紅棗枸杞浸泡酒對小鼠潤腸通便功能的研究

胡 博，唐曉姝，陳雪梅，張白曦*

（1.江南大學(xué) 國家功能食品工程技術(shù)研究中心，江蘇 無錫 214000；2.江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214000）

隨著人們飲食結(jié)構(gòu)、生活方式和工作方式的改變，便秘已成為人們生活中的常見問題[1-5]。流行病研究發(fā)現(xiàn)，女性慢性便秘病率高于男性[6]，且便秘的發(fā)生率隨年齡增加而提高，特別是65歲以上便秘發(fā)生率明顯增高。我國成年人患病率在7.0%～20.3%[7]。老年人慢性便秘總患病率為11.5%，其中年齡在60～65歲患病率為8.7%，而85歲以上的老人患病率則高達(dá)19.5%[8]。便秘是臨床常見的復(fù)雜癥狀，現(xiàn)代很多人往往容易忽視便秘，但是便秘對人的身體健康有著很大的影響和損害[9]，便秘會(huì)導(dǎo)致人體內(nèi)毒素積累，降低五臟功能，甚至可能導(dǎo)致其他疾病的發(fā)生[10]。

紅棗含有蛋白質(zhì)、糖類、有機(jī)酸、氨基酸、維生素A、維生素C等豐富的營養(yǎng)成分[11]。紅棗不但是美味果品，還是滋補(bǔ)良藥，有強(qiáng)筋壯骨、補(bǔ)血行氣、滋頤潤顏之功效[12-14]。枸杞味甘、性平，富含枸杞多糖及甜菜堿等活性物質(zhì)，是一種傳統(tǒng)的“藥食兼用”原材料，其活性成分可增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、防衰老、增加造血功能、抗脂肪肝等[15]。

浸泡酒作為一種傳統(tǒng)的食品加工工藝，制作簡便，成本低廉，一直以來得到廣泛的應(yīng)用。信維平[16]從果蔬中分離出抗氧化物質(zhì)，可對飲料調(diào)味和作為預(yù)防癌癥等疾病的功能性食品。農(nóng)仲文等[17]通過對山竹果皮中活性物質(zhì)做浸泡酒的研究，發(fā)現(xiàn)酒中活性成分高，抗氧化作用好。白酒是很好的浸提溶劑，可將紅棗、枸杞中的有效成分充分地提取出來，并以適當(dāng)?shù)谋壤ㄟ^恰當(dāng)?shù)姆绞奖蝗藗償z入體內(nèi)發(fā)揮其作用。以紅棗、枸杞為原料，蒸餾白酒為基酒制備浸泡酒，研究其潤腸通便的功效，為進(jìn)一步開發(fā)具有潤腸通便功能的浸泡酒提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紅棗、枸杞、濃香型蒸餾白酒（酒精度65%vol）：市售；洛哌丁胺片（每片含洛哌丁胺2 mg）：西安楊森制藥公司；活性炭（粉狀）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；阿拉伯樹膠粉、低聚木糖：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；植物總酚測試試劑盒（比色法）、總黃酮測試試劑盒（比色法）：南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2600 紫外可見分光光度計(jì)：日本島津公司；5830R型離心機(jī)：德國Eppendorf公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理方法

以紅棗、枸杞為原料，洗凈晾干，以料液比1∶10（g∶mL），用濃香型蒸餾白酒浸泡在陶罐中，加蓋密封后25 ℃避光貯存6個(gè)月，得到酒精度為60%vol的浸泡酒受試物。

張連長臉板得像塊濕木頭:“下雨只不過是下雨,下再大的雨也還是下雨,不是下刀子!你們不是那些插隊(duì)知青!他們一插隊(duì),不想當(dāng)農(nóng)民那也是農(nóng)民了!你們叫兵團(tuán)戰(zhàn)士!是戰(zhàn)士就得有點(diǎn)戰(zhàn)士的樣子!沒有口令擅自行動(dòng),不是好戰(zhàn)士!跑到倉庫去的,都要受處分!”

