尋常型銀屑病血漿中CGRP1、VIP 水平與PASI 評(píng)分的相關(guān)性分析

張春利，王 薇，劉利君，何 磊，吳景良，牛艷東，李雪飛，段昕所

（1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚病與性病科，河北 承德 067000；2.天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院總醫(yī)院濱海醫(yī)院皮膚科，天津 300450）

銀屑病（psoriasis vulgaris，PV）是免疫介導(dǎo)的慢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性皮膚病，典型皮損臨床表現(xiàn)為鱗屑性紅斑或斑塊，其發(fā)生與遺傳、環(huán)境因素如潮濕、外傷、飲酒、精神緊張等因素有關(guān)[1]；且大多患者存在心理健康、情緒及社會(huì)適應(yīng)能力等問(wèn)題[2]。研究表明[3-5]，與敏性疾病和黑色素瘤患者相比，銀屑病患者更容易出現(xiàn)精神并發(fā)癥及自殺的念頭，主要是心理應(yīng)激因素通過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、外周神經(jīng)系統(tǒng)和皮膚下丘腦-垂體-腎上腺素軸，參與對(duì)銀屑病的神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)。而中樞神經(jīng)系統(tǒng)在應(yīng)激情況下可導(dǎo)致促炎神經(jīng)肽[降鈣基因相關(guān)肽（CGRP）、血管活性腸肽（VIP）]表達(dá)升高[6]。目前評(píng)估銀屑病嚴(yán)重程度的常用指標(biāo)之一為銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）[1]。本研究通過(guò)檢測(cè)不同PASI 評(píng)分的銀屑病患者血漿中的CGRP1、VIP 的表達(dá)情況，分析嚴(yán)重程度不同的尋常型型銀屑病患者血漿CGRP1 及VIP 表達(dá)水平及其與PASI 的相關(guān)性，以期為確定尋常性銀屑病嚴(yán)重程度的實(shí)驗(yàn)室判定指標(biāo)提供支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月～12 月于承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的尋常型銀屑病患者60 例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①依據(jù)2018 年銀屑病對(duì)尋常型銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]；②2 個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行規(guī)范化治療或出現(xiàn)病情復(fù)發(fā)的情況；③無(wú)嚴(yán)重肝腎功能異常、感染、腫瘤及其它系統(tǒng)性疾病或免疫性疾病等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴發(fā)有其它皮膚病、精神神經(jīng)類(lèi)疾病或者腫瘤性疾病患者；②妊娠期或哺乳期婦女。依據(jù)2018年尋常型銀屑病診療指南的PASI 對(duì)患者的病情嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估[1]（PASI＜3 分為輕度銀屑病，PASI 3～10 分為中度銀屑病，PASI≥10 分為重度銀屑病），將PASI 評(píng)分＜10 分設(shè)為PV1 組，PASI 評(píng)分10～20 分設(shè)為PV2 組，PASI 評(píng)分20～30 分設(shè)為PV3組，各20 例。同時(shí)另選取本院健康體檢者20 名作為對(duì)照組。PV1 組男14 例，女6 例，年齡11～82，平均年齡（50.80±9.87）歲；PV2 組男17 例，女3 例，年齡9～66，平均年齡（42.90±18.27）歲；PV3 組男15例，女5 例，年齡17～83，平均年齡（39.35.20±21.69）歲；對(duì)照組男14 例，女6 例，年齡18～64，平均年齡（50.80±9.87）歲。四組性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，所有研究對(duì)象知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 主要儀器及試劑 低速離心機(jī)（北京雷勃爾醫(yī)療器械有限公司），-80 ℃低溫冰箱（Haier 電器），4 ℃低溫冰箱（Haier 電器），全自動(dòng)酶標(biāo)儀（Thermo scientific Multiskan Mk3），定軌搖床（海門(mén)市其林貝爾儀器制定有限公司），GN-RO-100 型純水機(jī)（北京雙峰純水設(shè)備廠），人/小鼠/大鼠CGRP1 ELISA 試劑盒（美國(guó)RayBiotech 公司），人/小鼠/大鼠VIP ELISA 試劑盒（美國(guó)RayBiotech 公司）。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集及保存 采集研究對(duì)象外周靜脈血5 ml，置于肝素抗凝管中，均于3000 r/min 的轉(zhuǎn)速下離心10 min，取上清，并按一次用量分裝，凍存于-80 ℃低溫冰箱中保存。

1.3.2 CGRP1、VIP 檢測(cè) 參照ELISA 試劑和說(shuō)明操作的檢測(cè)，在450 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)出反應(yīng)孔的OD值。使用SigmaPlot 12.0 軟件，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，以B（標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的OD 值）/B0（0 ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)品的OD 值）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并計(jì)算各樣本的濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，利用Shapiro-wilk 檢驗(yàn)判斷樣本的正態(tài)性，計(jì)數(shù)資料以（n）表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，采用F檢驗(yàn)或Welch 檢驗(yàn)；利用線(xiàn)性回歸分析進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組CGRP1、VIP 水平比較 四組血漿CGRP1及VIP 表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中PV3 組＞PV2 組＞PV1 組＞對(duì)照組；但PV1 組與對(duì)照組血漿CGRP1、VIP 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；PV2 組與PV3 組血漿VIP 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 四組CGRP1、VIP 水平比較（，ng/ml）

