無創DNA產前檢測篩查胎兒染色體異常的臨床價值分析

景麗麗 ，胡昭昭

（1.武漢市青山區婦幼保健院，湖北 武漢 430080；2.武漢市漢陽區婦幼保健院，湖北 武漢 430050）

0 引言

染色體疾病是一大類遺傳疾病，不僅危害個人生長發育、智力問題，還可能涉及到多個器官、系統的形態功能異常。在某些遺傳性疾病（例如：Bloom綜合征、范可尼貧血、唐氏綜合征）中，DNA修復過程存在缺陷，染色體易發生突變，因此以上患兒發生急性白血病及淋巴瘤的危險性極高，染色體異常的影響不可小覷[1]。據2012年《中國出生缺陷防治報告》顯示，我國出生缺陷發生率在5.6%左右[2]，在醫療衛生層面還需提升臨床篩查與診斷能力。處于二級預防的無創DNA檢測是基于細胞核型水平，對母體外周血中胎兒的DNA構建單倍體型，不僅位點準確而且準確度高。基于此，本文將探討唐篩高風險、MOM值異常等高風險產婦的檢測優勢，確定精確度的范圍。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取我院于2018年1月至2020年1月收治的82例孕婦為研究對象，孕周期均滿5周以上，且經過B超檢測存在胎心和卵黃囊。年齡23～43歲，平均（28.14±5.34）歲，孕周13～26周，根據孕婦個人情況分為以下五組：①唐篩高風險組：16例，均篩查血清檢查標志物后確定唐篩NTD高風險數據[3]；②直接DNA監測組：20例，孕20+6w以上錯過血清學篩查最佳時間；③唐篩MOM值異常組：23例，危險性高于1/270，血漿蛋白a值和絨毛膜促性腺激素等數值不正常；④B超監測超常組：10例，宮腔內可見妊娠殘留物或宮壁可見內為混雜回聲的包塊；⑤高齡組：13例。

1.2 方法。無創DNA檢測法：抽取孕婦肘靜脈血5 mL，離心，提取孕婦血漿中游離態DNA；使用試劑盒（購自于華大生物科技（武漢）有限公司）對孕婦待測血清中游離態的DNA 進行測序，采用最新MGISeq-2000 測序系統（購自華大基因）檢測，獲取每條染色體上分布的確切的核酸序列，對樣本序列進行比對，計數染色體后生成報告。羊水/臍血細胞染色體培養檢查：確定高風險后，在超聲儀器的精準定位下，針頭穿過子宮肌層，避免接觸胎兒，且確認胎兒有無異常舉動，找準胎盤位置，再進行穿刺抽取羊水，輔助QF-PCR技術及CMA芯片批量檢測細胞，對染色體進行染色、觀察、分析、審核的操作后，識別24條染色體形態特征及顯帶分布，得出診斷比例，當比例錯誤如母血細胞的污染需重新取樣。如果錯過最初產檢診斷，采用臍帶血穿刺方式。

1.3 觀察指標

1.3.1 遵循 NIPT最新指南：該指南指出無創DNA檢測是指針對羊水/臍血穿刺而言的一種產前保護性預判，通過綜合高通量測序技術與遺傳與變異理論基礎，對18、21、13三對染色體個數進行篩查，并報以謹慎態度尋其假陽性和假陰性的可能[4]。

1.3.2 以完整度高的樣本信息為基礎：首先在首次陽性篩查確定高風險后，還需以“金標準”二次復查，即通過羊水穿刺對全基因組的缺失重復等情況下診斷。其次對產程需要較好的把握，嚴格記錄孕周及年齡等一般資料；產后按時隨訪陰性樣本，結合影像學檢測二次排除陽性可能。

2 結果

2.1 82例孕婦無創DNA檢測篩查陽性情況。五組孕婦中染色體篩查陽性的有12例，具體患有的疾病風險分布如表1。

2.2 82例孕婦完善羊水/臍血穿刺后檢查結果比對。四者核型在完善羊水/臍血穿刺后檢出率均為100%，無創檢查21-三體核型異常的準確率為64.52%；18-三體、13-三體和XXY核型的準確率分別為83.33%、100.00%、100.00%，見表2。

表1 82例孕婦無創DNA檢測篩查陽性情況

表2 82例孕婦完善羊水/臍血穿刺后檢查結果比對

3 討論

為貫徹落實《健康中國行動（2019-2030年）》，規范二級預防的無創產前基因檢測，我們需關注無創DNA檢測的適用人群及把控正確率。無創DNA檢測是將血液中的少量胎兒DNA游離、富集，通過PCR擴增技術比對樣本序列，程度較為簡單[5-6]。相比于以往的血清篩查對孕周有嚴格要求，且對于假陽性率為3.5%～8%的局限，無創檢測所滿足的孕周范圍更大，滿足12～24周的條件內即可得出風險率，且檢出率遠遠高于血清篩查[7-8]。

本文針對臨界高風險孕婦作單倍體型的構建，高級篩查出12例單基因遺傳性問題，總陽性率為14.63%，再對高風險人群作羊水或臍血穿刺，以對全基因組的缺失重復等情況下作診斷，提示18-三體、13-三體和XXY核型的準確率分別為83.33%、100.00%、100.00%。這得益于減少了兩次純化的PCR擴增最大限度的保留的胎兒游離DNA，減少了樣本間的污染。研究表明，胎兒游離DNA片段長度較小，純化過程中更容易丟失，因此通過簡化血漿DNA測序文庫的構建流程使得精準度增加。而通過直接建立PCR-free庫抑制PCR固有慣性擴增，改善短片段DNA結構變化的缺陷，可真實反映原始樣本。此外，無創DNA對染色體微缺失或重復等100多中染色體病同樣具有檢測效應，根據10余萬臨界危險孕婦檢測回訪數據得，對某種微缺失疾病（DiGeorge）的檢測率高達94.20%，這無異是跳出了傳統篩查僅可檢測出21/18/13三體的局限。

站在臨界高風險孕婦的角度而言，無創DNA檢測帶來精確度高的同時也減少了不必要的損傷及風險。孕產婦對于孕育健康兒童的需求不斷提高，部分孕婦在羊水穿刺可能面臨的流產、感染甚至損傷胎兒的可能性感到恐懼，無創DNA檢測的出現為不想有創的孕婦提供了第二個選擇。因此，胎兒游離DNA補缺臨床無創的篩查空白，起到對現有診斷技術體系的有效補充。

綜上所述，無創DNA的基因檢測技術為出生缺陷防控帶來了極大的積極作用，大大提升了準確率，推進了無創檢測的發展。