表柔比星對人三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞體外影響分析

林嚇華

(莆田市第一醫院，福建 莆田 351100)

三陰性乳腺癌是治療難度較高的乳腺癌類型，針對該病患者進行病理檢查時，可見檢查指標中PR、ER、HER-2皆顯示為陰性，因此得名。采用常規靶向治療以及內分泌治療無法達到預期療效，癌細胞MDA-MB-231敏感性較低，患者通常預后較差，常見癌癥早期復發轉移。相關研究認為，三陰性乳腺癌呈現異質性特點，對其進行精準分型可促進有效治療[1]。表柔比星具有抗腫瘤功效，為抗生素類藥物，該藥用藥后在DNA核堿對中嵌入，對癌細胞轉錄過程進行干擾，導致mRNAs無法順利形成，從而對合成RNA與DNA的過程進行抑制。該藥還可抑制拓撲異構酶Ⅱ[2]。本文從2020年11月-2021年12月我院收治的三陰性乳腺癌患者中采集MDA-MB-231細胞樣本，進行表柔比星藥效觀察，分析藥物對此種癌細胞的體外影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取人三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞樣本，進行表柔比星用藥，設為觀察組，另設置陰性對照組進行對照觀察。

1.2 方法

(1)藥物：表柔比星(廠商：輝瑞制藥有限公司；批準文號：國藥準字H20000496；規格：10mL)。(2)儀器設備：使用RPMI-1640培養基，DAB顯色試劑盒等設備。細胞株與3111型二氧化碳細胞培養孵化箱等。根據試驗需要配制相關溶液。(3)進行細胞培養，通過細胞傳代和凍存、復蘇和培養，獲取所需樣本。(4)分析MDA-MB-231細胞在表柔比星作用下產生的生長過程變化。實施SRB檢測，觀察細胞生長情況。使用96孔板消化離心接種MDA-MB-231細胞，用藥后第1～3天分析細胞抑制率，1次/d，觀察癌細胞生長受到的藥物抑制影響。(5)從MDA-MB-231細胞中選取數對生長期細胞，舍棄原有培養液，使用0.25%濃度胰蛋白酶進行消化處理，促使癌細胞收縮變化為近圓球形，然后將消化液吸盡，通過適量RPMI-1640培養基吹打和離心機處理，進行完全培養基重懸細胞添加，實施細胞計數，進行細胞懸液濃度調整和細胞接種觀察等，計算IC50值(半抑制濃度)。

1.3 觀察指標

癌細胞抑制作用：針對MDA-MB-231細胞進行SRB檢測，選取1d、2d和3d分別作為檢測時間節點，觀察半抑制濃度。

多因素分析：分析半抑制濃度和作用時間的相關性。

DAB染色分析：實施DAB染色和光密度檢驗，分析表柔比星對癌細胞抗原的影響。

細胞侵襲轉移能力變化分析：進行穿模細胞計數，分析藥物對細胞侵襲轉移能力的抑制影響。

1.4 統計學方法

采用SPSS 24.0分析三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞數據，計量資料(藥物半抑制濃度、光密度檢測、細胞侵襲能力檢測)以均數±標準差表示，t檢驗，計數資料以率(%)表示，卡方檢驗，P<0.05則差異有統計學意義。

2 結果

2.1 表柔比星對MDA-MB-231細胞的抑制作用

采用SRB檢測法，分析表柔比星用藥后MDA-MB-231細胞受到的抑制影響。分別進行1d、2d和3d檢測，1d濃度為2.830μmol/L；2d濃度為1.093μmol/L；3d濃度為0.741μmol/L。藥物半抑制濃度與時間發展負相關(P<0.05)。見表1。

表1 半抑制濃度在不同時間內表現

2.2 多因素分析

檢測結果顯示，表柔比星可對癌細胞產生顯著的增值抑制作用，此種抑制作用存在濃度、時間依賴性。具體分析結果如下。見表2。

表2 半抑制濃度與時間相關性

2.3 DAB染色分析

通過DAB染色分析可知，乳腺癌細胞Ki-67可見明顯表達，表柔比星作用下細胞體積增大，染色強度顯著降低，該結果表明Ki-67抗原表達減弱。實施光密度檢測，顯示表柔比星組光密度為(0.254±0.005)，陰性對照樣本為(0.297±0.010)，組間差異有統計學意義(P<0.05)。

2.4 細胞侵襲轉移能力變化

表柔比星組穿模細胞計數為(39.29±15.89)，陰性對照組為(156.53±12.74)，組間差異顯著(P<0.05)。

3 討論

所謂三陰性乳腺癌，是指孕激素和雌激素受體、人表皮生長因子受體2同時顯示為陰性，上述三種受體均為陰性乳腺癌亞型。三陰性乳腺癌以年輕女性患者為主，低于40歲女性發病風險較高。相關調查顯示，乳腺癌患者中12%～17%為三陰性乳腺癌，在三陰性乳腺癌患者中20%患者可見BRCA突變[3]。與其他乳腺癌相比，該病以低分化為主，較易發生淋巴結轉移、遠處復發，患者病死率相對較高。該病屬于特異性疾病，較之常規乳腺癌類型治療難度顯著增高，難以通過常規靶向治療、激素治療等進行有效治療，通常采用化療手段進行全身治療，以及放療、手術進行局部治療等。臨床調查顯示，約50%三陰性乳腺癌患者應用化療效果較好[4]。

三陰性乳腺癌發病后2年內是疾病重點監控時期，必須定期進行腦核磁、胸部CT等復查，2年內得到積極有效治療后，通常預后較好。相關文獻認為，除積極治療外，良好心態也有利于病情控制[5]。在腫瘤治療中，應科學分期，基于病程進行術前或術后化療。手術為必要手段，患者可選擇保乳手術后根治性放療，預防局部復發。針對三陰性乳腺癌實施化療時可選擇化療藥物類型眾多，表柔比星即為其中之一。表柔比星單一用藥可廣譜抑制多種腫瘤，不僅可應用于乳腺癌治療，而且可進行其他多種惡性腫瘤治療[6]。

表柔比星在抗腫瘤藥物中毒副作用相對較小，通常不會顯著殺傷正常細胞，治療成本相對較低，對于促進患者良性轉歸具有積極意義。表柔比星藥物成分作用于癌細胞，與癌細胞DNA結合，降低癌細胞核酸合成，對癌細胞有絲分裂產生消極影響，從而抑制癌細胞繁殖，延緩病情不良進展。該藥用藥后存在一定副作用影響，可造成骨髓抑制以及具有心臟毒性，此外對毛發生長造成影響，較易誘發舌部黏膜炎等，擾亂胃腸道功能，或見患者用藥后色素沉著、皮疹、關節痛或寒顫、發熱等[7]。

表柔比星是多柔比星半合成衍生物，屬于蒽環類藥物，在乳腺癌治療中應用價值較高。與多柔比星相比，表柔比星在人體內可進行更有效的藥代動力學與代謝變化。藥物成分嵌入DNA堿基對內部，擾亂RNA、DNA合成，同時釋放自由基，損傷DNA以及促進脂質體過氧化，對拓撲異構酶Ⅱ產生抑制作用，最終導致細胞凋亡。此外，有研究者提出，P53通路介導也是表柔比星促進癌細胞凋亡的機制之一[8]。

綜上，本研究結果顯示表柔比星可對人三陰性乳腺癌MDA-MB-231細胞產生明顯抑制作用，擾亂癌細胞繁殖，抑制癌細胞抗原表達，減弱癌細胞侵襲轉移能力，在三陰性乳腺癌臨床治療方面具有積極意義。