表1 四組CGRP1、VIP 水平比較（，ng/ml）

2.2 PV 組血漿CGRP1 及VIP 的表達(dá)水平與PASI的相關(guān)性分析 PV 患者血漿CGRP1 與PASI 呈正相關(guān)（r=0.7093，P=0.0001）；PV 患者血漿VIP 與PASI 無(wú)相關(guān)性（r=0.2289，P=0.7850），見(jiàn)圖1。

3 討論

銀屑病是一種反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥性皮膚病，現(xiàn)廣泛認(rèn)為銀屑病發(fā)病機(jī)制與神經(jīng)、環(huán)境、遺傳、感染、代謝、免疫等因素有關(guān)。Vegas O 等[6]在銀屑病小鼠模型中將皮膚支配神經(jīng)切斷后發(fā)現(xiàn)，皮損現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)，炎癥因子相對(duì)減少，但皮損補(bǔ)充神經(jīng)肽后出現(xiàn)加重的情況，炎癥因子逐漸增多，這表明神經(jīng)參與銀屑病的發(fā)病過(guò)程。皮膚是外周的神經(jīng)內(nèi)分泌器官，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有相同的神經(jīng)外胚層來(lái)源、相似的下丘腦-垂體-腎上腺軸（HPA）系統(tǒng)和密布復(fù)雜的神經(jīng)纖維，并表達(dá)多種激素、神經(jīng)肽及其受體。研究表明[7]，CGRP 和VIP 相關(guān)神經(jīng)纖維在銀屑病患者的真皮乳頭層增多，可導(dǎo)致真皮乳頭的血管擴(kuò)張加重，從而加重銀屑病。

CGRP 在銀屑病皮損中是一種高表達(dá)的神經(jīng)肽，它包括37 個(gè)氨基酸，分為2 個(gè)亞型，具有相似的生物學(xué)效應(yīng)。CGRP 廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)，大部分由感覺(jué)神經(jīng)分泌，為皮膚中重要的感覺(jué)神經(jīng)遞質(zhì)，與皮膚免疫密切相關(guān)。研究顯示[8]，CGRP 可能通過(guò)促進(jìn)HaCaT 細(xì)胞增殖和分泌神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NFG），并刺激朗格漢斯細(xì)胞分泌白介素-1β（IL-1β）、白介素-10（IL-10），產(chǎn)生自身遷移[9]，從而使血管內(nèi)皮細(xì)胞活化，引起血管擴(kuò)張[10]；且CGRP 通過(guò)調(diào)節(jié)朗格漢斯細(xì)胞抗原提呈過(guò)程，可誘導(dǎo)CD4+T 細(xì)胞分化為T(mén)h17細(xì)胞[11]，參與銀屑病的發(fā)生途徑。而在銀屑病皮損中高表達(dá)的另一種神經(jīng)肽VIP 是一個(gè)由28 個(gè)氨基酸組成的腦腸肽，廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)，在神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)作用。研究表明[12]，VIP 可促進(jìn)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），引起血管過(guò)度增生和血管擴(kuò)張，與表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（KC）上的VIPR 結(jié)合，從而調(diào)節(jié)KC的功能，高濃度時(shí)促進(jìn)KC 分泌IL-6/IL-8 等細(xì)胞因子，導(dǎo)致KC 增殖[13]；且VIP 可調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞脫顆粒刺激KC 增殖[12，13]。本研究檢測(cè)了這兩條種神經(jīng)肽在外周血的表達(dá)情況，結(jié)果顯示四組血漿CGRP1 及VIP 表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中PV3 組＞PV2 組＞PV1 組＞對(duì)照組；但PV1 組與對(duì)照組血漿CGRP1、VIP 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；PV2 組與PV3 組血漿VIP 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示尋常型銀屑病患者血漿中CGRP1、VIP 表達(dá)水平總體高于健康人群，而輕中度銀屑病患者與健康人群的血漿中CGRP1 及VIP 水平表達(dá)一致。此外，本研究相關(guān)性分析顯示，PV 患者血 漿CGRP1 與PASI 呈 正 相 關(guān)（r=0.7093，P=0.0001）；PV 患者血漿VIP 與PASI 無(wú)相關(guān)性（r=0.2289，P=0.7850），說(shuō)明尋常型銀屑病患者外周血CGRP1 水平隨著尋常型銀屑病嚴(yán)重程度的增加而增加，而外周血VIP 水平有所升高，但不隨著尋常型銀屑病嚴(yán)重程度的增加而增加。

綜上所述，尋常型銀屑病患者血漿CGRP1 與PASI 評(píng)分密切相關(guān)，可作為輔助評(píng)價(jià)尋常性銀屑病嚴(yán)重程度的相對(duì)客觀的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。但由于銀屑病的發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，涉及的細(xì)胞因子較多，需要擴(kuò)大樣本量，豐富檢測(cè)方法以驗(yàn)證尋常型銀屑病患者外周CGRP1 與疾病嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。