接骨木藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究?

師慶媛，馬鵬文，朱昱瀾，鄧月婷，2△

1 甘肅省中藥固體分散制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅隴神戎發(fā)藥業(yè)股份有限公司，甘肅 蘭州 730102；2 甘肅省中藥質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

接骨木為忍冬科植物接骨木SambucuswilliamsiiHance 的干燥帶葉莖枝、根或根皮。接骨木植物在我國(guó)分布廣泛，主要在東北、華北、華中、云南、甘肅等地。在民間應(yīng)用較多，又名續(xù)骨木、公道老、馬尿騷等［1］。接骨木藥用價(jià)值高，化學(xué)成分復(fù)雜，具有預(yù)防骨質(zhì)疏松、抗病毒、抗炎、抗癌、抗氧化、抗艾滋病等多種功效。近年國(guó)內(nèi)外對(duì)接骨木化學(xué)成分和藥理活性成分的研究成果不斷涌現(xiàn)，但對(duì)于質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究較少，《中華人民共和國(guó)藥典》（2015 年版）［2］中未收載接骨木藥材的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，在《黑龍江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2001 年版）［3］中涉及了性狀、顯微鑒別等檢驗(yàn)項(xiàng)目。本研究在此基礎(chǔ)上增加了齊墩果酸的TLC 鑒別，另將水分、灰分一并納入考察范圍，為接骨木藥材的質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器WD-9403A 型熒光-紫外分析儀（北京沃德生物醫(yī)學(xué)儀器公司）；HH-6 型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司）；AX204 型電子天平（上海梅特勒公司）；DHG-9030A 型電熱恒溫干燥箱（上海鴻都電子科技有限公司）；KQ-400KDE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑齊墩果酸對(duì)照品（批號(hào)：110709-201607）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；其他試劑均為分析純。

1.3 藥材試驗(yàn)所用10 個(gè)批次藥材產(chǎn)地分別為安徽、湖北、湖南、河南、云南。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶劑的篩選取本品粉末3 g，分別加入20 mL的乙醇、甲醇和乙酸乙酯，超聲處理30 min（功率500 W，頻率40 KHz），濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)酉鄳?yīng)的溶劑2 mL，使溶解，作為供試品溶液。吸取供試品溶液4 μL、齊墩果酸對(duì)照品溶液6 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，置105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下觀察，然后在365 nm下檢視。乙酸乙酯為溶劑時(shí)，日光下斑點(diǎn)最明顯，365 nm 熒光下最清晰，故選乙酸乙酯為提取溶劑。見(jiàn)圖1—2。

圖1 不同提取溶劑薄層色譜（日光）

圖2 不同提取溶劑薄層色譜（365 nm熒光）

2.2 展開(kāi)劑的選擇取本品粉末3 g，加入乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min（功率500 W，頻率40 KHz），濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)酉鄳?yīng)的溶劑2 mL，使溶解，作為供試品溶液。吸取供試品溶液4 μL、齊墩果酸對(duì)照品溶液6 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，分別以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯-冰醋酸（65∶25∶10∶1）、環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶3∶0.5）、環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯-甲酸（9∶2∶1∶0.2）、環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，置105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下觀察，然后在365 nm 下檢視。結(jié)果顯示，當(dāng)以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）為展開(kāi)劑時(shí)，斑點(diǎn)清晰，分離度較好，因此選擇環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）作為齊墩果酸鑒別的展開(kāi)劑。

2.3 點(diǎn)樣量的選擇依次吸取2、4、6 μL 齊墩果酸對(duì)照品和2、4、6 μL 接骨木供試品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，置105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下觀察，然后在365 nm下檢視。齊墩果酸對(duì)照品6 μL、供試品4 μL顏色斑點(diǎn)和分離度最佳。見(jiàn)圖3—4。

圖3 不同點(diǎn)樣量薄層色譜（日光）

圖4 不同點(diǎn)樣量薄層色譜（365 nm熒光）

2.4 薄層鑒別系統(tǒng)驗(yàn)證按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2015 版）薄層色譜法實(shí)驗(yàn)［4-5］，依次吸取齊墩果酸對(duì)照品6 μL、不同產(chǎn)地接骨木溶液4 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 板上，展開(kāi)劑為環(huán)己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1），展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，分別在可見(jiàn)光、365 nm 下檢視，接骨木供試品與齊墩果酸對(duì)照品在相應(yīng)位置顯示相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖5—6。

圖5 不同產(chǎn)地接骨木薄層（日光）

圖6 不同產(chǎn)地接骨木薄層（365 nm熒光）

2.5 水分及總灰分按照（《中華人民共和國(guó)藥典》（2015 年版）通則0831 項(xiàng)下第二法及2302 第一法測(cè)定接骨木藥材水分及總灰分。接骨木藥材的水分最低為2.8%，最高為5.2%，以最高測(cè)定值的120%設(shè)限，為6.2%，故建議將標(biāo)準(zhǔn)定為水分不得超過(guò)6.0%；接骨木藥材灰分最低值為0.8%，最高值為2.3%，以最高測(cè)定值的120%設(shè)限，為2.8%，故建議將標(biāo)準(zhǔn)定為總灰分不得超過(guò)3.0%，見(jiàn)表1。

表1 接骨木藥材水分及總灰分 %

3 討論

接骨木作為常用中藥材，具有接骨續(xù)筋、祛風(fēng)利濕、活血止痛等藥理作用［6］。但由于產(chǎn)地不同，接骨木藥材所含成分有區(qū)別。有文獻(xiàn)選取蘆丁作為接骨木定性定量的目標(biāo)化合物［7］，但筆者選取蘆丁、鹽酸小檗堿成分進(jìn)行TLC 檢查，特征斑點(diǎn)不明顯，故不選擇蘆丁及鹽酸小檗堿作為定性指標(biāo)。而在本研究中，接骨木樣品中齊墩果酸成分通過(guò)薄層鑒別可以很好分離，提取方法簡(jiǎn)單、快捷，斑點(diǎn)清晰明顯，所用試劑普及，易于操作，故將齊墩果酸鑒別納入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中［8］。

在浸出物檢查中，雖然相對(duì)水、95%乙醇，將稀乙醇作為溶劑浸出物含量稍高，但最高值為5.82%，最低值為3.10%，整體偏低，故不作為參考指標(biāo)。含量測(cè)定中筆者根據(jù)文獻(xiàn)資料考察熊果酸含量［6］，結(jié)果顯示10 批接骨木藥材中熊果酸含量在0.02～0.06%之間，含量較低，故不做參考。