1.3.2 試劑配制方法

洛哌丁胺混懸液的配制：①小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)：取洛哌丁胺片14 mg（7 片），用研缽研碎呈粉末后加蒸餾水至25 mL，臨用前配制。②排便實(shí)驗(yàn)：取洛哌丁胺片26 mg（13 片），用研缽研碎呈粉末后加蒸餾水至25 mL，臨用前配制。

低聚木糖的配制：稱取15.00 g低聚木糖粉，用蒸餾水定容至100 mL。

墨汁的配制：稱取阿拉伯樹膠10 g，加蒸餾水80 mL，煮沸至溶液透明，稱取活性碳（粉狀）10 g 加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容至100 mL，于冰箱中4 ℃保存，用前搖勻。

1.3.3 受試物劑量確定方法

根據(jù)WOOD A M等[18]關(guān)于酒精攝入風(fēng)險(xiǎn)閾值的研究表明，全因死亡率與飲酒攝入量呈現(xiàn)正相關(guān)性，其最低風(fēng)險(xiǎn)攝入量為100 g/周（純酒精）。換算為酒精含量60%vol的浸泡酒，則每日攝入量為30 mL。按照標(biāo)準(zhǔn)人體質(zhì)量60 kg換算為本次小鼠每日灌胃劑量為5.0 mL/kg體質(zhì)量[19]，作為本次實(shí)驗(yàn)的中劑量組。低劑量組灌胃劑量為2.5 mL/kg體質(zhì)量。

美國心臟協(xié)會(huì)、癌癥協(xié)會(huì)等組織建議的適度飲酒量為：女性每日酒精飲料攝入量不超過一份；男性每日酒精飲料攝入量不超過兩份（一份標(biāo)準(zhǔn)酒精飲料含有約17.7 mL的純酒精）[20]。按照標(biāo)準(zhǔn)人體質(zhì)量60 kg換算為酒精含量60%vol的浸泡酒，則男性每日攝入量為59 mL。換算為本次小鼠每日灌胃劑量為10.0 mL/kg體質(zhì)量，作為本次實(shí)驗(yàn)的高劑量組。

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)技術(shù)與評價(jià)規(guī)范》[19]，對于含乙醇的受試樣品，如果乙醇含量超過15%vol，允許將其含量降至15%vol。因此將浸泡酒及蒸餾酒的乙醇含量旋蒸降至15%vol，并調(diào)配至相應(yīng)劑量。

1.3.4 動(dòng)物分組方法

選取無特定病原體（specific pathogen free，SPF）級健康雄性BALB/c小鼠（18～22g）140只：由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，生產(chǎn)許可證編號：SCXK（滬）2017-0005，動(dòng)物質(zhì)量合格證編號：2015000556762。在屏障設(shè)施檢疫室內(nèi)預(yù)飼養(yǎng)5 d后，按動(dòng)物體質(zhì)量將動(dòng)物隨機(jī)分成小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)組和排便實(shí)驗(yàn)組，每個(gè)大組分成7個(gè)組，每組10只動(dòng)物，即溶劑對照組（動(dòng)物飲用水），模型對照組（洛哌丁胺），陽性對照組（低聚木糖1.5 g/kg體質(zhì)量），浸泡酒低（2.5 mL/kg體質(zhì)量）、中（5.0 mL/kg體質(zhì)量）、高（10.0 mL/kg體質(zhì)量）劑量組和蒸餾酒對照組（10.0 mL/kg體質(zhì)量），灌胃劑量為0.1 mL/10 g，受試樣品、溶劑蒸餾水均經(jīng)口灌胃，連續(xù)7 d。

1.3.5 實(shí)驗(yàn)方法

（1）酒中功效成分的測定

糖含量測定：參照許亮[21]的方法進(jìn)行測定；總酚含量、總黃酮含量的測定：試劑盒測試。

（2）小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)

便秘模型的建立：給受試樣品7 d后，各組小鼠禁食不禁水20 h。模型對照組和3個(gè)劑量組灌胃給予鹽酸洛哌丁胺5.2 mg/kg體質(zhì)量，陰性對照組給等量蒸餾水。

