聯合治療方案對晚期非小細胞肺癌患者預后及免疫功能的影響

鄭 樂, 陳 俊

(湘雅常德醫院 腫瘤科, 湖南 常德, 415000)

非小細胞肺癌是肺癌常見的類型，完全手術切除是目前最有效的治療方式，但由于肺癌起病隱匿，很大一部分患者在首次確診時已處于晚期，喪失了手術時機，僅可采取以化療為主的治療方式，但療效受限且不良反應較多[1-3]。隨著醫療水平的不斷提高及設備的不斷發展，研究人員提出了樹突狀細胞-細胞因子誘導殺傷細胞(DC-CIK)療法，為晚期惡性腫瘤患者的治療提供了新的思路。作為生物免疫治療方式之一, DC-CIK具有增殖速度快、殺瘤活性高以及副作用低等優勢[4-5]。為此，本研究以60例晚期非小細胞肺癌患者為研究對象，在多西他賽聯合順鉑(DP)化療的基礎上聯合DC-CIK細胞過繼免疫治療，分析該療法的療效及安全性，并從改善機體免疫功能方面探討其作用機制，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月—2020年1月收治的60例晚期非小細胞肺癌患者為研究對象。入組標準: ① 患者符合美國國立綜合癌癥網絡(NCCN)指南中非小細胞肺癌[6]的診斷標準; ② 臨床分期為Ⅳ期者; ③ 存在可測量病灶者; ④ 預計生存期≥6個月者; ⑤ 未接受過手術、化療、放療等抗腫瘤治療者。排除標準: ① 自身免疫系統疾病患者; ② 合并其他惡性腫瘤者; ③ 顱內轉移患者; ④ 短期內應用過生物免疫抑制劑或化療藥物、生物免疫抑制劑過敏者; ⑤ 凝血功能異常者; ⑥ 嚴重精神疾病患者; ⑦ 哺乳期、妊娠期女性。采用隨機數字表法將60例患者分為化療組(采用DP化療,n=30)及聯合組(采用DC-CIK細胞過繼免疫治療聯合DP化療,n=30)。本研究經醫院倫理委員會批準，患者自愿參與試驗并簽署知情同意書。

1.2 治療方案

化療組患者接受DP方案化療。第1天，給予靜脈滴注多西他賽注射液(揚子江藥業集團有限公司，國藥準字H20093850) 75 mg/m2。第1～3天，靜脈滴注順鉑(云南植物藥業有限公司，國藥準字H53021740) 75 mg/m2, 21 d為1 個治療周期，連續治療4～6個周期，化療期間給予抗過敏、保肝、預防性止吐處理。聯合組采取DC-CIK細胞過繼免疫治療聯合DP化療方案, DP化療方案同化療組, DC-CIK細胞過繼免疫治療方案如下。① DC細胞的獲取與培養: 化療前，采集患者外周血50 mL進行抗凝處理，之后采用COM. TEC血細胞分離機(德國，費森尤斯)采集單個核細胞。采用無血清RPMI 1640培養基(北京索萊寶科技有限公司)將濃度調整至3×106～4×109/L,加入干擾素-γ, 置于37 ℃、5% CO2條件下孵育2 h。收集懸浮細胞，采用無血清AIM-V培養基(上海廣邁生物技術有限公司)培養2 d, 加入DC培養液培養5 d; 加入腫瘤特異性抗原、腫瘤壞死因子- α培養至第8天時，收集成熟的DC 細胞，采用離心機進行離心后以生理鹽水洗滌3 次; 重懸，并將體積調整至約125 mL。② CIK細胞培養: 采用無血清AIM-V培養基重懸單個核細胞， 加入干擾素-γ，置于37 ℃、5%CO2條件下孵育24 h, 依次加入CD3單抗、白細胞介素-1α、白細胞介素-2, 培養11 d時收集CIK細胞，采用離心機離心后以生理鹽水洗滌3次; 重懸，并將體積調整至約125 mL。③ DC-CIK細胞的體外誘導與回輸: 按照1∶5的比例混合DC細胞與CIK細胞，以5×108/L的濃度接種傳代培養10～14 d; 采用生理鹽水洗滌3次后加入生理鹽水(含1%的人血紅蛋白)，首次化療結束后10 d進行回輸，每個療程輸注4次，隨后再進行1個周期的化療。以21 d為1個療程，共治療6個療程。

