針對《GLDC基因復(fù)合雜合突變致非經(jīng)典型非酮性高甘氨酸血癥家系的臨床和遺傳學(xué)分析》一文讀者提出問題的反饋

1 趙培偉老師提出的具體問題

（1）原文中圖2為甘氨酸脫氫酶（glycine dehydrogenase，GLDC） 蛋白的Western blot檢測圖，圖中有兩個突變體，突變一為無義突變（表達(dá)提前終止），突變二為錯義突變，在Western blot結(jié)果中不應(yīng)該是大小相同的條帶。

（2） 原文中多處有“c.1296C＞G（p.Ser419 STer）”寫法，其中STer是什么意思？是否正確？

2 作者回答

感謝讀者對我們文章的關(guān)注，并指出文章存在的不足之處。針對讀者提出的問題，我們已核實并做出如下回復(fù)。

回答（1）：經(jīng)讀者問題提醒，我們翻看了預(yù)實驗的凝膠電泳圖（圖1），發(fā)現(xiàn)考馬斯亮藍(lán)染色后，突變一泳道在紅色箭頭處有一蛋白表達(dá)條帶，其分子量約為50～70 kDa，現(xiàn)我們推測該條帶應(yīng)為GLDC基因c.1256C＞G（p.S419X）無義突變的蛋白表達(dá)條帶，但由于當(dāng)時本人對“無義突變導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止，蛋白分子量減小”這一現(xiàn)象認(rèn)識不足，在Western blot實驗中未對該條帶進(jìn)行后續(xù)實驗，也未在文章中呈現(xiàn)。

原文中呈現(xiàn)的Western blot圖（圖2），突變一泳道與pMCV-GLDC對照、突變二泳道蛋白條帶大小一致，且顏色深度相似，我們推測c.1256C＞G（p.S419X）無義突變生成的截短蛋白對H293T細(xì)胞中的野生型GLDC蛋白可能存在負(fù)反饋調(diào)節(jié)，使野生型GLDC蛋白表達(dá)量增多，因此產(chǎn)生了原文圖中的結(jié)果，原文也就按實際實驗結(jié)果圖進(jìn)行了呈現(xiàn)，但其具體機(jī)制尚不明確，有待深入研究。

圖1 預(yù)實驗GLDC蛋白的檢測考馬斯亮藍(lán)染色后照片 突變一為c.1256（p.S419X），突變二為c3006C＞G（p.C1002W），紅色箭頭所指為一蛋白表達(dá)條帶，其分子量約為50～70 kDa，推測該條帶應(yīng)為GLDC基因c.1256C＞G（p.S419X）無義突變的蛋白表達(dá)條帶。

圖2 GLDC蛋白的檢測 突變一為c.1256（p.S419X），突變二為c.3006C＞G（p.C1002W）。突變一和突變二的GLDC蛋白表達(dá)高于空白對照和空載對照；與pMCV-GLDC對照相比，無明顯變化。

回答（2）：原文中多次出現(xiàn)的“c.1256C＞G（p.Ser419STer）”中的“STer”為書寫錯誤，應(yīng)更正為“c.1256C＞G（p.Ser419Ter）”。

3 趙培偉老師針對作者回復(fù)的反饋

GLDC基因編碼體內(nèi)甘氨酸裂解酶系統(tǒng)（glycinelyase system,GCS）的P蛋白亞基，約70%的非酮性高甘氨酸血癥由該基因異常所致。野生型GLDC蛋白含有1 020個氨基酸（NP_000161），分子量大小約為113 kDa，文章中GLDC基因c.1256C＞G變異屬于無義突變，導(dǎo)致編碼的GLDC蛋白提前終止（p.S419X），故產(chǎn)生截短蛋白，大小約45 kDa。因此在細(xì)胞實驗中，Western blot檢測GLDC蛋白表達(dá)水平時應(yīng)注意觀察野生型及突變體所在位置。一般構(gòu)建野生型及突變體表達(dá)質(zhì)粒時應(yīng)帶有Flag或Myc等標(biāo)簽，探討突變對蛋白表達(dá)水平的影響時，利用標(biāo)簽抗體進(jìn)行檢測。

作者提供了考馬斯亮藍(lán)染色的PAGE凝膠圖片，觀察到了截短的GLDC蛋白，并推測了野生型GLDC表達(dá)水平升高的原因，解釋尚且合理。

關(guān)于突變的書寫規(guī)范，請參考人類基因組變異協(xié)會 （Human Genome Variation Society，HGVS）的規(guī)則，該規(guī)則是目前學(xué)術(shù)界所公認(rèn)的突變命名規(guī)則。原文中無義突變可表示為p.Ser419Ter或p.Ser419*。