墨汁推進(jìn)率的測定：

給鹽酸洛哌丁胺0.5 h后，劑量組灌胃給予含相應(yīng)濃度受試樣品的墨汁（含10%活性碳粉、10%阿拉伯樹膠），陰性和模型對照組給墨汁灌胃。

25 min后立即脫頸椎處死動(dòng)物，打開腸腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長度”，并記錄數(shù)據(jù)。按下式計(jì)算墨汁推進(jìn)率[19]：

該公式參照《保健食品檢驗(yàn)技術(shù)與評價(jià)規(guī)范》潤腸通便功能評價(jià)方法[19]，將墨汁推進(jìn)率按照該公式進(jìn)行換算后才能更準(zhǔn)確的反應(yīng)各劑量組間的差異情況。墨汁推進(jìn)率需進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，X=Sin-1（X代表墨汁推進(jìn)率的數(shù)據(jù)換算值，p為墨汁推進(jìn)率，需用小數(shù)表示）。

（3）排便實(shí)驗(yàn)

便秘模型的建立：給受試樣品7 d后，各組小鼠禁食不禁水20 h。模型對照組和3個(gè)劑量組灌胃給予鹽酸洛哌丁胺10.0 mg/kg體質(zhì)量，陰性對照組給蒸餾水。

排便時(shí)間、糞便粒數(shù)和糞便質(zhì)量的測定：給鹽酸洛哌丁胺0.5 h后，陰性對照組和模型對照組小鼠用墨汁灌胃，劑量組灌胃給予含相應(yīng)濃度受試樣品的墨汁，動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食。從灌墨汁開始，記錄每只動(dòng)物首粒排黑便時(shí)間、5 h內(nèi)排便粒數(shù)及質(zhì)量，記錄時(shí)除去小鼠排出第一粒黑便前的糞便。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果用SPSS 22.0軟件進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足方差齊要求的數(shù)據(jù)資料用單因素方差分析方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅棗枸杞酒與蒸餾酒中總黃酮、總酚、總糖、粗多糖含量的比較分析

紅棗枸杞酒和蒸餾酒中總黃酮、總酚、總糖、粗多糖含量的比較分析結(jié)果見表1。由表1可知，紅棗枸杞酒中總黃酮含量約為蒸餾酒的4倍，總酚含量約為蒸餾酒的90倍，總糖含量為3.74 g/100 mL，乙醇沉淀多糖含量為0.200 g/100 mL，說明浸泡酒中含有較多的單糖和小分子糖。蒸餾酒中的總糖含量為0.009 57 g/100 mL，多糖未檢出，說明蒸餾酒中僅有少量的單糖和小分子糖存在。由于紅棗枸杞中的有效成分濃度較高，尤其是多糖含量較高，能促進(jìn)腸道有益菌的增殖和所占比例，抑制腸道有害菌及腐敗物質(zhì)形成，可促進(jìn)益生菌產(chǎn)生短鏈脂肪酸和短鏈有機(jī)酸，可降低腸道pH，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，改善便秘[22]，推測紅棗枸杞酒中的糖能夠起到促進(jìn)腸胃消化、潤腸通便的作用。

表1 紅棗枸杞酒和蒸餾酒中總黃酮、總酚、總糖、粗多糖含量的比較分析Table 1 Comparative analysis of total flavone,total phenol,total sugar and crude polysaccharide in jujube and wolfberry-soaked wine and distilled liquor

2.2 小腸推進(jìn)率

實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠無死亡，生長情況良好，無腹瀉等各種不良現(xiàn)象。由表2可知，模型對照組與空白組相比，小腸推進(jìn)率顯著降低（P＜0.05），說明建模成功；陽性對照組與模型對照組相比，小腸推進(jìn)率顯著增加（P＜0.05），說明實(shí)驗(yàn)體系可行；低、中劑量組、蒸餾酒對照組與模型對照組相比，小腸推進(jìn)率無顯著性差異（P＞0.05），高劑量組與模型對照組相比，小腸推進(jìn)率顯著增加（P＜0.05）。說明該紅棗枸杞酒在高劑量濃度（10.0 mL/kg體質(zhì)量）下可增加小腸推進(jìn)率。