1.3 療效評估

根據實體瘤療效評價標準(RECIST1.1)[7]評估2組患者治療效果: 完全緩解(CR)為病灶完全消失且無新病灶，持續時間>4周; 部分緩解(PR)為原有病灶最長直徑減少>30%, 持續時間>4周; 病情穩定(SD)為原有病灶最長直徑減少≤30%或增加<20%; 病情進展(PD)為原有病灶最長直徑增加≥20%或出現新病灶。客觀有效率(ORR)=(CR+PR)/總例數×100%, 疾病控制率(DCR)=(CR+PR+SD)/總例數×100%。

1.4 免疫功能指標測定

采用免疫比濁法測定2組患者外周血免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)水平; 采用流式細胞儀(美國Beckman Coulter Inc. ，型號FC500MCL)測定2組患者T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、自然殺傷細胞(NK)水平，并計算CD4+/CD8+值。

1.5 不良反應及生存分析

記錄2組白細胞計數(WBC)減少、皮疹、腹痛腹瀉、惡心、嘔吐、周圍神經病變、疲勞、周圍神經病變、發熱、骨髓抑制以及中性粒細胞減少等不良反應發生情況。不良反應分級參照美國國家癌癥研究所(NCI)制定的常規毒性判定標準(CTCAE v3.0)[8]。通過電話、微信等方式對全部患者進行隨訪，隨訪過程中無失訪患者，終點事件為全因死亡。統計總生存期及無進展生存期，采用Kaplan-Meier 法繪制2組患者生存曲線。

1.6 統計學分析

2 結 果

2.1 2組臨床指標比較

2組年齡、性別、臨床分期以及病理類型等臨床指標比較，差異均無統計學意義(P>0.05), 見表1。

表1 2組臨床指標比較

2.2 2組治療效果比較

治療后，化療組CR、PR、SD、PD患者分別為3例、11例、8例、8例，聯合組分別為7例、15例、6例、2例。聯合組ORR為73.33%(22/30), 高于化療組的46.67%(14/30); DCR為93.33%(28/30), 高于化療組的73.33%(22/30), 差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.3 2組治療前后免疫功能比較

治療前, 2組血清免疫球蛋白、T淋巴亞群水平比較，差異無統計學意義(P>0.05); 治療后, 2組血清IgG、IgA、IgM、CD3+、CD8+、NK水平均高于治療前，且聯合組高于化療組，差異有統計學意義(P<0.05); 治療后, 2組血清CD4+水平以及CD4+/CD8+值均低于治療前，且聯合組低于化療組，差異有統計學意義(P<0.05), 見表2。

表2 2組治療前后免疫球蛋白、T淋巴亞群水平比較

2.4 2組患者不良反應發生情況比較

2組患者WBC減少、皮疹、腹痛及腹瀉、惡心及嘔吐、周圍神經病變、疲勞、周圍神經病變、發熱、骨髓抑制以及中性粒細胞減少等不良反應發生率差異無統計學意義(P>0.05), 見表3。

表3 2組不良反應發生情況比較[n(%)]

2.5 2組Kaplan-Meier生存曲線比較

化療組患者無進展生存期為1～8個月(中位無進展生存期為3.33個月)，總生存期為2～12個月(中位總生存期為6.37個月); 聯合組患者無進展生存期為2～13個月(中位無進展生存期為6.40個月)，總生存期為2～15個月(中位總生存期為8.40個月)。Kaplan-Meier生存分析結果顯示，與化療組患者比較，聯合組患者生存情況較好，差異有統計學意義(P<0.05), 見圖1。

