基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討金葉拜毒顆粒抗新冠病毒的作用機(jī)制

彭雙鳳 田鑫 王興

【摘 要】 目的：運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析金葉拜毒顆粒抗新型冠狀病毒的有效成分、靶點和通路，探討其抗新型冠狀病毒的機(jī)制，為中醫(yī)藥治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-2019）提供參考。方法：通過TCMSP、PubMed、Swiss Target Prediction等數(shù)據(jù)庫及相關(guān)文獻(xiàn)中篩選金葉拜毒顆粒方中中藥的化學(xué)成分和作用靶點;通過Genecards、OMIMS數(shù)據(jù)庫篩選出新型冠狀病毒的疾病靶點;使用 Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建“藥物-成分-靶點-疾病”網(wǎng)絡(luò)和潛在靶點的相互作用關(guān)系，使用String數(shù)據(jù)庫和Cytoscape3.7.2軟件繪制蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò);通過Matescape富集分析預(yù)測核心模塊和作用機(jī)制。結(jié)果：挖掘出金葉拜毒顆粒中化合物46個，465個藥物靶點，COVID-19相關(guān)疾病靶點465個，二者交集靶點71個，組方中主要化學(xué)成分23個，關(guān)鍵靶點涉及GAPDH、ALB、TNF、TP53、MAPK3、IL6、MAPK1、CASP3、MAPK8、FOS等，預(yù)測到4個核心板塊。GO富集分析共得到1665個條目，KEGG通路富集篩選出條149信號通路。結(jié)論：金葉拜毒顆粒具有多成分、多靶點、多通路作用于新型冠狀病毒。

【關(guān)鍵詞】 金葉拜毒顆粒;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);新型冠狀病毒肺炎;免疫和炎癥反應(yīng)

Abstract：Objective To analyze the effective components and target pathway of Jinye Baidu granule against novel coronavirus by means of network pharmacology， and to explore its mechanism of anti-novel coronavirus， so as to provide reference for the treatment of COVID-19 （COVID-2019） with traditional Chinese medicine.Methods The chemical constituents and action targets of Jinyebaidu granule were screened by TCMSP， PubMed， Swiss Target Prediction and related literatures， and the disease targets of novel coronavirus were screened by Genecards and OMIMS databases. The interaction relationship between drug-component-target-disease network and potential targets was constructed by Cytoscape3.7.2 software， the protein interaction network was drawn by String database and Cytoscape3.7.2 software， and the core modules and action mechanism were predicted by Matescape enrichment analysis.Results 46 compounds， 465 drug targets， 465 disease targets related to covid-19， 71 intersection targets and 23 main chemical components were found in Jinyebaidu granules. The key targets involved GAPDH， ALB， TNF， TP53， mapk3， IL6， mapk1， CASP3， mapk8， Fos and so on.A total of 1665 entries were obtained by go enrichment analysis， and 149 signal pathways were screened by KEGG pathway enrichment. Conclusion The novel coronavirus has many components， multiple targets and multipathways.

Keywords：Jinye Baidu Granule; Network Pharmacology; COVID-19; Immune and Inflammatory Reaction

2019年12月份以來，新型冠狀病毒迅速蔓延，輕度患者出現(xiàn)發(fā)熱、乏力、干咳等癥狀，嚴(yán)重者可出現(xiàn)呼吸困難、急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒和凝血功能障礙等[1]。

在本次抗新型冠狀病毒肺炎的過程中，同濟(jì)醫(yī)院醫(yī)護(hù)人員相繼選用金葉拜毒顆粒作為新型冠狀病毒肺炎的預(yù)防方，并取得較佳的防治療效。因此金葉拜毒顆粒被作為一般患者隔離期的推薦用藥，被載入《同濟(jì)醫(yī)院關(guān)于新型冠狀病毒感染的肺炎中醫(yī)診療方案及預(yù)防方案》，并得到了湖北省衛(wèi)健委的肯定，金葉敗毒顆粒也被列入新冠肺炎的防控藥品之一[2]。

故本文運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，分析金葉拜毒顆粒中藥物化學(xué)成分的作用靶點及相關(guān)通路，預(yù)測金葉拜毒顆粒治療新型冠狀病毒肺炎的潛在機(jī)制，為中醫(yī)藥治療新型冠狀病毒肺炎提供一定的理論基礎(chǔ)與科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法及結(jié)果

