乳腺癌超聲征象與CRP、VEGF-C、CD34表達的相關性研究

張愛紅，趙曉歡，申國升

(衡水市中醫醫院功能科，河北 衡水 053000)

近年來，乳腺癌患者的發病率呈逐年升高趨勢[1]。有研究報道，乳腺癌的發病率在全球腫瘤疾病中居首位[2]。目前認為乳腺癌的危險因素主要包括家族史、遺傳、生殖因素、不良生活習慣以及乳腺增生性疾病[3]。據統計，2015年中國乳腺癌發病病例約有26.9萬，死亡病例7.0萬，分別占女性腫瘤發病的15%和死亡的7%，嚴重威脅著女性的健康[4]。乳腺癌患者的臨床分型主要包括團塊型、結節型、導管型、囊腫型、彌漫型等。多普勒超聲檢查是臨床診斷乳腺癌的重要方法之一，不同的乳腺癌類型具有特異的超聲影像學特征[5-6]。血管內皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor C，VEGF-C)與腫瘤患者的淋巴管生成以及淋巴結轉移密切相關。C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)在炎癥反應的發生發展中發揮重要調節作用[7]。免疫組織化學分子CD34對腫瘤細胞的浸潤具有一定提示作用[8]。本研究主要分析乳腺癌超聲征象與CRP、VEGF-C、CD34表達的相關性，為乳腺癌的診斷以及預后提供科學依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年6月至2019年5月于衡水市中醫醫院就診的120例乳腺癌患者為乳腺癌組，年齡35～49歲，平均(42.9±2.3)歲；體質指數23～24 kg/m2，平均(23.7±3.0)kg/m2；腫瘤類型：浸潤性小葉癌16例，浸潤性導管癌89例，黏液腺癌15例；腫瘤轉移情況：腋下淋巴結轉移59例，未轉移61例；腫瘤最大徑≥2 cm 62例，最大徑<2 cm 58例。選取同期健康體檢者120例作為正常對照組，年齡34～48歲，平均(42.4±2.1)歲；體質指數23～25 kg/m2，平均(23.4±3.5)kg/m2。兩組受試者的年齡、體質指數比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究獲得衡水市中醫醫院倫理委員會批準，所有受試者均簽署了知情同意書。

1.2納入與排除標準 納入標準：①乳腺癌患者均經病理學診斷符合《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范(2015版)》[9]中的診斷標準；②乳腺癌患者為首次發病；③正常對照組的血細胞計數、肝腎功能、血脂等均正常；④乳腺癌患者的病理分期為Ⅱ～Ⅲ期。排除標準：①復發轉移的乳腺癌患者；②乳腺急性炎癥期患者；③具有精神疾病或存在認知功能障礙者；④合并其他類型惡性腫瘤者。

1.3方法

1.3.1超聲檢查 兩組患者分別進行乳腺超聲檢查，采用超聲儀(荷蘭PHILIP，HDI3000)進行掃描，超聲頻率設定為5～12 MHz，囑患者取平臥位，首先對患者的乳頭、乳暈進行掃描，其次按照由內而外、自上而下的順序進行乳腺掃描，觀察乳腺病灶部位的大小、邊界、鈣化以及血流情況。同時分析血流分級以及動力學參數最大流速(maximum velocity，Vmax)和阻力指數(resistance index，RI)。依據Adler半定量方法進行血流特征分級：病灶內未發現血流信號為0級；病灶部位有1～2處點狀出血點為Ⅰ級；病灶部位發現1條主要血管，2～3條小血管，中量血流信號為Ⅱ級；患者病灶內發現4條以上血管并相互貫通為Ⅲ級[10]。超聲分別由兩名高年資住院醫共同檢測。

超聲造影檢查：完成以上超聲檢查后，切換為低機械指數造影模式，在患者平靜呼吸狀態下，經肘靜脈注射1.5 mL微泡混懸液，在120 s內完成超聲影像獲取。分別計算峰值強度(maximum intensity，Imax)、達峰時間(time to peak，TTP)、平均渡越時間(mean transfer time，mTT)、Imax/TTP以及流出時間(washout time，WT)。

1.3.2CRP、VEGF-C、CD34檢測 兩組患者均采集肘靜脈血4 mL，以離心半徑15 cm，3 500 r/min離心15 min，離心溫度設定為18～26 ℃，采用酶聯免疫吸附法檢測CRP水平，CRP試劑盒購自上海酶聯免疫生物有限公司(批號：20160322)，操作流程嚴格按照產品說明書進行。

對乳腺癌患者的病灶部位以及病灶2～3 cm外的癌旁組織進行活組織檢查，采用免疫組織化學法檢測VEGF-C以及CD34，人VEGF-C以及CD34多克隆抗體試劑購自上海羅氏制藥有限公司(批號：20160311、20160103)，腫瘤細胞質內出現棕黃色顆粒物質，且染色細胞比例5%～50%為VEGF-C、CD34陽性，染色細胞比例50%以上為VEGF-C、CD34強陽性[8]。

1.4觀察指標 ①分析乳腺癌患者的超聲特征，包括邊界清晰程度、內部鈣化情況以及內部血流信號。②比較兩組Imax、TTP、mTT、Imax/TTP、WT及CRP水平的差異。③比較乳腺癌患者癌組織和癌旁組織VEGF-C、CD34的陽性表達情況。④分析乳腺癌患者超聲特征指標與CRP、VEGF-C、CD34表達的相關性。

