干式免疫熒光法在C-反應蛋白檢測中的應用分析

陳維剛

(瀘縣第二人民醫院檢驗科，四川 瀘州 646105)

0 引言

C-反應蛋白(CRP) 是一種由肝臟合成的急性時相反應蛋白，與全身性炎癥反應過程密切相關，可激活補體和加強吞噬細胞的吞噬而起調理作用，清除侵入機體的病原微生物和損傷、壞死、凋亡的組織細胞，正常人血清含量低于10mg/L。在心肌梗塞、風濕活動、組織損傷、惡性腫瘤、手術創傷及各種急性或慢性感染等情況下，CRP 在4-6h 后可迅速增高，隨著病情的好轉，又會迅速下降至正常[1]。因此臨床對C-反應蛋白值進行檢測對于疾病的輔助診斷及病情的監測具有重要意義。2019 年3 月，我院檢驗科引入一臺國產干式熒光免疫分析儀進行C-反應蛋白檢測，為探究干式免疫熒光法在C-反應蛋白檢測中的應用效果，本次試驗選取我院收治的50 例患者血液標本作為觀察對象，采用干式免疫熒光法與免疫透射比濁法分別檢測C-反應蛋白并進行對比分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年4 月至2019 年6 月間我院收治的接受C-反應蛋白檢測的50 例患者血液標本作為觀察對象，50 例患者中有男性31 例，女性19 例，患者的年齡區間為18-74 歲，平均年齡(40.12±3.32) 歲，患者中病情包括高血壓、腫瘤、各類感染性疾病等，其中腫瘤患者已接受相關病理學檢查確診[2]。所有患者均分別接受免疫透射比濁法與干式免疫熒光法C-反應蛋白檢測。

1.2 方法

檢驗前1d 叮囑患者不吃過于油膩、高蛋白食物，避免飲酒，血液中的乙醇成分會直接影響檢驗結果。采血前一天的20:00 以后，應開始禁食12 小時，以免影響檢測結果[3]。檢測當天于患者空腹狀態下取靜脈血5mL 分別置于專用檢測試管中分兩管保存，分別為未抗凝血(3mL) 與EDTA 抗凝血(2mL)，對未抗凝血進行血清分離，其中EDTA 抗凝血用于干式免疫熒光法檢測，分離血清用于免疫透射比濁法檢測。分別應用干式免疫熒光法與免疫透射比濁法對所有患者標本進行C-反應蛋白檢測。其中干式免疫熒光法檢測儀器為飛測FS-301 全自動干式熒光免疫分析儀(廣州萬孚生物產)，并結合配套試劑(熒光免疫層析法，批號：C1940F)、質控品，按照SOP 文件及儀器使用說明書進行操作；免疫透射比濁法采用BECKMAN COULTER 全自動生化分析儀(AU680)，試劑為四川沃文特生物技術有限公司生產的C-反應蛋白測定試劑盒(批號：1904011)，按照SOP 文件進行操作，對患者的C-反應蛋白進行檢測。

1.3 觀察指標

統計所有患者C-反應蛋白檢測結果中C-反應蛋白值，記錄干式免疫熒光法與免疫透射比濁法檢測結果中陽性病例數的具體情況。在檢測結果中，免疫透射比濁法設定C-反應蛋白檢測值高于8mg/L 為陽性，干式免疫熒光法設定C-反應蛋白檢測值高于10mg/L 為陽性[4]。

1.4 統計學分析

將試驗涉及數據進行統一處理，處理軟件為SPSS 21.00統計學信息軟件，輸入數據后，計數資料與檢驗方式分別為χ2、%；計量資料與檢驗方式分別為()、t檢驗，P值表示組間數據的差異性，P＜0.05 時組間差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 對比兩種方法檢測C-反應蛋白值結果