1.1 篩選金葉拜毒顆粒潛在活性化合物 在TCMSP（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）數(shù)據(jù)庫中設(shè)定口服生物利用度（oralbioavailability，OB）≥30%，類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18，以金葉拜毒顆粒組成藥物：金銀花、大青葉、魚腥草為關(guān)鍵詞進(jìn)行篩選，篩選后得到每味藥材的有效成分。檢索已報道的相關(guān)文獻(xiàn)[3-6]，收集蒲公英的有效成分和化合物。得到金葉拜毒顆粒主要活性化合物共23個，其中金銀花14個，大青葉6個，魚腥草2個，根據(jù)文獻(xiàn)報道蒲公英收集其主要化合物6個。

1.2 篩選金葉拜毒顆粒作用靶點 基于TCMSP數(shù)據(jù)庫，根據(jù)上述篩選出的金銀花、大青葉、魚腥草3味有效成分預(yù)測作用靶點。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)得到蒲公英的主要化合物，在PubMed（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/）搜索其化合物名稱得到CAS號，下載其分子結(jié)構(gòu)圖，前往Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫（http：//www.swisstargetp rediction.ch/）進(jìn)行蒲公英靶點預(yù)測。得到作用靶點：金銀花449個，大青葉83個，魚腥草195個，蒲公英600個，去重后，共得到藥物靶點465個。

1.3 獲取疾病靶點 基于GeneCard（https：//www.genecards.org）、OMIM（https：//omim.org）和“Corona Virus Disease 2019、CoronaVirus”為關(guān)鍵詞，選擇物種為Homosapiens，檢索得到COVID-19相關(guān)靶點465個。

1.4 潛在作用靶點的獲取 利用Uniprot（https：//www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫查詢金葉拜毒顆粒可能的作用靶點蛋白對應(yīng)的基因名，規(guī)范靶點蛋白。在Venny2.1在線軟件作圖工具平臺（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）分別錄入金葉拜毒顆粒和新型冠狀病毒肺炎靶點基因，繪制韋恩圖（圖1），兩者取交集后獲得共同靶點71個。

1.5 金葉拜毒顆粒化學(xué)成分-靶點網(wǎng)絡(luò)的建立 將藥物的化學(xué)成分，以及“1.4”所得的潛在作用靶點分別導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件，使用Network Analyzer 功能對藥物中的主要化學(xué)成分進(jìn)行分析，構(gòu)建“藥物-成分-靶點-疾病”相互作用網(wǎng)絡(luò)（圖2），其中金葉拜毒顆粒中有23個有效成分對新型冠狀肺炎具有調(diào)節(jié)作用。根據(jù)節(jié)點度值（Degree）等網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征進(jìn)行核心節(jié)點的篩選，Degree表示預(yù)測出該成分與作用靶點的關(guān)聯(lián)個數(shù)，成分的Degree值越大說明該成分越重要，在與潛在靶點相互作用的化學(xué)成分中，Degree>8（2倍中位數(shù)）的化學(xué)成分有9種，Degree值從大到小分別為：槲皮素（quercetin，Degree=102）、山奈酚（kaempferol，Degree=39）、木犀草素（luteolin，Degree=33）、β-谷甾醇（beta-sitosterol，Degree=18）、蒲公英黃銅（3′-hydroxy flavanone，Degree=17）、蒲公英賽酮（Taraxerone，Degree=12）、靛玉紅（indirubin，Degree=11）、綠原酸（Heriguard，Degree=11）、乙酰蒲公英萜醇（Taraxerol Acetate，Degree=11）。表明這9種化學(xué)成分可能是金葉拜毒顆粒干預(yù)COVID-19的主要中藥成分。因潛在作用靶點與各成分關(guān)聯(lián)較緊密，故以Degree值的2倍中位數(shù)（8）作為主要潛在靶點篩選的閾值，經(jīng)篩選得到主要潛在靶點有9個，分別為：PTGS2、PTGS1、PPARG、PIK3CG、ACHE、NOS3、NOS2、CASP3、BCL2。上述一種成分與多個靶點作用，多種成分又可共同作用于同一個靶點，體現(xiàn)了金葉拜毒顆粒多成分、多靶點的綜合干預(yù)特點。

1.6 構(gòu)建金葉拜毒顆粒PPI網(wǎng)絡(luò)圖 在STRING（https：//string-db.org/cgi/input.pl）數(shù)據(jù)庫中錄入71個潛在靶點，得到PPI網(wǎng)絡(luò)關(guān)系信息，使用Cytoscape3.7.2軟件對上述數(shù)據(jù)進(jìn)行可視化分析，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖（圖3）。根據(jù)節(jié)點度值（Degree）等網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征進(jìn)行核心節(jié)點的篩選，Degree>27（中位數(shù)）的有GAPDH、ALB、TNF、TP53、MAPK3、IL6等31個靶點，與“藥物-成分-靶點-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖中的靶點相互映射，得到PTGS2、PPARG、NOS3、NOS2、CASP3等5個核心潛在靶點，推測金葉拜毒顆粒的有效成分可能通過作用于上述5個核心靶點進(jìn)而干預(yù)COVID-19。

