PCX）阻斷率（%）＞50%。阻斷率（%）＝100×（陰性對照平均OD450nm值－樣品OD450nm值）/陰性對照平均OD450nm值。若被檢樣品阻斷率≤30%，該樣品為豬瘟病毒抗體陰性；若被檢樣品阻斷率≥40%，該樣品為豬瘟病毒抗體陽性；若被檢樣品阻斷率在30%～40%，該樣品判為可疑，需要重新檢測。變異系數CV＝（標準差/平均數）×100%。若CV≤40%，則抗體水平穩定，免疫效果良好；若40%＜CV≤60%，則抗體水平一般；若CV＞60%，則抗體水平差異性大，整齊度不好，需要調整免疫程序[2]。

1.3.4 試驗數據分析

用SPSS 20.0對所獲數據進行統計學分析與判定。

2 試驗結果與分析

2.1 不同地區規模化豬場豬瘟抗體水平

6個地區規模化豬場血清共1 085份，平均抗體合格率為83.59%，平均阻斷率為（66.99±25.09）%，離散度為37.45%。6個地區規模化豬場（A、B、C、D、E、F） 的抗體合格率分別為 92.86%、81.62%、82.93%、70.00%、70.73%和93.75%。A、B、C、D、E、F等6個地區規模化豬場抗體合格率高于國家規定標準（70%），但E場離散度比較大。使用SPSS軟件進行方差分析顯示A、B、C、D、E地區規模化豬場之間差異顯著（P＜0.05），見表1。

表1 新疆部分地區規模化豬場豬瘟病毒抗體水平檢測結果

2.2 不同規模化豬場豬瘟抗體水平

不同規模化豬場豬瘟抗體水平見表2。小、中、大型規模化豬場抗體合格率為70.59%、83.42%和86.54%。小型規模化豬場和大型規模化豬場抗體水平差別較大，其中大型規模化豬場抗體合格率為86.54%，小型規模化豬場的抗體合格率剛剛超過國家標準，為70.59%。小、中、大型規模化豬場豬瘟抗體阻斷率分別為（56.45±25.18）%、（65.77±25.11）%和（70.70±23.91）%。

表2 不同規模豬群豬瘟免疫抗體檢測結果

3 討論

3.1 新疆部分地區免疫情況

2020年新疆烏蘇、庫車、石河子、雙河、塔城、克拉瑪依6個地區，不同規模化豬場豬瘟免疫效果良好，均超過了國家規定標準。但不同地區豬瘟抗體水平差別較大（70.00%～93.97%）。豬瘟疫苗免疫抗體平均阻斷率和變異系數是綜合評估豬瘟疫苗免疫效果的2個重要參數，通過對檢測數據的綜合分析可以幫助豬場及時發現豬群免疫中可能存在的漏洞并制訂相應的優化改進方案[3]。馬曉艷等[4]對新疆的生豬進行豬瘟免疫抗體檢測，發現豬瘟抗體平均陽性率為75.33%。劉鴿等[5]對新疆北部地區的生豬進行豬瘟病毒抗體檢測，結果豬瘟抗體陽性率為89.89%。谷思穎等[6]對新疆石河子、昌吉、塔城、伊犁、巴州等5個地區的豬場進行豬瘟抗體檢測，結果豬瘟抗體陽性率為84.11%。張家瑞等[7]對新疆巴州、伊犁、塔城、阿克蘇、奎屯、石河子等6個地區的豬場進行豬瘟病毒抗體檢測，結果豬瘟抗體陽性率為85.02%。通過分析2018—2020年新疆部分地區豬瘟抗體水平發現，2020年豬瘟抗體水平低于前2年水平，應根據實際情況查找具體因素，而制定合理的措施，提高豬群豬瘟抗體水平。從抗體水平和變異系數結果來看，A、B、C、F地區豬群的抗體水平穩定，免疫效果良好；E地區抗體水平偏低，變異系數較大，發生疫情的風險較大，建議查找具體原因，加強豬瘟免疫防控的力度。

3.2 不同規模養豬場的免疫情況

根據檢測結果可以發現，豬瘟病毒的抗體水平高低與養豬的規模有較大關系，大型規模化養豬場的豬瘟疫苗免疫合格率和變異系數均高于小型規模化養豬場的免疫水平。在實踐調查中發現大型規模化養豬場，有相對完善的免疫預防體系，有健全的人員培訓制度，人員在生物安全防控時，往往表現得更加積極，能主動配合各項任務，保證消毒的效果，往往更有利于豬瘟的防控和凈化。在飼養管理方面能做到合理飼喂，保證豬群整體均勻度，能給豬群營造一個安全和干凈的環境，減少豬群應激反應的發生，減少免疫失敗。大型規模化養豬場花費大量的物力和財力，有專業的基礎獸醫負責場區豬群的防疫工作，了解豬群的抗體水平，制定科學的疫苗免疫措施。大型規模化養豬場在疫苗購買和使用時，會更加注重疫苗的免疫效果。在疫苗運輸階段，往往按照嚴格的冷鏈運輸，保證疫苗的效價。中、小型規模化養豬場雖然免疫效果達到國家標準，但應該積極學習大型規模化養豬場科學的飼養管理制度、嚴格的生物安全理念、完善的人員培訓體系、科學的疫苗免疫措施。豬瘟的防控依舊要靠疫苗免疫，監測抗體水平依然是豬瘟防控的重要手段，及時做好豬瘟抗體檢測，及時發現問題，及時補免或改進免疫方案，確保新疆養豬業的安全生產。