豬瘟E2滅活疫苗與活疫苗免疫效果比較

文│齊亞輝（陜西省動物衛生與屠宰管理站）

朱寶（陜西省動物疫病預防控制中心）

韓永剛（陜西省漢中市漢臺區畜牧獸醫技術推廣中心）

馮樹濤（陜西省靖邊縣寧條梁區域農牧工作站）

豬瘟又稱經典豬瘟或古典豬瘟，是豬的一種急性、發熱接觸性傳染病，在自然條件下只感染豬。該病流行范圍很廣，而且致死率極高，給世界養豬業造成嚴重危害。目前，豬瘟流行地區或國家主要采用接種C株弱毒疫苗的方法作為預防豬瘟的主要策略，但接種弱毒疫苗的傳統預防控制方法無法區別疫苗免疫抗體和自然野毒感染抗體，為了采用血清學方法凈化消滅豬瘟，新型基因標記疫苗的研究已經迫在眉睫。近些年陸續有國內外研究者應用分子生物學和基因工程方法，對豬瘟野毒株或弱毒株進行基因修飾構建出新毒株，其中以Erns（或E0）和E2為基礎構建新毒株的方法占據著重要地位。有中國臺灣研究者利用巴斯德畢赤酵母系統成功表達了重組豬瘟E2蛋白，并在其后的動物保護試驗中獲得成功。國內研究者對亞單位疫苗的研究比較深入，一個商品化的桿狀病毒表達的重組E2亞單位疫苗已成功注冊，并推廣使用。此外，還有其他學者正在研究CHO表達E2等。

豬瘟C株活疫苗可以誘導產生針對不同強毒株和各種基因群的免疫保護，臨床保護率可達100%，被行業認定為控制豬瘟的“金標準”疫苗。但是經典的C株疫苗不能區分主動免疫和自然野毒感染動物，為了完成中國《國家中長期動物疫病防治規劃（2012—2020年）》及《國家豬瘟防治指導意見（2017—2020年）》中的到2020年年底，全國所有種豬場和部分區域達到豬瘟凈化標準，并進一步擴大豬瘟凈化區域范圍的要求，新型豬瘟標記疫苗將在凈化、消滅豬瘟的過程中發揮重要作用。

當前，規模豬場開展豬瘟凈化時，需要先成為豬瘟穩定控制場，即在進行豬瘟E2蛋白桿狀病毒重組滅活疫苗免疫6～8個月后的豬群中，完全清除所有豬瘟自然野毒感染產生的E0抗體陽性的豬只。可以看出，目標豬場內進行豬瘟E2蛋白桿狀病毒重組滅活疫苗免疫是創建豬瘟穩定控制場的一項必要步驟。因此，開展豬瘟病毒E2蛋白滅活疫苗及豬瘟C株活疫苗產品臨床免疫效果評價，是保證豬瘟免疫效果的必要工作。

漢臺區是陜西省漢中市政治、經濟、文化中心，近年來隨著城鎮化快速發展，養殖用地逐年減少，生豬集約化飼養成為該區畜牧業發展的主攻方向。為此，開展不同豬瘟疫苗免疫效果評價，提高養殖場豬瘟防控水平，客觀評估疫情壓力及傳播風險，為經典豬瘟防控提供技術支撐。

一、材料與方法

1.兩種豬瘟疫苗免疫方法。對比試驗豬場為規模養殖場，母豬存欄量540頭。實行程序化免疫。

豬瘟E2滅活疫苗：母豬于2018年7月26日普免50頭，免疫劑量為2毫升/頭；保育豬免疫日齡30天，免疫98頭，免疫劑量為2毫升/頭；5號育肥圈育肥豬首次為30日齡免疫C株活疫苗，60日齡二免滅活疫苗2毫升/頭，免疫50頭。

豬瘟C株活疫苗（脾淋）：全場剩余母豬于2018年7月27日普免，免疫劑量為2頭份/頭；保育豬、育肥豬首免日齡30天，55日齡二免；5號育肥圈育肥豬首次為30日齡免疫C株活疫苗，60日齡二免豬瘟活疫苗2頭份/頭，免疫300頭。

母豬上述豬瘟疫苗均每間隔4個月加強1次。

2.樣品采集。按照總體隨機抽樣的方式，保育豬在75日齡進行血液樣本采集；育肥豬在125日齡進行采樣；母豬在10月21日（疫苗免疫后85天）進行采樣。全血置室溫下自然凝固，分離血清于離心管中，編號后于－20℃保存待檢。本次共采集血清樣本母豬20份、保育豬20份、育肥豬20份；其中，豬瘟E2滅活疫苗、豬瘟C株活疫苗（脾淋源）各10份。