為了進(jìn)一步探討這些潛在靶點之間相互作用的生物過程，運(yùn)用Metascape（https：//metascape.org/）以MCODE算法識別靶點之間最密切的生物過程，收集P <0.01，最小計數(shù)為3和富集因子> 1.5的術(shù)語，并根據(jù)其成分靶點之間相互關(guān)系的密切程度得到前4個具有豐富生物過程的核心富集模塊（圖4A-4D），進(jìn)行富集分析后按P值劃分，選取4個最佳功能描述（表1），圖4A核心富集模塊主要涉及糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications、American trypanosomiasis，Hepatitis B，圖4B核心富集模塊主要涉及HepatitisB、Pathways in cancer， Toll-like receptor signaling pathway，圖4C核心富集模塊主要涉及Toll-like receptor signaling pathway，IL-17 signaling pathway、TNF signaling pathway，圖4D核心富集模塊主要涉及Pathways in cancer、Hepatitis B、AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications。

1.7 GO和KEGG富集分析 為探討上述71個交集靶點在防疫COVID-19時的作用機(jī)制，運(yùn)用Metascape3.7.2對71個的靶點進(jìn)行GO和KEGG富集分析，并按相似度（Kappa）分?jǐn)?shù)> 0.3對生物學(xué)過程進(jìn)行分層聚類，每個節(jié)點代表一個聚類，選擇集群中關(guān)系最密切的前20個生物學(xué)術(shù)語作為代表集群的術(shù)語，各集群按互相關(guān)系構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖，節(jié)點大小與屬于集群的輸入基因數(shù)量成正比，連線越粗，代表關(guān)系越密切。

GO分析得到1665條生物學(xué)過程（圖5A-5B），KEGG分析得到149條通路途徑（圖6A-6B），均取結(jié)果前20條通路作為重點通路進(jìn)行展示。按P值大小選擇前20種生物學(xué)過程進(jìn)行描述，主要涉及的GO生物過程有：response to lipopolysaccharide、cytokine-mediated signaling pathway、response to oxidative stress、apoptotic signaling pathway、positive regulation of cytokine production等。主要涉及的KEGG生物過程有AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications、Hepatitis B、Apoptosis、HIF-1 signaling pathway、Fluid shear stress and atherosclerosis等。

2 討論

在2003年“非典”期間，同濟(jì)醫(yī)院推薦使用金葉拜毒顆粒作為抗SARS病毒的預(yù)防和治療，并取得了顯著的效果，得到廣大醫(yī)務(wù)人員和患者的信賴。在本次抗疫情中，武漢同濟(jì)醫(yī)院再次推薦使用金葉拜毒顆粒作為新型冠狀病毒肺炎的防治方。金葉拜毒顆粒前身為同濟(jì)醫(yī)院研發(fā)的“抗炎6號”注射劑，源自《醫(yī)宗金鑒》古方“五味消毒飲”，主要方藥由金銀花、大青葉、魚腥草、蒲公英4味藥組成，臨床上主要治療風(fēng)溫肺熱在衛(wèi)證。其中金銀花性寒味甘，具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，既能疏風(fēng)溫在表之邪熱，又能解熱入氣分、血分之熱毒，是常用的清熱解毒中藥之一，是為君藥;大青葉、魚腥草、蒲公英三者共為臣藥，三者共效增強(qiáng)清熱解毒之功。其中金銀花與大青葉合用，前者偏于疏散風(fēng)熱，后者擅長涼血消斑;金銀花與魚腥草相須使用，前者擅于清熱解毒，后者偏于消癰排膿;金銀花與蒲公英配伍使用，前者適偏于輕宣疏散，后者偏于消腫散結(jié)。全方配伍，共奏清熱解毒、疏散外邪之功。

2.1 多成分-多靶點-多通路調(diào)控 “免疫-炎癥反應(yīng)”干預(yù)COVID-19當(dāng)病毒侵入機(jī)體，機(jī)體在受到病毒感染后會激發(fā)自身保護(hù)性免疫應(yīng)答，從而吞噬和隔離病毒，但是失調(diào)的、過度的免疫反應(yīng)會引起免疫激化，從而引起患者體內(nèi)炎癥因子過度表達(dá)而出現(xiàn)“細(xì)胞因子風(fēng)暴”[7-9]。細(xì)胞因子風(fēng)暴可對機(jī)體造成嚴(yán)重的損害，如透明膜形成、彌漫性肺泡損傷、纖維蛋白滲出等，進(jìn)而加速肺損傷，而嚴(yán)重的肺損傷以及循環(huán)系統(tǒng)中的細(xì)胞因子風(fēng)暴會進(jìn)一步引起全身多器官功能障礙及損傷[10]。目前認(rèn)為，重癥肺炎產(chǎn)生的原因往往并非是病毒本身，而是感染誘發(fā)了機(jī)體產(chǎn)生過度的免疫應(yīng)答，體內(nèi)失衡的細(xì)胞因子系統(tǒng)是造成肺炎及急性肺損傷的一個重要的原因[11]。因此，除了抗病毒治療外，對 COVID-19免疫炎癥治療策略就顯得尤為重要[12]。

