H19基因rs2839698多態性與結直腸癌患病風險的相關性

陳佳園 陳成帷 陳怡 余炳取 陳爍 張益光

結直腸癌是世界第四大致命性癌癥，每年約有90萬人因結直腸癌死亡[1]。根據2015年中國癌癥數據顯示，結直腸癌分別位居女性最常見癌癥的第4位和男性最常見癌癥的第5位[2]。結直腸癌的發病機制復雜，影響因素很多，如吸煙、酗酒、過度肥胖、缺乏體育鍛煉、食用大量紅肉等[1，3-4]，但仍有很多患者并未暴露于這些危險因素中，提示遺傳易感性在結直腸癌的發病機制中可能起重要作用[1]。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是長度＞200個核苷酸的非蛋白質編碼轉錄本，具有轉錄調控、基因重排、表觀遺傳修飾、異染色質化等作用[5-6]，與影響癌癥易感性的各種生物學過程有關[7-8]。H19基因是第一個被發現的lncRNA，位于人類染色體11p15.5上，包含4個內含子和5個外顯子[9]。單核苷酸多態性可能影響基因表達和功能，增加癌癥易感性。有研究探索了H19基因rs2839698多態性與患癌風險的關系[6，10-13]，但不同類型癌癥的研究結果是相互矛盾的。Li等[12]發現H19基因rs2839698多態性會增加結直腸癌的發病風險，故本研究對兩者的關系作進一步探討，現將結果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2012年1月至2018年1月在浙江中醫藥大學附屬溫州中西醫結合醫院接受手術治療（術前未接受過放化療）的結直腸癌患者315例為病例組，同期在醫院體檢且性別、年齡均匹配的健康者441例為對照組，均為漢族。排除有癌癥或消化系統疾病家族史、其他來源轉移、放化療史的患者。病例組男60例，女255例；年齡（63.35±7.33）歲；BMI（25.18±1.45）kg/m2；有吸煙史204例；有飲酒史277例；有家族史44例；腫瘤直徑＞4 cm 165例，≤4 cm 150例；TNM分期：Ⅰ期67例，Ⅱ期90例，Ⅲ期93例，Ⅳ期65例；淋巴結轉移133例；組織學分級：高分化32例，中分化248例，低分化35例；組織學分型：腺癌300例，鱗癌13例，其他2例；腫瘤位置：結腸癌113例，直腸癌202例。對照組男87例，女354例；年齡（62.50±7.33）歲；BMI（25.15±1.51）kg/m2；有吸煙史203例；有飲酒史220例。兩組對象性別、年齡、BMI比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）；在吸煙史、飲酒史比較，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。本研究經浙江中醫藥大學附屬溫州中西醫結合醫院醫學倫理委員會審查通過，所有對象簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 收集患者人口學信息（性別、年齡、吸煙情況、飲酒情況、家族史等）以及腫瘤直徑、腫瘤位置、TNM分期、組織學分級、淋巴結轉移、病理組織學分型等。

1.2.2 基因分型檢測 采集所有對象外周血2 ml，使用TIANAMP血液DNA試劑盒[DP348-03，200次，天根生化科技（北京）有限公司]提取外周血白細胞基因組DNA；使用 NanoDrop 3300（美國 Thermo Scientific公司）在波長260和280 nm處測定并提取DNA的質量和濃度。本研究采用基于熒光的限制性片段長度多態性方法進行基因分型，用于核苷酸延伸反應的正向引物為CATCGTCCCCAGCTGATGTC，反向引物為GGAGTGATGACGGGGTGGAG；擴增體系為25 μl反應混合液，包括 1.25 μl基因分型 Assays（20×）、20 ng DNA、12.5 μl基因分型Master Mix（2×）。PCR條件：96 ℃ 5 min；96 ℃30 s，57 ℃ 40 s，35 個循環；72 ℃ 5 min。隨機抽查約10%的樣本進行兩次分型，以保證基因分型的準確性。