免疫透射比濁法檢測C-反應蛋白值結果明顯低于干式免疫熒光法檢測C-反應蛋白值結果，(P＜0.05)。見表1。

表1 兩種方法檢測C-反應蛋白值結果比較

2.2 對比兩種方法檢測C-反應蛋白陽性率

兩種方法檢測C-反應蛋白陽性率結果相比無明顯差異，(P＞0.05)；但干式免疫熒光法檢測C-反應蛋白靈敏度略高于免疫透射比濁法。見下表2。

表2 兩種方法檢測C-反應蛋白陽性率對比

3 討論

C-反應蛋白是一種急性時相反應蛋白，與肺炎鏈球菌C多糖體反應形成復合物，在組織損傷后迅速增加，其作用是激活補體；促進單核細胞對黑色素瘤細胞的破壞作用；促進粒細胞和巨噬細胞的運動與吞噬；影響淋巴細胞對促細胞分裂物質的反應性，并與部分T 淋巴細胞結合，抑制其功能；抑制混合淋巴細胞反應；對血小板凝集和血塊收縮有抑制作用[5-6]。

在當前臨床C-反應蛋白檢測中有血清散射、透射比濁法、免疫熒光法機免疫擴散法、化學發光法等多種方法，其中免疫透射比濁法利用抗原抗體反應，人血清中C-反應蛋白與其相應抗體致敏的乳膠顆粒在液相中相遇發生免疫反應，產生凝集，引起濁度上升，通過測定特定波長吸光度變化值，與同樣處理的校準品比較，即可計算出樣本中C-反應蛋白濃度，采用全自動生化分析儀進行檢測，操作簡單方便，具有較好的可重復性，能夠應用于大部分批量測定中，檢測效果好[7]。干式免疫熒光法(熒光免疫層析法)采用免疫熒光雙抗體夾心法定量測定全血、血漿、血清樣本中C-反應蛋白濃度，當樣本與緩沖液混勻，并滴加到測試卡加樣孔后樣本中的C-反應蛋白抗原與熒光標記的C-反應蛋白抗體結合形成反應復合物，反應復合物隨層析作用沿硝酸纖維素膜前移，被硝酸纖維素膜檢測線上的C-反應蛋白抗體捕獲，樣本中的C-反應蛋白捕獲量與熒光抗體的信號強度正相關，通過干式熒光免疫分析儀進行檢測[8]，該方法靈敏度高，所需檢測血量較少，采用全血即可檢測，在門、急診快速單個測定中適用性較高。C-反應蛋白作為一種存在血漿中的急性時相反應蛋白，能夠在機體受到感染、組織挫傷等情況時激活補體，使細胞的吞噬作用增強，能夠有效清除機體入侵的病原微生物、損傷及凋零的細胞，從而達到調理作用，在機體的自身免疫調節體系中具有至關重要的作用。近年來，隨著臨床研究的逐漸深入，C-反應蛋白在機體中的作用被越來越重視，C-反應蛋白能夠在細菌感染、炎癥等心血管疾病的發病中起到關鍵作用，能夠作為細菌感染的首選鑒別指標[9]。在本次研究中：免疫透射比濁法檢測C-反應蛋白值結果明顯低于干式免疫熒光法檢測C-反應蛋白值結果，(P＜0.05)；兩種方法檢測C-反應蛋白陽性率結果相比無明顯差異，(P＞0.05)；但干式免疫熒光法檢測C-反應蛋白靈敏度略高于免疫透射比濁法。本次試驗結果表明免疫透射比濁法和干式免疫熒光法對于高血壓、腫瘤、各類感染性疾病的C-反應蛋白檢測結果差異并不明顯，因此在臨床應用中，可在病情判定及預后過程中選擇同一種方法，進而保證檢驗的連貫性，從而減少檢驗誤差的產生。

綜上所述，干式免疫熒光法與免疫透射比濁法在C-反應蛋白的檢測中均具有較好的檢測效果，但干式免疫熒光法在C-反應蛋白檢測中標本用量少，全血標本即可檢測，檢測速度快，靈敏度高，線性范圍廣，對于門、急診快速單個測定中適用性較高。