本研究共篩選得到金葉拜毒顆粒防治疾病的9個核心潛在化學(xué)成分，分別為槲皮素、山奈酚、木犀草素、β-谷甾醇、蒲公英黃銅、蒲公英賽酮、靛玉紅、綠原酸、乙酰蒲公英萜醇。

吳莎等[13]發(fā)現(xiàn)槲皮素及穿心蓮內(nèi)酯均能對已進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的甲型流感病毒H1N1，登革病毒 2 型，柯薩奇 B 病毒以及呼吸道合胞病毒起一定的抑制作用。此外槲皮素可以使用基于偽病毒的藥物篩選系統(tǒng)抑制H5N1病毒的進(jìn)入[14]。Zhang R等[15]發(fā)現(xiàn)，山奈酚通過抑制TLR4/MyD88介導(dǎo)NF-kB和MAPKs途徑對H9N2病毒誘導(dǎo)的炎癥表現(xiàn)出保護(hù)作用，并且山奈酚被認(rèn)為是潛在治療流感病毒誘導(dǎo)的急性肺損傷的有效藥物。Wu S等[16]研究發(fā)現(xiàn)木犀草素可以劑量依賴性減少病毒后代的產(chǎn)生以及CVB3 RNA和蛋白質(zhì)的合成，發(fā)現(xiàn)木犀草素介導(dǎo)的CNB3抑制在機(jī)械上是可能的，至少部分是通過抑制p38 MAPK和JNK MAPK的磷酸化，并抑制NF-kB核易位并隨后減弱CVB3（科薩奇病毒B3）感染細(xì)胞中的炎性細(xì)胞的表達(dá)。Li H等[17]發(fā)現(xiàn)β-谷甾醇可有效防止由肺炎鏈球素引起的細(xì)胞裂解，使小鼠免受肺炎鏈球菌感染。侯京玲等[18]發(fā)現(xiàn)蒲公英黃酮對小鼠耳廓、足趾腫脹及大鼠棉球肉芽腫有明顯抑制作用，結(jié)果表明蒲公英黃銅對急慢性炎癥具有良好的抑制作用，高劑量的蒲公英黃酮抗炎效果最佳。現(xiàn)代研究顯示蒲公英賽酮可抑制 LPS （脂多糖）誘導(dǎo)的多種炎癥介質(zhì)的釋放[19]。賴金輪等[20]研究顯示靛玉紅對許多炎癥性疾病都有抑制作用，推測其機(jī)理與抑制炎性細(xì)胞因子的表達(dá)及相關(guān)介質(zhì)的釋放、乃至對上皮細(xì)胞的修復(fù)的出色表現(xiàn)，預(yù)期靛玉紅在炎性疾病的防治上或?qū)缪菰絹碓街匾慕巧？咕ЬУ萚21]發(fā)現(xiàn)綠原酸在小鼠體內(nèi)體外均能有效降低脂多糖誘導(dǎo)的COX-2的蛋白表達(dá)，并能促進(jìn) COX-2蛋白的降解.降低脂多糖誘導(dǎo)的COX-2的蛋白水平是綠原酸抗炎的機(jī)制之一。Yao等[22]研究表明乙酰蒲公英萜醇通過干擾TAK1和AKt的激活來下調(diào)巨噬細(xì)胞中促炎性介質(zhì)的表達(dá)，從而阻止NF-kB的激活。

中化學(xué)成分靶點與COVID-19有71個共同靶點，通過PPI網(wǎng)絡(luò)分析與“藥物-成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)”相映射發(fā)現(xiàn)本方中化學(xué)成分主要可能通過調(diào)控PTGS2、PPARG、NOS3、NOS2、CASP3這5個核心靶點干預(yù)COVID-19。

