75%攝食量對尿酸酶缺失大鼠的降尿酸作用*

綦雅琳，秦 婉，杲銀芳，范 楠，萬旭蓮，云 宇，段為鋼

（1. 云南中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650500；2. 昆明醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系，云南 昆明 650500）

尿酸是人類嘌呤代謝終產(chǎn)物，其產(chǎn)生過多和（或）排除減少均可導(dǎo)致尿酸水平升高[1-2]。體內(nèi)的嘌呤大部分（約80%）來自于衰老細(xì)胞中的核酸分解，另一部分來自于飲食，尤其是嘌呤含量較高的飲食（如啤酒，動物內(nèi)臟、海鮮等）[3]。飲物來源的嘌呤約占體內(nèi)總嘌呤的20%左右。外源性飲物嘌呤雖然不是嘌呤的主要來源，但近十余年的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，高尿酸血癥的發(fā)生及痛風(fēng)的發(fā)作與飲食密切相關(guān)[4-6]。隨著人們生活條件的好轉(zhuǎn)，人群尿酸水平出現(xiàn)逐年升高的趨勢，高尿酸血癥和痛風(fēng)的患病率也因此逐年上升。而改變飲食結(jié)構(gòu)和飲食習(xí)慣，調(diào)節(jié)飲食模式成為了臨床指導(dǎo)防治高尿酸血癥及痛風(fēng)發(fā)作的重要手段。

我國超一半成年人超重或肥胖，成為全球超重或肥胖人數(shù)最多的國家，而傳統(tǒng)的“三高”已演化為“五高”[7]，而作為第“四高”的高尿酸血癥與肥胖有著密切聯(lián)系[8-9]。雖然控制飲食量在臨床防治高尿酸血癥上少見，但在高尿酸血癥的防治指南中有一條是控制體質(zhì)量，而節(jié)食對控制體質(zhì)量有很好的效果，同時(shí)中醫(yī)對高尿酸血癥及痛風(fēng)的防治也有相同的認(rèn)識，中醫(yī)內(nèi)科學(xué)將痛風(fēng)劃分為痹證的范疇，在對痹證病因病機(jī)的分析時(shí)，其中有一條提到“飲食不節(jié)”，即中醫(yī)認(rèn)為過食肥甘厚味，傷及脾胃，釀生痰濕，痰瘀互結(jié)，導(dǎo)滯經(jīng)絡(luò)瘀滯，氣血運(yùn)行不暢，故發(fā)為痹癥[10]。多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為高尿酸血癥及痛風(fēng)的病機(jī)演變常見于本虛標(biāo)實(shí)之間，該病的發(fā)病基礎(chǔ)為脾腎虧虛，加之飲食不節(jié)等不良飲食習(xí)慣以及風(fēng)寒濕熱等病邪為患發(fā)為此病，而痰濕瘀熱為發(fā)病主要病理因素[11-16]。因此，針對痹證的危險(xiǎn)因素采取預(yù)防干預(yù)措施，如節(jié)制飲食，以減少痹證的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。雖然控制飲食量能防治高尿酸血癥及痛風(fēng)的發(fā)作，但那到底將飲食量控制在多少時(shí)能更好地防治高尿酸血癥呢？為了對不同攝食量進(jìn)行驗(yàn)證，找出較佳攝食量，為降尿酸提供更可靠的參考，本研究采用尿酸酶缺失動物（昆明DY 大鼠），與其它高尿酸血證動物模型相比，該大鼠嘌呤代謝與人類高度相似[17]。

1 材料和方法

1.1 材料 雄性昆明DY 大鼠由課題組自行繁育。尿酸檢測試劑盒（磷鎢酸法）、肌酐（Cr）檢測試劑盒（肌氨酸氧化酶法）、血尿素氮（BUN）檢測試劑盒（二乙酰肟比色法）、血糖檢測試劑盒（葡萄糖氧化酶法）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）檢測試劑盒（微板法）、高密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）檢測試劑盒（微板法）、甘油三酯（TG）檢測試劑盒（GPO-PAP 酶法）、總膽固醇（TCHO）檢測試劑盒（COD-PAP 法）由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。輻照飼料由蘇州雙師實(shí)驗(yàn)動物飼料科技有限公司生產(chǎn)，符合GB14924.2-2001 標(biāo)準(zhǔn)。酶標(biāo)儀（K6600-A）由北京凱奧科技發(fā)展有限公司制造。

