獼猴桃潰瘍病藥用植物篩選及其復(fù)配增效研究

李曉蓮， 虞 江，李 渺， 李亞楠，宋新麗，楊林凱，譚福宗， 雷錢楊， 萬林松， 魏 嫻， 盧永仲， 柏 松， 呂夢(mèng)嵐

(1.貴州理工學(xué)院化學(xué)工程學(xué)院，貴州 貴陽 550003；2.貴陽虞氏蜂業(yè)有限公司，貴州 貴陽 550200)

0 引言

植物細(xì)菌性病害常年造成我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)損失，與植物真菌類病害相比，細(xì)菌的門類較小，但它帶來的危害卻不可小覷，當(dāng)前，全球性細(xì)菌性病害有500多種，我國的細(xì)菌性病害就有200多種，主要的類型有青枯病，細(xì)菌病，潰瘍病、軟腐病等，幾乎主要的栽培作物都會(huì)被一種或多種細(xì)菌感染，獼猴桃潰瘍病是作用在獼猴桃作物上的典型的細(xì)菌性病害，該細(xì)菌病害是由丁香假單細(xì)胞桿菌獼猴桃致病變種引起的一種毀滅性獼猴桃病害，一旦感染獼猴桃潰瘍病菌的植株，發(fā)病率高，癥狀嚴(yán)重，傳播快速、且難以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)植物感染獼猴桃潰瘍病菌后，會(huì)在植物有菌膿流出時(shí)才被發(fā)現(xiàn)，此時(shí)，植株已被嚴(yán)重感染，病菌已經(jīng)擴(kuò)展蔓延，嚴(yán)重時(shí)甚至毀園絕收，給獼猴桃種植戶造成巨大損失[1-7]，因此，尋找防治獼猴桃潰瘍病的方法對(duì)獼猴桃產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。化學(xué)農(nóng)藥的使用，有效地抑制了獼猴桃潰瘍病的發(fā)展，一定的提高了農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)，但隨著化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，不僅對(duì)環(huán)境造成污染，也使細(xì)菌的抗藥性增加，隨著人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，尋找對(duì)環(huán)境友好的新型防治劑，已經(jīng)成為人們的共同愿望，植物是生物活性化合物的重要來源之一，在其次生代謝產(chǎn)物中，大多數(shù)次生代謝產(chǎn)物都含有能有效抑菌的成分，將天然提取物作為新型的防治劑，符合當(dāng)前綠色農(nóng)藥的發(fā)展方向，受到植物保護(hù)研究人員的廣泛關(guān)注[8-11]。

1 材料與方法

1.1 材料

表1 供試植物名錄

試供植物樣品：所有試供植物均購買自貴陽中藥材批發(fā)市場(chǎng)。

試供培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)。

病原菌種：獼猴桃潰瘍病菌，由貴州理工學(xué)院化學(xué)與工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 方法

1.2.1 試供植物的預(yù)處理

首先將得到的植物材料放置于60℃的恒溫箱內(nèi)，干燥植物材料中的水分，等到植物材料完全被干燥后，再用研缽將植物材料粉碎成粉末狀物體，用40目篩篩剛剛粉碎好的粉末固體，然后將過完篩的粉末放入密封袋內(nèi)備用，取樣品粉末20.0 g，分三次加入100、70、30 mL的無水甲醇分三次用超聲波提取，超聲頻率為1200 Hz，工作間歇0.2 s，溫度40 ℃，每次的提取時(shí)間為30 min，每次提取后，抽濾收集濾液，濾渣繼續(xù)重復(fù)上述提取步驟一遍，然后丟掉，最后合并全部的提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑濃縮，用冷凍干燥器低溫干燥得到的固體樣品，然后將樣品保存在4 ℃下備用。