1.3 統計學處理 采用SPSS 22.0統計軟件。采用Hardy-Weinberg平衡檢驗評估對照組中實際頻數與預期頻數之間的偏差[14-15]。H19基因rs2839698多態性與結直腸癌風險的關系采用logistic回歸分析，計算OR值及其95%CI。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 H19基因rs2839698多態性與結直腸癌患病風險的關系 等位基因A與結直腸癌患病風險降低有關（P＜0.05），野生型基因AA、變異型基因AA+GA攜帶者患結直腸癌的風險明顯降低（均P＜0.05）；調整性別、年齡后，結果顯示AA+GA攜帶者患結直腸癌的風險明顯降低（P＜0.05），見表1。在不吸煙人群中，相對于GG，AA攜帶者患結直腸癌的風險明顯降低（OR=0.49，95%CI：0.25～0.93，P＜0.05）；在不飲酒人群中，相對于 GG，GA攜帶者患結直腸癌的風險明顯降低（OR=0.22，95%CI：0.10～0.51，P＜0.05）；在年齡≥60 歲人群中，相對于GG，AA攜帶者患結直腸癌的風險明顯降低（OR=0.47，95%CI：0.27～0.81，P＜0.05）；在 BMI≥24 kg/m2人群中，相對于GG，AA攜帶者患結直腸癌的風險明顯降低（OR=0.50，95%CI：0.30～0.84，P＜0.05）。

表1 H19基因rs2839698多態性與結直腸癌患病風險的關系[例（%）]

2.2 H19基因rs2839698多態性與結直腸癌臨床病理特征的關系 相對于GG，攜帶GA、AA、GA+AA的結直腸癌患者均不易發生淋巴結轉移，腫瘤直徑均更小（≤4 cm），差異均有統計學意義（均P＜0.05）；但組織學分級、TNM分期、家族史、組織學分型、腫瘤位置等臨床病理特征與H19基因rs2839698多態性未見關聯（均P＞0.05），見表 2。

表2 H19基因rs2839698多態性與結直腸癌臨床病理特征的關系（例）

3 討論

lncRNA是人類轉錄本的主要成分[16]，通過干擾某些癌癥類型的基因表達來參與生物學過程[17-18]。最近研究表明，lncRNA在癌癥發生、發展過程中起關鍵作用[19-23]。另有研究表明，一些lncRNA參與調節細胞的增殖、凋亡、侵襲、遷移等[20]。Verhaegh 等[24]發現，rs2839698 多態性（攜帶TC）能降低膀胱癌發病風險，特別是非肌肉浸潤性膀胱癌。但另一項針對中國人群（1 049例膀胱癌患者與1 399例對照者）的研究表明，rs2839698多態性與膀胱癌發病風險無關[13]。Gong等[11]研究發現H19基因rs2839698多態性與肺癌易感性之間未見關聯，但與肺癌的鉑類化療反應有關。Yang等[10]研究發現，中國漢族人群H19基因rs2839698多態性會增加胃癌患病風險，其中CT、TT與H19 mRNA相對表達量升高有關。Li等[12]觀察到rs2839698多態性（攜帶A）者結直腸癌患病風險增加，該單核苷酸多態性可能改變了關鍵的折疊結構和H19基因的靶向微小RNA。

本研究結果顯示，A、AA、AA+GA與結直腸癌患病風險降低有關；調整性別、年齡后，AA+GA與結直腸癌患病風險仍有統計學差異。分層分析顯示，在不吸煙、年齡≥60歲、BMI≥24 kg/m2人群中，相對于GG，AA攜帶者患結直腸癌的風險均明顯降低；在不飲酒人群中，相對于GG，GA攜帶者患結直腸癌的風險明顯降低。這與Li等[12]的研究結果不一致。分析原因，可能有以下4個方面：（1）本研究數據顯示H19基因rs2839698多態性與某些暴露因素存在明顯的交叉作用；（2）不同地區人群的飲食習慣和生活環境不同；（3）不同研究的基因分型方法及納入標準不同；（4）不同研究的結直腸癌惡性程度及病理類型不同。此外，本研究發現H19基因rs2839698多態性與結直腸癌患者的淋巴結轉移、腫瘤直徑明顯相關。

綜上所述，H19基因rs2839698多態性與結直腸癌患病風險及淋巴結轉移、腫瘤直徑等臨床病理特征有關。攜帶AA、GA者患病風險降低，特別是不吸煙、不飲酒、年齡≥60 歲、BMI≥24 kg/m2者。