1.2 動物實(shí)驗(yàn)

1.2.1 禁食實(shí)驗(yàn) 將45 d 日齡的雄性昆明DY 大鼠飼養(yǎng)于20～24℃環(huán)境，模擬自然光照，選擇血尿酸在40 μg/mL 以上的大鼠，依次分成2 組，每組6 只，即正常組和禁食組，每日稱其體重，然后剪尾，取血，測定血清尿酸值（第0 天，第1 天，第2 天），其余時(shí)間將其放入代謝籠中，監(jiān)測24 h 的攝入量和排泄量。兩天后，將大鼠麻醉，腹主動脈取血，離心取血清，測定血尿酸和排泄物尿酸值。

1.2.2 節(jié)食實(shí)驗(yàn) 將48 只Kunming-DY 雄性大鼠隨機(jī)分成100%、90%、80%、75%、70%、60%、50%和25%攝食量組，每組6 只，稱重，然后剪尾取血，測定血清尿酸值（第0 天），其余時(shí)間將其放入飼養(yǎng)籠中各組每天按照正常攝食組的食量進(jìn)行控制，每天記錄各組大鼠體質(zhì)量、飲水量，每隔7 d 剪尾取血，測定血清尿酸值。為了確認(rèn)75%飲食量對其他代謝指標(biāo)的影響，特如法重復(fù)該組，增測肌酐、尿素氮、血糖及血脂值等指標(biāo)。

1.3 指標(biāo)檢測 收集的血液樣品凝固后于離心（3 000×g，5 min）制備血清，血清直接用于尿酸檢測。收集到的尿液混勻后吸取1 mL 作為樣品，用50 mmol/L 碳酸氫鈉溶液稀釋20 倍后檢測尿酸含量。收集到的糞便則加入3 倍重量的100 mmol/L 氨丁三醇溶液，置于搖床上140 r/min 振搖4 h，10 000×g 離心5 min 取上清1 mL 用于檢測尿酸含量。尿酸的含量測定方法則按照廠家提供的說明書進(jìn)行。

肌酐、尿素氮、血糖及血脂的檢測按照說明書進(jìn)行檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué) 數(shù)據(jù)采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，由于動物血清尿酸以及多種指標(biāo)可能存在日齡波動，以正常組指標(biāo)的前后變化為對照，計(jì)算各組多個(gè)指標(biāo)（血尿酸、24 h 尿量、尿液尿酸濃度、24 h 尿液尿酸總量、24 h 糞便、糞便尿酸含量、24 h 糞便尿酸總量、尿酸排泄總量、24 h 進(jìn)食量、飲水量和體重）前后的變化值（即，對排尿量、24 h 相對尿液尿酸總量、24 h 相對排便量、24 h 相對糞便尿酸總量、相對尿酸排泄總量、24 h 相對進(jìn)食量和24 h 相對飲水量）校正為200 g 大鼠的指標(biāo)（公式2），在此基礎(chǔ)上再比較各指標(biāo)的前后變化值（即，實(shí)驗(yàn)14 d 時(shí)的值-實(shí)驗(yàn)前的值）。實(shí)驗(yàn)前后血清尿酸、尿液尿酸和糞便尿酸含量的比較采用配對t 檢驗(yàn)，其他各組之間的指標(biāo)采用方法分析，若存在組間差異，兩兩比較采用LSD 法（方差齊性）或Tamhane’s T2 法（方差不齊），以P＜0.05 表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（1）。