1.2.2 待測(cè)物的抑菌活性測(cè)試方法

按照植物提取物：葉枯唑?yàn)?∶1的比例配制待測(cè)藥液，采用試管倍比稀釋法測(cè)定5種混合液對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的MBC(最小殺菌濃度)[12-13]。準(zhǔn)備9支試管，編號(hào)1-9，用移液槍在9支試管中分別加入1 mL的滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯，然后用移液槍在編號(hào)1的試管中加入1 mL的待測(cè)藥液，重復(fù)打壓幾次移液槍使液體均勻混合，混勻后吸走1 mL的混合液打到編號(hào)2的試管中，重復(fù)打壓幾次移液槍使液體均勻混合，混勻后吸走1 mL的混合液打到編號(hào)3的試管中，重復(fù)以上步驟，直到第編號(hào)7的試管中的液體均勻混合后，吸走1 mL的混合液棄去，在7支試管中用移液槍分別加入1 mL106cfu/mL的獼猴桃潰瘍病菌菌液，在編號(hào)8的試管中用移液槍加入1 mL的滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯和1 mL相同濃度的獼猴桃潰瘍病菌菌液作為陽性對(duì)照，在編號(hào)9的試管中用移液槍加入2 mL的滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯作為陰性對(duì)照。然后將9個(gè)試管分別接種到培養(yǎng)基上，編號(hào)1a-9a，用肉眼觀察1a-9a的培養(yǎng)皿上是否有細(xì)菌生長(zhǎng)，以沒有細(xì)菌生長(zhǎng)的平板對(duì)應(yīng)的編號(hào)試管內(nèi)藥物濃度為藥液對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的最低殺菌濃度(MBC)。

2 結(jié)果分析

5種混合藥液對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的抑制效果如表2所示。

表2 5種混合藥液對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的抑制效果

注：“-”和“+”表示培養(yǎng)皿中是否長(zhǎng)有菌落；“-”表示無菌落生成，“+”表示有少量菌落生成；“++”表示菌落數(shù)較多。

研究結(jié)果表明，五種植物提取物與葉枯唑復(fù)配的混合藥液對(duì)獼猴桃潰瘍病菌具有一定的抑制作用，其中砂藍(lán)刺頭提取物與葉枯唑復(fù)配對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的MBC為31.25 mg/mL，鵝絨藤提取物與葉枯唑復(fù)配對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的MBC為62.50 mg/mL，沙打旺提取物與葉枯唑復(fù)配對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的MBC為31.25 mg/mL，日本菟絲子提取物與葉枯唑復(fù)配對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的MBC為62.50 mg/mL，苦馬豆提取物與葉枯唑復(fù)配對(duì)獼猴桃潰瘍病菌的MBC為31.25 mg/mL，其中，砂藍(lán)刺頭提取物、沙打旺提取物、苦馬豆提取物與葉枯唑復(fù)配后的抑菌活性優(yōu)于對(duì)照藥劑葉枯唑(MBC值為62.50 mg/mL)，鵝絨藤提取物、日本菟絲子提取物與葉枯唑復(fù)配后，活性與之相當(dāng)。

3 結(jié)語

由活性測(cè)試結(jié)果表明，五種天然植物提取物與葉枯唑的復(fù)配后對(duì)獼猴桃潰瘍病菌具有一定的抑制作用，大多數(shù)植物提取物與葉枯唑進(jìn)行1∶1復(fù)配后，其對(duì)于獼猴桃潰瘍病菌的抑制活性都優(yōu)于葉枯唑(MBC值為62.50 mg/mL)的活性，例如砂藍(lán)刺頭提取物、沙打旺提取物、苦馬豆提取物與葉枯唑復(fù)配后的抑菌活性(MBC值分為：31.25 mg/mL、31.25 mg/mL、31.25 mg/mL)，研究表明：具有抗獼猴桃潰瘍病菌的藥物，與另一活性的物質(zhì)復(fù)配后的藥物的抗獼猴桃潰瘍病菌的活性增強(qiáng)，本研究為開發(fā)植物源農(nóng)藥和研究復(fù)配型農(nóng)藥的增效提供了一定的理論基礎(chǔ)。