兒童穿孔性闌尾炎患者外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率及與臨床診療的相關性

劉 濤，李站虎（西安市兒童醫院，西安710003）

穿孔性闌尾炎是指闌尾由于多種因素誘發炎癥進一步惡化形成穿孔的疾病，穿孔后細菌易進入血液循環引起敗血癥，是臨床上常見的急腹癥之一。通常小兒穿孔性闌尾炎的發生率與成人相比較高，這是由于小兒闌尾炎病情發展快造成的，治療的關鍵是早期診斷和及時手術[1]。CD14 是一種白細胞分化抗原，CD14+單核細胞表面 HLA-DR 在抗原提呈過程中發揮關鍵作用，研究表明外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率與機體免疫功能密切相關，另外其還可用作感染性疾病的早期預后指標[2]。目前關于外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14 的表達與穿孔性闌尾炎間的相關性研究尚不深入，基于此本研究擬分析外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率與小兒穿孔性闌尾炎患者臨床診療的相關性，旨在為小兒穿孔性闌尾炎的早期診治提供合理依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇西安市兒童醫院2016年1月～2017年5月收治的49 例經傳統開腹闌尾切除術治療的穿孔性闌尾炎患兒為開腹術組，選擇同期我院經腹腔鏡闌尾切除術治療的55 例穿孔性闌尾炎患兒為腹腔鏡組，另選取同期我院健康體檢25 例患兒為對照組。比較三組的平均年齡、平均身高和平均體重差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

納入標準：符合穿孔性闌尾炎的診斷標準。 排除標準：①精神異常者；②并發嚴重臟器疾病者；③糖皮質激素、免疫抑制藥物服用史者。

1.2 儀器與試劑 CD14-PE，HLA-DR/異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)，小鼠免疫球蛋白(immunoglobulin，IgG)-FITC，醫用低速離心機(德國Heraeus 公司)，FACSCalibur 型流式細胞儀(美國Becton-Dickinson 公司)，流式專用試管(上海百賽生物有限公司)。

1.3 方法 采集開腹術組患兒、腹腔鏡組患兒和對照組EDTA-K3靜脈抗凝血2 ml，取三個干凈的流式試管，分別標注為開腹術組、腹腔鏡組和對照組，于開腹術組管和腹腔鏡組管加入5 μl HLADR/FITC，5 μlCD14-PE，對照組管加入5 μl 小鼠IgG1/FITC，10 μl CD14-PE。手動或振動儀混勻靜脈抗凝血，各取10 μl 分別加入開腹術組管和腹腔鏡組管及對照組管中，完全充分震蕩混勻后放于室溫暗室內作用15 min，于各管中加入20 μl 紅細胞裂解液充分振動混勻后放于室溫下暗室內作用15～20 min，待混懸液至清亮，準備開始上機離心，將轉速設定為1 000 r/min 離心5 min 后棄掉上清。每管中各加入5ml PBS，以1 ml 鞘液充分混勻后上機進行分析。以CD14/PE 射門，檢測HLA-DR/FITC+/PE+雙性細胞的百分率。

1.4 統計學分析 采用SPSS 21.0 統計學軟件分析數據，符合正態分布計量資料采用以均值±標準差(x±s)表示，行t檢驗，計數資料以n(%)表示，行χ2檢驗。P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 三組外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率的比較 見表1。術前開腹術組和腹腔鏡組的外周血HLA-DR/CD14表達率均低于對照組，其差異具有統計學意義(F=50.231，P=0.002)，術后2和5天，開腹術組和腹腔鏡組的外周血HLA-DR/CD14表達率較術前均顯著升高，其差異具有統計學意義(P＜0.05)，對照組外周血HLA-DR/CD14表達率較術前升高，但是其差異無統計學意義(P＞0.05)。術后2 天和5 天，腹腔鏡組的外周血HLA-DR/CD14表達率高于開腹術組，且低于對照組，差異有統計學意義。

表1 三組外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率的比較(x±s,%)

2.2 腹腔鏡組與開腹術組外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率變化的比較 見表2。相較于開腹術組，腹腔鏡組外周血單核細胞表面HLADR/CD14表達率變化的幅度較大，其差異具有統計學意義(P＜0.001，表2)。

表2 腹腔鏡組與開腹術組外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率變化的比較(x±s,%)

3 討論

闌尾炎是常見的外科急腹癥，診斷和治療的不及時易發展為穿孔性闌尾炎。隨著醫療技術的進步，手術方法已由傳統的開腹闌尾切除術逐漸變為腹腔鏡闌尾切除術。小兒急性闌尾炎穿孔較為多發，6～10 歲是患兒的高發階段。近年來，小兒急性闌尾炎穿孔的發病率呈逐年攀升趨勢，對患兒的身體和心理帶來了極大的負面影響。治療的關鍵是早期診斷和及時手術。

CD14 是一種糖基磷脂酰肌醇錨定蛋白，參與機體免疫反應中的固有免疫應答，CD14 與多種疾病相關，在宿主抵御感染中具有雙重作用[3]。HLADR 是單核細胞表面參與外來抗原加工、處理和提呈的關鍵分子，已有研究指出HLA-DR/CD14 足量表達對機體的固有免疫極為重要[4-5]，另外當嚴重感染并發膿毒癥時，患者 HLA-DR/CD14 的表達量顯著下調[6-7]，因此HLA-DR/CD14 的表達率與機體的免疫功能密切相關[8-9]，臨床診療上其還可用作感染性疾病的早期預后指標[10]。目前關于外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14 的表達與穿孔性闌尾炎間的相關性研究尚不深入，本研究擬分析外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率與小兒穿孔性闌尾炎患者臨床診療的相關性，結果顯示術后腹腔鏡組的外周血HLA-DR/CD14表達率高于開腹術組，并且腹腔鏡組外周血HLA-DR/CD14表達率變化的幅度較大，能促使患兒的HLA-DR/CD14表達率盡快恢復至正常值，增強患兒的免疫功能，促進康復。

綜上所述，腹腔鏡闌尾切除術患兒外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率較高，能有效增強患兒免疫功能，對康復產生積極作用。