前列素內(nèi)環(huán)氧化物合成酶（prostaglandin endoperoxidesynthase，PTGS），又稱環(huán)氧合酶 （cyclooxygenase，COX），是催化花生四烯酸產(chǎn)生前列腺素的關(guān)鍵限速酶[23]。在人體內(nèi)，PTGS 主要存在兩種亞型：結(jié)構(gòu)型 PTGS1 和誘導(dǎo)型 PTGS2。前者表達(dá)于所有組織細(xì)胞，參與機(jī)體正常的生理功能;后者是一種誘導(dǎo)性即刻反應(yīng)基因，在正常狀態(tài)下低表達(dá)或不表達(dá)，但可在炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子、促 癌 劑、激素等多種體內(nèi)外因素誘導(dǎo)下表達(dá)[24-25]。研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞色素P450（CYPs）/環(huán)氧合酶2（COX-2）途徑中花生四烯酸代謝失調(diào)是導(dǎo)致脂多糖（LPS）異常的主要原因[26]。急性肺損傷（ALI）中炎癥反應(yīng)不受控制，COX-2和可溶性環(huán)氧化合物水解酶（sEH）雙重抑制PTUPB通過抑制NLRP3炎性體的激活，在治療急性肺損傷中發(fā)揮抗炎作用。PPARG屬于核受體過氧化物酶體增生激活受體（PPAR）亞家族的成員，該基因編碼的蛋白質(zhì)是PPAR-γ， PPAR-γ參與了免疫、炎癥等細(xì)胞過程[27]，包括脂肪細(xì)胞的分化、炎癥反應(yīng)、凋亡、肥胖、動脈粥樣硬化及癌癥等。NOS2（誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、eNOS）和NOS3（內(nèi)皮型一氧化氮合酶、iNOS）是一組同工酶，反應(yīng)產(chǎn)生的一氧化氮 （NO） 是生物體細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞間的重要信號分子， 能調(diào)節(jié)細(xì)胞多種功能，參與炎癥反應(yīng)、心血管、外周、中樞神經(jīng)以及免疫等系統(tǒng)生理過程和生物信號的調(diào)節(jié)[28]。半胱氨酸蛋白酶2（CASP3）是屬于半胱氨酸蛋白酶家族中的重要成員，是細(xì)胞凋亡有序級聯(lián)反應(yīng)下游重要的效應(yīng)因子[29]。當(dāng)細(xì)胞受到損傷時，其主要表現(xiàn)為線粒體膜損傷，線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素釋放到細(xì)胞外，激活CASP3從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[30]。

在對金葉拜毒顆粒作用靶點參與的生物學(xué)過程進(jìn)行GO、KEGG富集分析以及核心模塊分析發(fā)現(xiàn)，富集的疾病主要為類似SARS-CoV-2感染的感染性疾病，主要包括病毒、細(xì)菌、寄生蟲的感染，例如Hepatitis B 、Chagas disease、Amoebiasis、Herpes simplex infection、HTLV-I infection、Prion diseases。對應(yīng)的通路主要富集在免疫和炎癥相關(guān)通路中，例如HIF-1 signaling pathway、NF-kappa B signaling pathway、Chemokine signaling pathway、Jak-STAT signaling pathway、Inflammatory mediator regulation of TRP channels、p53 signaling pathway。

2.2 金葉拜毒顆粒可能通過“HIF-1信號通路”干預(yù)COVID-19 HIF-1信號通路是調(diào)解機(jī)體缺氧的重要通路，金葉拜毒顆粒中涉及的靶點有BCL2、EGFR、GAPDH、HMOX1、IFNG、IL6、NOS2等，當(dāng)機(jī)體發(fā)生缺氧相關(guān)反應(yīng)時，機(jī)體會形成以HIF-1為核心，聯(lián)合其上下游基因及產(chǎn)物組成復(fù)雜的缺氧調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。通過參與某些通路信號、調(diào)控相應(yīng)靶基因的表達(dá)、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等途徑，使缺氧的細(xì)胞和組織能保持氧穩(wěn)定及耐受低氧狀態(tài)[31]。COVID-19組織學(xué)檢查顯示雙側(cè)彌漫性肺泡損傷伴細(xì)胞纖維黏液樣滲出物，肺細(xì)胞脫落、肺水腫及透明膜形成，兩肺可見以淋巴細(xì)胞為主的間質(zhì)單核炎性浸潤[32]。不典型肺細(xì)胞增大的多核合胞體細(xì)胞肺泡腔內(nèi)可見大核、雙親顆粒狀細(xì)胞質(zhì)和明顯核仁，呈病毒性細(xì)胞病變樣改變。臨床則表現(xiàn)為進(jìn)行性的呼吸困難，呼吸窘迫綜合征，最終死于呼吸衰竭[33]。因此，金葉拜毒顆粒可能通過調(diào)控HIF-1信號通路，有助于改善COVID-19患者臨床缺氧癥狀。