表2 紅棗枸杞酒對小鼠小腸推進(jìn)率的影響Table 2 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on small intestinal propulsion rate of mice

2.3 首粒黑便排便時(shí)間

由表3可知，便秘模型對照組的首粒排黑便時(shí)間顯著高于空白組（P＜0.05），說明便秘模型成立；陽性對照組與模型對照組相比，顯著降低（P＜0.05），說明實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)體系可行。低劑量組與模型對照組相比顯著降低（P＜0.05），且首粒黑便排便時(shí)間比陽性對照組少，說明該紅棗枸杞酒在低劑量濃度下可縮短首粒黑便排便時(shí)間。中劑量組、蒸餾酒對照組與模型對照組相比無顯著性差異（P＞0.05），高劑量組與模型對照組相比顯著增加（P＜0.05），在縮短首粒黑便排便時(shí)間方面效果不明顯。

表3 紅棗枸杞酒對小鼠首粒黑便排便時(shí)間的影響Table 3 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on the defecation time of the first black stool in mice

2.4 5 h內(nèi)排黑便粒數(shù)

由表4可知，便秘模型對照組的5 h內(nèi)平均排黑便粒數(shù)顯著低于空白組（P＜0.05），說明便秘模型成立；陽性對照組與模型對照組相比，顯著增加（P＜0.05），說明實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)體系可行。低、高劑量組與模型對照組相比顯著增加（P＜0.05），排便頻率明顯升高，且與陽性對照組相比效果一致；中劑量組、蒸餾酒對照組與模型對照組相比無顯著性差異（P＞0.05）。說明該紅棗枸杞酒在低、高劑量濃度下可增加5 h內(nèi)排黑便的粒數(shù)。

表4 紅棗枸杞酒對小鼠5 h內(nèi)排黑便粒數(shù)的影響Table 4 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on the number of black stools excreted by mice within 5 h

2.5 5 h內(nèi)排黑便質(zhì)量

由表5可知，便秘模型對照組的5 h內(nèi)排黑便質(zhì)量顯著低于空白組（P＜0.05），說明便秘模型成立；陽性對照組與模型對照組相比，排黑便質(zhì)量顯著降低（P＜0.05），低、中劑量組、蒸餾酒對照組與模型對照組相比無顯著性差異（P＞0.05），高劑量組與模型對照組相比顯著增加（P＜0.05），且排黑便質(zhì)量略低于陽性對照組。說明該紅棗枸杞酒在高劑量濃度（10.0 mL/kg體質(zhì)量）下可增加5 h內(nèi)排黑便的質(zhì)量。

表5 紅棗枸杞酒對5 h內(nèi)排黑便質(zhì)量的影響Table 5 Effect of red jujube and wolfberry-soaked wine on weight of black stools excreted by mice within 5 h

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)驗(yàn)性便秘模型小鼠評價(jià)了紅棗枸杞浸泡酒的通便功能。結(jié)果表明，紅棗枸杞酒在高劑量濃度下與便秘模型對照組均有顯著性差異（P＜0.05），而蒸餾酒對照組與便秘模型組無顯著性差異（P＞0.05），進(jìn)一步證實(shí)通便效果來自于浸泡過程中紅棗與枸杞溶出的功效成分。結(jié)合紅棗枸杞浸泡酒的功效成分分析，紅棗枸杞酒中總酚及總黃酮相較蒸餾酒中含量較多，可影響小鼠的胃腸蠕動(dòng)及排便功能。但是因?qū)嶒?yàn)要求含酒精類的樣品需將酒精度縮至15%vol以下進(jìn)行，因此需通過旋蒸手段將各劑量組酒精含量進(jìn)行統(tǒng)一，推至一般人群的每日攝入量下能否表現(xiàn)出潤腸通便效果還需進(jìn)一步探討，總之，枸杞紅棗浸泡酒與蒸餾酒對照組相比，其功效優(yōu)勢更明顯。