3.檢測方法。選用在疫苗免疫后早期抗體檢測中敏感性明顯高于進口阻斷ELISA試劑盒，而特異性與之沒有明顯差異的國產豬瘟間接ELISA試劑盒，操作步驟按照試劑盒說明進行。

4.儀器設備。Sunrise酶標儀、電熱恒溫培養箱、普蘭德移液槍（10～100微升、20～200微升）八道移液器、超純水機、微量振蕩器、量杯、200微升一次性槍頭等。

5.檢測試劑。豬瘟抗體間接ELISA檢測試劑盒，由北京世紀元亨動物防疫技術有限公司提供，有效期20190917。

6.判定標準。

（1）試驗結果同時符合下列條件，方為有效：陰性對照OD450平均值應≤0.20，本試驗中陰性對照OD450平均值＝（0.090+0.087）/2＝0.0885≦0.20；兩孔陽性對照OD450平均值應≥0.80，本試驗中陽性對照OD450平均值＝（1.45+1.387）/2＝1.4185≥0.80。均符合試驗要求條件，試驗有效。

（2）結果的判定。陽性：樣品OD450值≥陽性對照OD450平均值×0.3，即CSFV抗體陽性。本試驗陽性樣品判定條件為：1.4185×0.3＝0.4256；可疑：陽性對照OD450平均值×0.3≥樣品OD450值≥陽性對照OD450平均值×0.25，應再進行雙孔復試，若任意孔或兩孔均為陽性，則視為CSFV抗體陽性；若任意孔或兩孔均為陰性，則視為CSFV抗體陰性。本試驗中：1.4185×0.3＝0.4256≥樣品OD450值≥1.4184×0.25＝0.3546為可疑；陰性：樣品OD450值≤陽性對照OD450平均值×0.25，即CSFV抗體陰性。本試驗中：樣品OD450值≤1.4184×0.25＝0.3546為陰性。

7.數據處理。利用計算機統計分析軟件對結果進行對比分析，檢驗采用卡方檢驗，檢驗水平取0.05。

二、檢測結果

本次豬瘟疫苗免疫效果對比試驗結果見表1。

表1 對比試驗結果

三、討論與分析

豬瘟疫苗不同生產工藝抗原含量差距較大，相應工藝之間抗原含量標示方法也有較大差異；本次選用種度代次較低的脾淋C株疫苗進行對比；活疫苗可很快誘導細胞免疫，免疫早期檢測不到中和抗體的情況下，豬卻能抵抗強毒的攻擊，說明免疫早期細胞免疫的作用更加重要。如果接種后晚些時間攻毒，豬群中和抗體水平與攻毒保護之間呈一定相關性。張東東、寧宜寶等研究顯示抗體中和檢測方法（FVNT）與間接ELISA檢測方法對免疫豬血清抗體由陰轉陽的檢出時間大致一樣，而與阻斷ELISA試劑盒相差較大，因此雖然本次僅對兩種疫苗各階段豬只免疫抗體的間接ELISA檢測結果進行了比對研究，但比較結果仍具有一定指導意義。

對比試驗中豬瘟E2滅活疫苗與豬瘟（脾淋源）疫苗母豬、育肥豬、保育豬免疫抗體效價OD值數據經兩樣本均數T檢驗分析分別為：母豬，t＝9.1283、P＜0.001（t0.001＝3.922），差異極其顯著；育肥豬，t＝3.8511、P＜0.01（t0.01＝2.878），差異極顯著；保育豬，T＝2.5455、P＜0.05（t0.05＝2.101），差異顯著。

本次試驗中豬瘟E2滅活疫苗與豬瘟（脾淋源）活疫苗免疫抗體效價OD值離散度分別為：母豬，7.08%、8.90%，差異不顯著；育肥豬16.09%、25.67%，豬瘟E2滅活疫苗免疫組整齊度更好；保育豬，24.83%、18.85%，豬瘟（脾淋源）活疫苗免疫組整齊度更好。

保育豬豬瘟E2滅活疫苗抗體效價OD值離散度大于（脾淋源）活疫苗加強免疫組，原因可能是本次試驗中鑒于母豬是初次免疫豬瘟E2滅活疫苗，且仔豬豬瘟E2滅活疫苗免疫受母源抗體影響較小，為保持豬場免疫程序穩定，仔豬豬瘟E2滅活疫苗免疫安排在30日齡（疫苗說明書推薦首免日齡為70日齡），根據疫苗說明書使用方法，之后未再進行加強免疫；其次斷奶仔豬免疫系統發育不完全也是原因之一，因此保育豬階段尚需要更多的試驗數據進行免疫效果對比。