基因毒性雜質(zhì)甲磺酸甲酯測定方法驗(yàn)證

杜颯

浙江逸盛新材料有限公司 浙江 寧波 315803

引言

基因毒性雜質(zhì)是指化合物本身直接或間接損傷細(xì)胞DNA，產(chǎn)生基因突變或體內(nèi)誘變，具有致癌可能或者傾向，基因毒性雜質(zhì)危害性大，需要嚴(yán)格控制其在藥物中的限度，保障用藥安全。由于甲磺酸甲酯無紫外吸收且具有揮發(fā)性，所以采用氣相色譜法進(jìn)行方法開發(fā)與驗(yàn)證，以適用于殘留溶劑分析方法中甲磺酸甲酯的日常分析需要[1]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及試劑

儀器：氣相色譜儀Agilent 7890 B;色譜柱D B-WA X 30m×0.32mm×0.5μm；

電子天平 AL-104；微量進(jìn)樣針

試劑：甲磺酸甲酯；碘化鈉（分析純）稀釋液：超純水

1.2 實(shí)驗(yàn)條件和標(biāo)準(zhǔn)方法

采用DB-WAX 色譜柱（30m×0.32mm×0.5μm），F(xiàn)ID檢測器，進(jìn)樣口溫度100℃，分流比5:1，檢測器溫度270℃，柱溫：35℃保持8分鐘，然后以每分鐘40℃升溫至200℃，保持4分鐘。載氣為氮?dú)猓魉贋?.8ml/min；頂空進(jìn)樣頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時(shí)間為30分鐘，進(jìn)樣針溫度95℃，傳輸線溫度100℃。

1.3 實(shí)驗(yàn)過程

用微量進(jìn)樣針精密移取約20μl甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品置裝有適量超純水的50ml量瓶中，加超純水稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml置200ml量瓶中，加超純水稀釋至刻度，從中精密量取10ml置100ml量瓶中，加超純水稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備溶液，精密量取儲(chǔ)備溶液5ml置頂空瓶中，加入約6g碘化鈉，搖勻，軋蓋密封，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。

按照以上實(shí)驗(yàn)條件及方法分別從4個(gè)方面進(jìn)行驗(yàn)證：

1.3.1 專屬性：移取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液5ml分別至6個(gè)頂空瓶中，進(jìn)樣6次。甲磺酸甲酯峰理論板數(shù)應(yīng)不低于5000，6針峰面積RSD應(yīng)不小于10%。

1.3.2 定量限與檢測限：逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，如達(dá)到信噪比≥10:1，此濃度溶液為定量限溶液，取該溶液重復(fù)進(jìn)樣6次；如達(dá)到信噪比≥3:1，此濃度溶液為檢測限溶液。

1.3.3 線性：取從定量限濃度到標(biāo)準(zhǔn)限度濃度200%之間的5個(gè)線性檢測溶液進(jìn)樣。

1.3.4 耐用性：微調(diào)色譜參數(shù)（起始柱溫設(shè)定為33℃、37℃，流速設(shè)定為0.7ml/min、0.9ml/min）及更換色譜柱再分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行試驗(yàn)[2]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表：

表1 分析結(jié)果匯總表

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論

標(biāo)準(zhǔn)溶液按照標(biāo)準(zhǔn)方法分析譜圖如下：

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜

按實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，驗(yàn)證項(xiàng)目的結(jié)果都在可接受標(biāo)準(zhǔn)之內(nèi)，證明此方法可行，可靠。此方法可以作為甲磺酸甲酯的日常檢測分析。