2.3 金葉拜毒顆粒可能通過“IL-17 信號通路”干預(yù)COVID-19 在KEGG富集分析中發(fā)現(xiàn)，金葉拜毒顆粒除了參與圖6中的生物學(xué)過程，還參與了IL-17信號通路，Log10（P）= -27.80，Log10（q）=-25.71，參與的靶點主要有CASP3、CASP8、MAPK14、FOS、CXCL2、IFNG、IL6等。IL-17 信號通路是在宿主免疫學(xué)中起關(guān)鍵作用的通路，在細(xì)胞增殖分化、生物因子轉(zhuǎn)錄與表達(dá)及免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用， 與腫瘤、器官移植、感染及多種炎癥過程密切相關(guān)[34]。在呼吸系統(tǒng)中，IL-17 作為聯(lián)系T細(xì)胞與中性粒細(xì)胞的重要介質(zhì)， 通過刺激支氣管上皮細(xì)胞 、血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞合成 、釋放 IL-8，GCP-2， MIP-2 與粘附因子等生物因子參與炎癥狀態(tài)下中性粒細(xì)胞在氣道的募集[35]。另外，IL-17 還刺激支氣管上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞合成 、釋放中性粒細(xì)胞活化因子 IL-6，并增強(qiáng) MPO 和彈性蛋白酶活性[36]。《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）》[37]中首次提出，對于雙肺廣泛病變及重型COVID-19患 者，如 實 驗 室 檢 測 白 細(xì) 胞 介 素 -6（interleukin-6，IL-6）升高者，可試用托珠單抗治療。推測托珠單抗有可能通過阻斷“炎癥風(fēng)暴”進(jìn)而阻止輕癥COVID-19患者向重癥或危重癥患者轉(zhuǎn)變，從而降低病死率[38]。因此，可能推測金葉拜毒顆粒可能通過“IL-17 信號通路”調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素-6的釋放從而阻斷“炎癥風(fēng)暴”達(dá)到干預(yù)COVID-19的效果。

2.4 金葉拜毒顆粒可能通過“EVGF 信號通路”干預(yù)COVID-19 金葉拜毒顆粒除了參與圖6中的生物學(xué)過程，還參與了EVGF信號通路，Log10（P）= -16.80，Log10（q）= -15.45，參與的靶點主要有MAPK14、HSPB1、NOS3、PIK3R1等。VEGF 信號通路參與到血管新生整個過程，發(fā)揮了不可或缺的作用。VEGF及其受體廣泛分布在肺部，不僅存在于肺泡上皮細(xì)胞，而且在血管、氣道平滑肌細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞等都有VEGF及其受體的表達(dá)[39]。SARS-CoV-2主要通過 2 型肺泡上皮細(xì)胞上的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ angiotensin-converting enzyme 2，ACE2） 首先感染肺，其最常見的致命并發(fā)癥是急性呼吸窘迫綜合征（ acute respiratory distress syndrome， ARDS ）[40]。ARDS以肺泡上皮損傷和毛細(xì)血管通透性增加所致彌漫性肺泡肺水腫及透明膜的形成為主要病理特征，以呼吸窘迫和嚴(yán)重低氧血癥為主要臨床表現(xiàn)。發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是其重要環(huán)節(jié)之一[41]。Gullen等[42]研究提示，VEGF作用于肺血管內(nèi)皮細(xì)胞使肌動蛋自發(fā)生排列改變，細(xì)胞間隙形成，血管內(nèi)皮通透性增加并導(dǎo)致肺水腫和肺泡內(nèi)蛋白含量增高。陳思峰等[43]認(rèn)為肺泡上皮屏障和肺毛細(xì)血管內(nèi)皮屏障通透性增高引起肺水腫，肺泡上皮屏障通透性增加不是 SARS-CoV-2 引起的ARDS的唯一主要機(jī)制，我們應(yīng)該對肺毛細(xì)血管內(nèi)皮屏障的破壞引起足夠的重視。因此，推斷金葉拜毒顆粒可能通過“EVGF”信通路減少“炎癥風(fēng)暴”對肺血管上皮細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮通透性從而干預(yù)COVID-2019。

綜上所述，本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對金葉拜毒顆粒防治COVID-19進(jìn)行探索性研究，槲皮素、山奈酚、木犀草素、β-谷甾醇、蒲公英黃銅、蒲公英賽酮、靛玉紅、綠原酸、乙酰蒲公英萜醇這些化學(xué)成分作用于PTGS2、PPARG、NOS3、NOS2、CASP3等靶點，參與細(xì)胞分化、凋亡、信號傳導(dǎo)等途徑，進(jìn)而調(diào)控免疫和炎癥反應(yīng)等相關(guān)通路、HIF-1信號通路和IL-17信號通路和EVGF信號通路。

參考文獻(xiàn)

[1]宗陽，丁美林，賈可可，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接法探尋達(dá)原飲治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）活性化合物的研究[J].中草藥，2020，51（4）：836-844.

