HPLC法測定治咳川貝枇杷露中苯甲酸、羥苯乙酯含量

龍凱 王娟??

【摘 要】 目的：建立HPLC法測定治咳川貝枇杷露中苯甲酸、羥苯乙酯的含量。方法：色譜柱采用Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm 5 μm），流動相：甲醇-0.02 moL·L-1乙酸銨溶液 梯度程序;流速：1.0 mL·min-1;檢測波長：0～8 min為230 nm 8～20 min為254 nm;進樣量：10 μL;柱溫：25 ℃。結果：苯甲酸在1.00～5.01 μg（r= 0.9999）范圍內呈現良好的線性關系 羥苯乙酯在0.08～0.41μg（r= 1.0000）范圍內呈現良好的線性關系 平均加樣回收率分別為98.92%（RSD=1.71%，n=9））、100.52%（RSD=1.32%，n=9））。結論：該方法簡便準確、專屬性強 重現性好 可用于治咳川貝枇杷露中防腐劑的含量測定。

【關鍵詞】 苯甲酸;羥苯乙酯;高效液相色譜法;含量測定

Abstract：Objective To establish a HPLC method to determine the content of benzoic acid and ethyl hydroxybenzoate in Zhike Chuanbei Pipa syrups.Methods HPLC method was used with Agilent Eclipse XDB-C18 column（250 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase was methanol—0.02 moL·l-1 ammonium acetate， gradient elution with a flow rate of 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was set 230 nm in 0～8 min and 254 nm in 8～20 min，sample volume was 10 μL and the column temperature was 25 ℃.Results The linear range of benzoic acid was 1.00～5.01 μg（r= 0.9999） and ethyl hydroxybenzoate was 0.08～0.41 μg （r=1.0000）， the average recovery of benzoic acid was 98.92%（RSD=1.71%，n=9）and ethyl hydroxybenzoate was 100.52%（RSD=1.32%，n=9）. Conclusion The method is simple，accurate with good specificity and reproducibility and it can be used in the quantitative determination of preservative in Zhike Chuanbei Pipa syrups.

Keywords：Benzoic Acid; Ethyl Hydroxybenzoate; HPLC; Determination

治咳川貝枇杷露收載于《中國藥典》2015年版一部 有清熱化痰、消炎止咳的功效 多用于感冒及支氣管肺炎引起的咳嗽[1]。其中添加的苯甲酸、羥苯乙酯作為防腐劑 可以起到防止微生物污染、霉變的作用 并能保證口服液的穩定性 但如果添加過量會對人體造成一定的傷害。分別測定藥品中苯甲酸[2]、羥苯乙酯[3-6]的含量有文獻報道 尚無同時測定苯甲酸和羥苯乙酯含量的相關報道 為對兩種防腐劑進行質量控制 保證用藥的安全性 本研究采用高效液相色譜法同時測定苯甲酸和羥苯乙酯的含量。

1 儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀 配置DAD檢測器（美國安捷倫）;Sartorius BP211D電子天平（德國賽多利斯）。苯甲酸對照品（中國食品藥品檢定研究院 批號：100419-201703，含量99.9%）;羥苯乙酯對照品（中國食品藥品檢定研究院 批號：100847-201604 含量99.9%）;治咳川貝枇杷露（廣州白云山潘高壽藥業股份有限公司 批號：1902014A;1906012A;1909027A）;甲醇（色譜純 霍尼韋爾貿易上海有限公司）;水為超純水;其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm 5 μm）;流動相：甲醇-0.02 moL·L-1乙酸銨溶液 梯度程序見表1;流速：1.0 mL·min-1;檢測波長見表2;進樣量：10 μL;柱溫：25 ℃。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液 精密稱取羥苯乙酯對照品10.26 mg，制成每1 mL含羥苯乙酯2.05 mg的對照品儲備液 精密稱取苯甲酸對照品25.06 mg 精密量取上述羥苯乙酯對照品儲備液1 mL，置同一100 mL量瓶中 加甲醇溶解 制成每1 mL含苯甲酸0.25 mg、羥苯乙酯0.02 mg的混合溶液 作為混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取樣品1 mL 置10 mL容量瓶中 用甲醇稀釋至刻度 即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按處方比例配制不含苯甲酸和羥苯乙酯的陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性考察 分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液 按2.1 色譜條件進樣 記錄色譜圖 結果如圖1所示 圖中可見待測成分與其他物質分離良好 分離度均大于1.5 理論板數：苯甲酸5541 羥苯乙酯195205。陰性對照溶液色譜圖在待測成分相應位置無干擾峰 表明其他成分對待測成分的測定無干擾。