圖1 Kaplan-Meier生存曲線

3 討 論

機體正常情況下具有腫瘤免疫監視功能，腫瘤細胞易被免疫細胞清除，但腫瘤患者機體內具有識別及殺傷腫瘤細胞功能的淋巴細胞數量減少，且功能下降[9-10]。免疫細胞療法通過對患者體內T細胞介導的腫瘤殺傷效應進行激活提升機體抗腫瘤能力，發揮治療效果[11]。DC-CIK療法是一種新型的細胞過繼免疫治療方式，主要通過體外誘導的方式混合培養具有相應功能的DC以及CIK，產生一種具有更強抗腫瘤效應的DC-CIK, 并以回輸入患者體內的方式提升自身免疫功能，從而腫瘤細胞造成更有效的殺傷力[12]。本研究發現，聯合組患者治療效果更優、生存期更長，國外研究團隊也得出了與本研究一致結論。ZHAO Y等[13]以135例晚期非小細胞肺癌患者為研究對象，結果發現，在化療的基礎上聯合DC-CIK療法有利于延長患者無進展生存期及總生存期; TIAN L等[14]指出, DC-CIK聯合同步放化療有利于改善非小細胞肺癌患者的免疫指標、近期療效以及生活質量。DC-CIK同步化療提升治療效果的原因可能如下: 首先，DC是一種抗原遞呈細胞，能夠對初始型T細胞抗原呈遞過程起到誘導作用，將信息傳輸至CIK細胞，并指導CIK細胞對腫瘤細胞進行有效殺傷，該療法在很大程度上提升了抗腫瘤的靶向性; 其次，當CIK細胞的增殖能力明顯提升時，效應細胞數量也隨之上升，進一步提升了對腫瘤細胞的殺傷能力，最終提升治療效果。

惡性腫瘤患者多呈免疫抑制狀態，且放化療、手術等應激均可加重免疫抑制效應。免疫球蛋白是一類重要的免疫效應分子，主要包括IgG、IgA、IgM等[15]。T淋巴細胞是來源于骨髓的多能干細胞，其亞群CD4+的主要功能為誘導及輔助免疫, CD8+屬于細胞毒性T細胞，在機體免疫中起殺傷靶細胞的作用，通常根據CD4+/CD8+水平衡量機體免疫功能狀態，其比值過低提示機體處于“免疫抑制”狀態[16]。本研究結果發現, 2組治療后血清IgG、IgA、IgM、CD3+、CD8+、NK提高, CD4+水平以及CD4+/CD8+值降低，提示2組治療后免疫功能均得到了改善，且聯合組患者改善幅度更大。分析原因可能為: 非小細胞肺癌患者機體存在DC細胞缺乏情況，導致其T細胞水平降低，免疫功能下降，而DC-CIK療法中外源性DC細胞的補充有利于促進效應T細胞增加。此外, CIK細胞作為機體外周血單核細胞中的T淋巴細胞，具有殺滅腫瘤細胞的能力，因此該療法通過增加T細胞水平，改善進一步改善患者免疫功能[17]。曲雅靜等[18]提出，在紫杉醇聯合順鉑化療方案的基礎上采用DC-CIK療法可通過提升非小細胞肺癌患者免疫球蛋白水平增強治療效果。陸婉玲等[19]研究發現，在放化療基礎上聯合DC-CIK免疫療法有利于改善患者CD4+、CD8+等免疫因子水平和提高生活質量。XIAO Z等[20]指出, DC-CIK療法可通過增加外周血T淋巴細胞亞群、CIK細胞以及NK細胞水平來提升機體免疫功能及抗腫瘤能力，與本研究結果一致。此外, 2組患者不良反應發生率比較，差異無統計學意義(P>0.05), 提示DC-CIK細胞過繼免疫療法是安全可行的。但本文為小樣本單中心研究，后續仍需更大樣本量的前瞻性研究進行探索。

綜上所述, DC-CIK細胞過繼免疫治療聯合DP化療方案有利于提高晚期非小細胞肺癌患者治療效果，改善免疫功能，延長生存期，且不增加不良反應的發生風險。