[2]醫(yī)藥衛(wèi)生網(wǎng)網(wǎng)站. 抗疫前線，“同濟(jì)咖啡”金葉敗毒顆粒再現(xiàn)身[EB/OL].[2020-02-17].http：//www.yywsb.com/list，1245115.html.

[3]丁惠，張馨方，紀(jì)文華，等.蒲公英藥用研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2018，20（9）：156-159.

[4]蔣喜巧，苗明三.蒲公英現(xiàn)代研究特點及分析[J].中醫(yī)學(xué)報，2015，30（7）：1024-1026.

[5]劉婷，張繼秀，李先哲，等.蒲公英的開發(fā)與利用[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2019，36（5）：450-458.

[6]鄒世輝.蒲公英生物活性物質(zhì)的研究進(jìn)展[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019（8）：186-189.

[7]尹明星，曹艷，施春陽，等.中藥防治細(xì)胞因子風(fēng)暴的研究進(jìn)展[J].中草藥，2020，51（5）：1089-1095.

[8]劉閏平，葛俊德，鐘穎，等.基于干預(yù)細(xì)胞因子風(fēng)暴文獻(xiàn)挖掘的中醫(yī)藥治療重癥新型冠狀病毒肺炎探討[J].中草藥，2020，51（5）：1096-1105.

[9]DAVIDSON S，MAINI M K，WACK A.Disease-promoting effects of type I interferons in viral， bacterial， and coinfections[J].Journal of interferon & cytokine research ： the official journal of the International Society for Interferon and Cytokine Research，2015，35（4）：252-64.

[10]HEIKO H，YASMINE B，RALF B，et al.C5a Negatively Regulates Toll-like Receptor 4-Induced Immune Responses[J].Immunity，2005，22（4）：415-26.

[11]KHI J.Anaphylatoxins and infectious and non-infectious inflammatory diseases[J].Molecular Immunology， 2001， 38（2-3）：175-187.

[12]何黎黎，龔普陽，封玥，等.中藥在抗新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）引起的細(xì)胞因子風(fēng)暴中的應(yīng)用分析[J].中草藥，2020，51（6）：1375-1385.

[13]吳莎，金曉晗，施珊，等.槲皮素和穿心蓮內(nèi)酯的體外抗病毒作用[J].中藥材，2012，35（12）：2003-2006.

[14]WU W，LI R，LI X，et al.Quercetin as an Antiviral Agent Inhibits Influenza A Virus （IAV） Entry[J]. Viruses，2015，8（1）;6

[15]ZHANG R，AI X，DUAN Y，et al.Kaempferol ameliorates H9N2 swine influenza virus-induced acute lung injury by inactivation of TLR4/MyD88-mediated NF-κB and MAPK signaling pathways[J].Biomedicine & pharmacotherapy = Biomedecine & pharmacotherapie， 2017（89）：660.

[16]WU S，WANG H Q，GUO T T，et al.Luteolin inhibits CVB3 replication through inhibiting inflammation[J].Journal of Asian Natural Products Research， 2019， 22（8）：1-12.

[17]LI H，ZHAO X，WANG J，et al.β-sitosterol interacts with pneumolysin to prevent Streptococcus pneumoniae infection[J].Rep， 2015， 5（1）：17668.

[18]侯京玲，周霄楠，馮沙沙，等.蒲公英不同提取物抗炎效果研究[J].中國獸醫(yī)雜志，2017，53（3）：64-66.

[19]王通，曾耀英，肇靜嫻，等.靛藍(lán)和靛玉紅對小鼠T細(xì)胞活化與增殖的影響[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報，2005（5）：444-447.

[20]賴金倫，劉玉輝，劉暢，等.中藥靛玉紅作用機(jī)理及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2017，36（1）：76-79.

[21]抗晶晶，張麗娟，劉曉寧，等.綠原酸對脂多糖致炎癥小鼠體內(nèi)體外COX-2的影響[J].河南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2017，45（5）：49-52.

[22]YAO X，LI G，BAI Q，et al.Taraxerol inhibits LPS-induced inflammatory responses through suppression of TAK1 and Akt activation[J].International Immunopharmacology，2013，15（2）：316-324.