2.3.2 線性關系考察 分別精密量取2.2.1對照品溶液各4、8、12、16、20 μL注入高效液相色譜儀進行測定 記錄峰面積 以進樣量X（μg）為橫坐標 以峰面積A為縱坐標 進行線性回歸 繪制標準曲線 結果表明 苯甲酸在1.00～5.01 μg范圍內 線性關系良好 A=3768.46170X-7.19021 r=0.9999;羥苯乙酯在0.08～0.41 μg范圍內 線性關系良好 A=5895.21755X-2.94636 r=1.0000。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取2.2.1對照品溶液10 μL 按2.1色譜條件連續進樣6次 結果苯甲酸、羥苯乙酯峰面積RSD分別為0.43% 0.52%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩定性試驗 取2.2.2供試品溶液分別于0、1、2、4、8、12 h測定 苯甲酸、羥苯乙酯峰面積RSD分別為 0.57%、0.47%（n=6） 表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.3.5 重復性試驗 取批號1909027A的樣品 制備供試品溶液6份 在2.1色譜條件下測定 6份樣品中苯甲酸的平均含量為344.50 mg/瓶 RSD為0.45%（n=6）;羥苯乙酯的平均含量為13.21 mg/瓶 RSD為0.35%（n=6）。表明方法重復性良好。

2.3.6 加標回收試驗 精密量取已知苯甲酸、羥苯乙酯含量的樣品（批號：1909027A）共9份 精密加入不同體積的2.2.1對照品溶液 照2.1色譜條件進樣測定 計算加樣回收率。結果見表3。

2.4 樣品含量測定 取治咳川貝枇杷口服液樣品3批 按2.2.2項下制備供試品溶液 按2.1 色譜條件進樣測定 計算苯甲酸和羥苯乙酯的含量。結果見表4。

3 討論

曾考察甲醇-水對苯甲酸的分離效果 發現苯甲酸不能與相鄰峰完全分離 且峰型拖尾嚴重。而使用甲醇-0.02 moL·L1乙酸銨溶液作為流動相時苯甲酸、羥苯乙酯均能與相鄰峰有較好的分離度 且峰型較好。因此本方法采用甲醇-0.02 moL·L-1乙酸銨溶液作為流動相。

利用高效液相色譜儀的光譜功能對進樣的2.2.1對照品溶液進行全波長掃描 發現苯甲酸在230 nm波長處有最大吸收 羥苯乙酯在254 nm波長處有最大吸收。故采用分時段變換波長信號的檢測方式來對苯甲酸和羥苯乙酯的含量進行測定 檢測靈敏度高、相互無干擾 可以同時進行測定。

口服溶液在使用過程中應避免微生物的污染 防腐劑的抑菌作用是必要的。用量過多會對人體肝臟功能產生損害 《中國藥典》2015年版四部[7]通則中規定合劑中苯甲酸的用量不得超過0.3% 羥苯乙酯的用量不得超過0.05%。測定的3批樣品苯甲酸和羥苯乙酯的用量均在規定范圍內。本方法可以在20 min內測定其含量 方法靈敏、準確、穩定 為其含量的分析提供了理想的方法。

參考文獻

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