2 結(jié)果

如圖2 所示節(jié)食實(shí)驗(yàn)觀察了不同攝食量處理14 d 后對昆明DY 大鼠血尿酸、體質(zhì)量、飲水量的影響（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n=6）。 其中不同攝食量如下所示：100%（4/4）攝食組，正常組，自由飲食；90%、80%、75%（3/4）、70%、60%、50%（2/4）、25%（1/4） 攝食量組，自由飲用自來水，每天飲食量為正常組每日飲食量的90%、80%、75%、70%、60%、50%、25%；W0，實(shí)驗(yàn)前；W1，實(shí)驗(yàn)7d；W2，實(shí)驗(yàn)14 d。表1 和表2，進(jìn)一步研究75%（3/4）攝食量降尿酸的可能機(jī)理及對體內(nèi)腎功、血糖、血脂的影響（±s，n=6）。*P＜0.05，配對t 檢驗(yàn)2.1 禁食實(shí)驗(yàn)中昆明DY 大鼠各指標(biāo)前后變化 禁食2 d 后，禁食組大鼠前后對比，血尿酸水平明顯上升而尿尿酸水平明顯下降，正常組大鼠血清尿酸和尿尿酸水平則較為穩(wěn)定（圖1A、B）。同時(shí)實(shí)驗(yàn)前后正常組大鼠體質(zhì)量和飲水量有所升高，24 h 尿液量和尿尿酸含量無明顯差異，禁食使大鼠體質(zhì)量、飲水量、24 h 尿液重量和尿尿酸含量明顯下降（圖1C、D、E、F）。

圖1 尿酸酶缺失大鼠禁食組與正常飲食組尿酸、體質(zhì)量、飲水量的變化

2.2 節(jié)食實(shí)驗(yàn)中昆明DY 大鼠各指標(biāo)前后變化 在前期7 d 的大鼠處理因素中，正常組體質(zhì)量日益升高，3/4 攝食組體質(zhì)量基本維持不變，2/4 攝食組體質(zhì)量有下降的趨勢，1/4 攝食組體質(zhì)量明顯下降（圖2A、B）。后期補(bǔ)充的90%、80%、70%、60%攝食組與前期的1/4、2/4、3/4、4/4 攝食組整合，發(fā)現(xiàn)不同攝食量組大鼠實(shí)驗(yàn)前的血清尿酸水平雖存在一定差異，但均處于較高水平，75%（3/4）攝食組前后對比血尿酸水平明顯下降，而25%（1/4） 攝食組W1 血尿酸水平明顯升高，其它攝食量組前后無明顯差異（圖2C、D）。在節(jié)食過程中，攝食量與飲水量有很強(qiáng)的相關(guān)性（圖2E）。

圖2 節(jié)食實(shí)驗(yàn)中不同攝食量組尿酸、體質(zhì)量、飲食量的變化

2.3 75%攝食量組昆明DY 大鼠多個(gè)校正指標(biāo)前后變化 為了進(jìn)一步研究75%（3/4）攝食量降尿酸的可能機(jī)理及對體內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)的影響，特以75%（3/4）攝食量組大鼠第0 天的指標(biāo)為參照，考察其相關(guān)因素的前后變化。由表1 可見，75%（3/4）攝食量組昆明- DY 大鼠2 周后血尿酸水平明顯下降，24 h尿量、24 h 尿液尿酸濃度、24 h 尿液尿酸含量、24 h排尿酸總量和飲水量明顯下降，糞便的各項(xiàng)指標(biāo)無明顯差異，大鼠體質(zhì)量雖然有所波動，但總體趨勢是增加的。

表1 75%攝食量對昆明DY 大鼠多種校正的影響（±s，n=6）

表1 75%攝食量對昆明DY 大鼠多種校正的影響（±s，n=6）

注：與W0 相比，*P＜0.05，單因素方差分析。

血尿酸（μg/mL）24 h 尿量（mL/200g）尿液尿酸（μg/mL）24 h 糞便（g/200g）糞便尿酸（μg/g）24 h排尿酸總量（mg/200g）24 h飲水量（mL）體質(zhì)量（g）W0 83.1±26.2 33.2±3.4 1698.6±249.8 57.5±8.8 54.4±4.7 205.2±8.6 W1 65.0±14.2 28.3±4.1 871.7±110.0* 25.1±3.7* 39.8±7.0* 198.2±9.8*W2 46.0±14.1* 24.5±4.1* 622.6±262.7* 16.1±5.9* 32.7±3.6* 210.3±10.2*24 h尿液尿酸（mg/200g）56.2±9.2 24.5±3.4*15.2±6.2*24 h糞便尿酸（mg/200g）8.9±1.6 132.3±73.0 1.3±0.9 9.4±1.1 68.9±42.8 0.6±0.5 7.5±2.3 101.4±43.2 0.9±0.4