[23]COUSSENS L M，WERB Z. Inflammation and cancer.[J].Nature，2002，420（6917）：860

[24]TAZAWA R， XU X M，WU K K，et al.Characterization of the genomic structure， chromosomal location and promoter of human prostaglandin H synthase-2 gene.[J].Biochem Biophys Res Commun， 1994， 203（1）：190-199.

[25]SZCZEKLIK W， SANAK M， SZCZEKLIK A.Functional effects and gender association of COX-2 gene polymorphism G-765C in bronchial asthma[J]. Journal of Allergy & Clinical Immunology， 2004， 114（2）：248-253.

[26]YANG H H，DUAN J X，LIU S K，et al.A COX-2/sEH dual inhibitor PTUPB alleviates lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice by inhibiting NLRP3 inflammasome activation[J].Theranostics， 2020， 10（11）：4749-4761.

[27]FAN A Z，YESUPRIYA A，CHANG M H，et al.Gene polymorphisms in association with emerging cardiovascular risk markers in adult women[J].BMC Med Genet，2010，11（6）：6

[28]韓雨薇，張媛媛，賴秀英，等.中藥對一氧化氮合酶/一氧化氮系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報，2017，48（1）：8-15.

[29]李討討，高建鋒，馬友記.臨床型乳房炎綿羊乳腺組織中CASP3和TLR2基因的差異表達(dá)分析[C].//2018年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會論文集，中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)羊?qū)W分會：中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)羊?qū)W分會，2018：2.

[30]SAQUIB A L，ALI M，KEISUKE K，et al.Caspases 3 and 7： key mediators of mitochondrial events of apoptosis[J].Science （New York， N.Y.），2006，311（5762）：847-851.

[31]滑雅娜，魯芙愛，王永福.HIF-1相關(guān)信號通路及其在自身免疫性疾病中作用[J].中國免疫學(xué)雜志，2019，35（8）：1013-1017.

[32]XU Z，SHI L，WANG Y，et al.Pathological findings of COVID-19 associated with acute respiratory distress syndrome[J]. The Lancet Respiratory Medicine， 2020， 8（4）：420-422.

[33]詹藝，劉含秋，李克.SARS-CoV-2感染的臨床及胸部CT表現(xiàn)初探[J/OL].中國醫(yī)學(xué)計算機(jī)成像雜志：1-7[2021-01-13].

[34]張志剛.IL-17的生物學(xué)特性及臨床意義[J].國外醫(yī)學(xué)（生理、病理科學(xué)與臨床分冊），2003（6）：639-644.

[35]LAAN M，PRAUSE O，MIYAMOTO M，et al.A role of GM-CSF in the accumulation of neutrophils in the airways caused by IL-17 and TNF‐α[J]. European Respiratory Journal， 2003， 21（3）：387-93.

[36]HOSHINO H，LAAN M，SJOSTRAND M，et al.Increased elastase and myeloperoxidase activity associated with neutrophil recruitment by IL-17 in airways in vivo[J].Journal of Allergy & Clinical Immunology， 2000， 105（1）：143-149.

[37]國家衛(wèi)生健康委辦公廳，國家中醫(yī)藥管理局辦公室.新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第七版）[EB/OL].[2020-03-05]http：//yzs.satcm.gov.cn/zhengcewenjian/2020-05-28/15455.html.

[38]左瑋，劉容吉，許秀麗，等.托珠單抗不良反應(yīng)研究進(jìn)展[J].臨床藥物治療雜志，2020，18（3）：16-20.

[39]高云，羅鳳鳴，范志航.血管內(nèi)皮生長因子與肺部疾病的關(guān)系[J].國際呼吸雜志，2013，33（19）：1512-1516.

[40]LIU J，LIU Y，XIANG P，et al.Neutrophil-to-lymphocyte ratio predicts critical illness patients with 2019 coronavirus disease in the early stage[J]. Journal of Translational Medicine， 2020， 18（1）：206

[41]TSIAMBAS E，PAPANIKOLAOU V，CHRYSOVERGIS A，et al.Coronavirus in Hematologic Malignancies： Targeting Molecules Beyond the Angiotensin-Converting Enzyme 2 （ACE2） Wall in COVID-19[J].Pathology & Oncology Research， 2020（3）：2823–2825.

[42]CULLEN V C，MACKAREL A J，HISLIP S J，et al.Investigation of vascular endothelial growth factor effects on pulmonary endothelial monolayer permeability and neutrophil transmigration[J].General Pharmacology，2001，35（3）：149-157.

[43]陳思鋒.2019新型冠狀病毒導(dǎo)致的致命肺滲漏的病理生理學(xué)機(jī)制和防治策略：兼論血透的應(yīng)用與依據(jù)[J].中國病理生理雜志，2020，36（3）：562-567.