2 結 果

2.1乳腺癌患者的超聲特征分析 乳腺癌患者的超聲影像學特征分析顯示，邊界清晰54例，邊界不清或存在毛刺66例，內部鈣化49例。乳腺癌患者血流信號主要以Ⅱ～Ⅲ級為主，見圖1。

圖1 乳腺癌患者的超聲特征(1a為超聲模式，1b為血流模式)

2.2兩組超聲特征和CRP水平比較 乳腺癌組患者血流分級Ⅱ～Ⅲ級的比例、Vmax、Imax及CRP水平高于正常對照組，RI、Imax/TTP、WT低于正常對照組(P<0.01)；兩組mTT、TTP比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.3乳腺癌患者癌組織和癌旁組織VEGF-C、CD34陽性表達的比較 乳腺癌患者癌組織VEGF-C、CD34陽性表達比例顯著高于癌旁組織(P<0.01)，見圖2、表2。

VEGF-C：血管內皮生長因子-C:2a：癌組織VEGF-C陽性；2b:癌旁組織VEGF-C陽性；2c:癌組織CD34陽性;2d:癌旁組織CD34陽性

表2 乳腺癌患者癌組織和癌旁組織VEGF-C、CD34陽性表達的比較 [例(%)]

2.4乳腺癌患者超聲指標與CRP、VEGF-C、CD34的相關性 相關性分析結果顯示，乳腺癌患者超聲血流分級、Vmax、Imax與CRP、VEGF-C、CD34的表達呈正相關(P<0.05)，超聲RI、Imax/TTP、WT與CRP、VEGF-C、CD34的表達呈負相關(P<0.05)，見表3。

表3 乳腺癌患者超聲指標與CRP、VEGF-C、CD34的相關性分析

3 討 論

乳腺癌早期癥狀不典型，當患者因臨床癥狀就診時，多數已失去最佳治療機會，所以進行早期識別、早期干預、早期治療具有重要的臨床意義，且早期發現乳腺癌的惡變對于患者的治愈具有重要影響。早期識別干預乳腺癌患者的良惡性可以提高患者的生命質量，顯著降低50～69歲女性患者的死亡率。研究顯示，腫瘤疾病的發生、發展與新生血管的形成密切相關[11]。有研究顯示，腫瘤細胞的發生、發展主要取決于腫瘤細胞對營養物質以及氧氣的獲取量[12-13]。

以往研究顯示，CD34主要存在于內皮細胞，與內皮細胞有效結合后，可顯著增加血管內皮細胞的化學趨化性[14]。CD34通過促進血管內皮細胞的分裂與出芽生長，使新生血管形成，導致腫瘤進展。在乳腺癌的進展過程中，VEGF-C水平較低提示腫瘤組織的血供較差，腫瘤組織的生長速度減緩或出現壞死；在乳腺組織的增殖過程中，腫瘤的血供受多種因子以及環境因素的影響[15]。對乳腺癌組織分子水平的研究顯示，乳腺癌組織的微血管變化與成纖維細胞生長因子、Tat作用蛋白30、Toll樣受體4、缺氧誘導因子-1α顯著相關[16]；乳腺癌的疾病進展除受微血管的影響外，還與病灶部位的炎癥反應水平有關，而腫瘤細胞對內皮細胞的損傷作用間接影響CPR水平[17-18]。

本研究結果顯示，與正常對照組相比，乳腺癌組血流分級Ⅱ～Ⅲ級的比例、Vmax、Imax及CRP水平升高，RI、Imax/TTP、WT降低。有研究認為，在乳腺癌病灶部位，隨著患者的局部毛細血管密度的降低，其血流速度以及血流分級情況顯著下降，血供不足，對病灶部位的腫瘤細胞浸潤、增殖以及分化有顯著抑制作用，提示腫瘤病灶部位血供不足對治療效果的評價具有重要作用[19]。有研究報道，乳腺癌患者血流信號與治療效果顯著相關，隨著病灶部位血流信號的顯著下降，治療效果顯著提升，腫瘤的遠處播散風險也隨之下降[20]。

VEGF-C主要反映患者病灶部位的血管密集程度。有研究指出，乳腺癌患者病灶部位腫瘤細胞的侵襲、轉移甚至惡化均與血管密度顯著相關[21]。隨著病灶部位血管密度的增加，其惡化程度以及遷移風險顯著增加[22]。而CD34陽性水平與乳腺癌患者的腫瘤浸潤情況顯著相關。本研究結果顯示，乳腺癌患者癌組織VEGF-C、CD34陽性表達比例高于癌旁組織；乳腺癌患者的超聲特征與CRP、VEGF-C、CD34顯著相關(P<0.05)。而VEGF-C、CD34在病理學中對乳腺癌患者的診斷已得到明確的證實[23]。但本研究也存在一定的局限性，如樣本量較少，在組織學診斷過程中存在采樣的差異性，還有待大樣本深入研究。

綜上所述，乳腺癌患者的超聲影像特征與CRP、VEGF-C、CD34顯著相關，超聲對乳腺癌患者的疾病進展具有重要的輔助診斷意義。