關于HPLC法測定鹽酸米諾環素中甲醛殘留量的分析

顧國慶 張小軍 顧劍

揚子江藥業集團江蘇海慈生物藥業有限公司 江蘇 泰州 225300

引言

鹽酸米諾環素是四環素類抗菌藥物，抗菌作用較強，對產氣桿菌、流感嗜血桿菌、克雷白桿菌等敏感菌引起的感染，抗菌作用較好。為保證鹽酸米諾環素臨床用藥安全性，應嚴格控制鹽酸米諾環素中雜質殘留，提升藥品質量控制水平[1]。結合鹽酸米諾環素原料藥的起始物料和生產工藝研究顯示，其可能存在甲醛殘留，其檢測方法以高效液相色譜法為主，為明確其檢測效果，本次研究選擇2020年1月～2021年1月期間選擇三批次鹽酸米諾環素原料藥，各120粒（6000mg），對HPLC法測定甲醛殘留量的效果進行分析，現總結如下。

1 儀器與試劑

1.1 樣品與儀器

2020年1月～2021年1月期間選擇三批次（產品批號200228、201028、200917）鹽酸米諾環素原料藥（規格50mg*10s，揚子江藥業江蘇海慈生物藥業有限公司），各120粒（6000mg）；儀器Agilent 1100型HPLC儀；調速攪拌器（D-971型鄭州長城科工貿有限公司）；電熱鼓風干燥箱（重慶銀河試驗儀器有限公司）；分析天平（上海天平儀器廠）。

1.2 試劑

2，4二硝基苯肼均為分析純；甲醛溶液（分析純≥99.7%）、磷酸（分析純≥99.7%）和無水乙醇（分析純≥99.7%）均為國藥集團化學試劑。

1.3 方法

（1）色譜條件

ZORBAX Extend-C18(4. 6mm×250mm， 5μm)，流動相：以磷酸溶液-乙腈(50：50)，取磷酸和乙腈，各5.75g，加水至1000mL，pH值調整至2. 85)，柱溫為30℃，檢測波長為336nm；供試品約2.0g，置25mL量瓶中，加1mL對照溶液和19ml無水乙醇，充分混勻，離心分離；取5ml上清液，10ml量瓶中，精密加入3mL磷酸水溶液、1ml2，4二硝基苯肼無水乙醇溶液，無水乙醇稀釋至25ml，靜置后作為分離度溶液。空白溶液：精密量取5mL無水乙醇，與1ml純凈水混合。按上述色譜條件測定，參照《中國藥典》收載的相關檢測方法，以甲醛濃度(c)對峰面積(A)進行線性回歸，峰面積與濃度線性關系良好[2]。測定按上述色譜條件，測定3批樣品，以外標法計算甲醛含量。

1.4 統計學方法

采用SPSS20. 0 統計學軟件分析所有數據，以均數±標準差（±s）表示計量資料，采用t檢驗；以（%，n）表示計數資料，采用χ2檢驗，P＜0.05 認為差異顯著，有統計學意義。

2 結果

2.1 三批次鹽酸米諾環素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度比較

分離度溶液所得圖譜中，溶劑干擾峰與甲醛峰的分離度應＞3.5，HPLC法檢測三批次鹽酸米諾環素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度均超過3.5，三批次比較，差異無統計學意義（P＜0.05）。見表1。HPLC法甲醛峰與溶劑干擾峰典型色譜圖（見圖1）和空白圖譜（見圖2）。

表1 三批次鹽酸米諾環素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度比較

圖1 分離度溶液甲醛峰與溶劑干擾峰典型色譜圖

圖2 甲醛峰與溶劑干擾峰空白圖譜

2.2 三批次鹽酸米諾環素原料藥甲醛含量比較

按上述色譜條件，測定3批鹽酸米諾環素原料藥甲醛含量，分別為（0.0015±0.0002）%、（0.0016±0.0003）%、（0.0015±0.0001）%，差異無統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 三批次鹽酸米諾環素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度比較

3 討論

鹽酸米諾環素現有的生產方法，主要以山環素為原料，經過氯代和偶氮化反應、鈀碳還原和甲醛反應等過程得到米諾環素。現有合成方法異構體含量高、純度低等缺陷，影響鹽酸米諾環素原料藥的潛在雜質研究顯示，其可能存在甲醛殘留，為保證其藥品質量，應積極控制其甲醛的殘留量[3]。

鹽酸米諾環素的相關雜質檢測已收載于《中國藥典》中，應嚴格控制甲醛等雜質殘留量，進而有效控制產品質量。為增加提升產品競爭力，加強產品的質量控制，應完善鹽酸米諾環素質量標準，嚴格把控藥品質量[4]。但是，鹽酸米諾環素中甲醛殘留量的研究較多，尤其應完善甲醛殘留量的檢測方法，從而有效控制藥品中實際含量。大量文獻研究顯示，原料藥中毒性雜質，主要采用HPLC檢測，值得借鑒，可為鹽酸米諾環素中甲醛殘留量檢測提供研究依據。HPLC法為常用的藥物分析方法，近年來其技術水平不斷提升，檢測準確性得到了有效提升，且具有分離度高、準確性高、穩定性好、操作簡單等優勢[5]。HPLC法在鹽酸米諾環素雜質測定中應用較多，對于甲醛殘留量測定效果良好，可完全分離甲醛峰與干擾峰，準確度高[6]。本次研究也發現，HPLC法檢測分離度溶液所得圖譜中，三批次鹽酸米諾環素原料藥干擾峰與甲醛峰分離度均超過3.5，三批次（6.53±0.62、6.62±0.67、6.79±0.49）比較，差異無統計學意義（P＜0.05），可知HPLC法對甲醛的分離度較高，且各批次分離度均較好。此外，本次研究還發現，測定3批鹽酸米諾環素原料藥甲醛含量，分別為（0.0015±0.0002）%、（0.0016±0.0003）%、（0.0015±0.0001）%，差異無統計學意義（P＜0.05），可知HPLC法可有效檢出鹽酸米諾環素原料藥甲醛殘留量，且分離度高、準確性好，檢測結果各批次甲醛殘留量相差較小，穩定性較高，HPLC法值得推廣借鑒。

綜上所述，HPLC法測定鹽酸米諾環素中甲醛殘留量的分離度好、穩定性好，檢測效果良好，應用價值較高。