2.4 75%攝食量組昆明DY 大鼠多個(gè)血清代謝性指標(biāo)前后變化 在75%（3/4）攝食量對大鼠體內(nèi)多個(gè)血清指標(biāo)的影響中，血肌酐、甘油三酯和總膽固醇水平前后比較顯著下降，低密度脂蛋白明顯升高，實(shí)驗(yàn)前后大鼠血糖、尿素氮和高密度脂蛋白無明顯變化（表2）。

表2 75%攝食量對多種血清代謝指標(biāo)的影響（±s，n=6）

表2 75%攝食量對多種血清代謝指標(biāo)的影響（±s，n=6）

注：與W0 相比，*P＜0.05，單因素方差分析。

總膽固醇（mmol/L）W0 32.8±4.6 5.4±1.0 8.5±1.2 1.0±0.3 0.6±0.3 0.7±0.08 2.0±0.4 W1 33.8±6.4 55.3±1.2 66.4±1.6 1.1±0.2 0.7±0.2 0.3±0.06* 1.4±0.3*W2 8.5±3.9* 66.5±2.3 88.2±2.6 1.0±0.3 1.0±0.2* 0.3±0.09* 1.3±0.9肌酐（nmol/L）尿素氮（mmol/L）葡萄糖（mmol/L）高密度脂蛋白（mmol/L）低密度脂蛋白（mmol/L）甘油三酯（mmol/L）

3 討論

昆明DY 大鼠為課題組基于SD 大鼠自主研制的尿酸酶缺失大鼠，與尿酸酶缺失小鼠不同[18]，其血尿酸水平相對穩(wěn)定且與人相似[19-20]。且避開了造模劑的干擾[17]，可以更好地模擬人的血尿酸水平并評價(jià)食物和藥物對血尿酸的影響。

從本研究結(jié)果看，當(dāng)攝食量控制在75%）時(shí)對昆明DY 大鼠有顯著的降尿酸作用，并能很好的維持體重。而禁食組或其它攝食量組并沒有降低尿酸，令人意外的是禁食組和25%攝食量組的血尿酸還明顯升高。雖然有研究報(bào)告禁食能降低體質(zhì)量和體脂，并能改善血脂[21]，但在一項(xiàng)觀察10 人11 d 完全禁食不禁水和再次飲食對腎功能、體質(zhì)量、血壓和氧化應(yīng)激的影響的實(shí)驗(yàn)中得出完全禁食不禁水的確會增加血尿酸（血尿酸含量增加了近3 倍）[22]。Zürcher 等[23]報(bào)道了兩例在禁食減肥期間發(fā)生的急性尿酸鹽腎病，在這種情況下，酮癥酸中毒會導(dǎo)致腎臟尿酸排泄受損和高尿酸血癥，所以對于肥胖的高尿酸血癥患者來說禁食或過分少食是不利的。本研究用昆明DY 大鼠證明適當(dāng)節(jié)食能降尿酸，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看將攝食量控制在75%附近是較佳的選擇，不食或少食均不利于尿酸的控制，相反還可能升高尿酸。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)昆明DY 大鼠24 h 尿量、24 h 尿液尿酸濃度、24 h 尿液尿酸含量、24 h 排尿酸總量明顯下降。因此，從尿酸的生成和排泄分析，75%攝食量可能是因?yàn)闇p少了尿酸生成而導(dǎo)致了血尿酸下降，至于具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。由于75%攝食量除了能降尿酸，還能降低血肌酐、甘油三酯和總膽固醇水平，說明攝食量控制在75%時(shí)對腎有一定的保護(hù)作用且對改善血脂有利。

昆明DY 綜上，75%攝食量不但能降低血尿酸，改善腎功能，還對降血脂有利，同時(shí)為降尿酸提供了一個(gè)可行的策略。