膜相關(guān)蛋白Numb在結(jié)腸癌中的表達和意義

王佳雷，陳鋒

（南寧市第二人民醫(yī)院 胃腸外科，廣西 南寧 530031）

0 引言

結(jié)腸癌是臨床消化科常見惡性腫瘤，主要指患者結(jié)腸黏膜上皮組織發(fā)生癌變，持續(xù)進展后患者以大便帶黏液和血、大便次數(shù)增多，引發(fā)腸梗阻癥狀[1]。由于患者早期缺乏典型癥狀，因此需要對患者采取良好的診斷方式，其中Numb屬于高度保守的蛋白，早期參與神經(jīng)系統(tǒng)的對稱分裂，不僅在神經(jīng)發(fā)育中發(fā)揮作用，還廣泛參與細胞再生凋亡，與腫瘤發(fā)生病理之間存在一定聯(lián)系[2]。目前關(guān)于Numb基因在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展機制并不清楚，但關(guān)于其治療靶點，對診斷與預后的意義[3]，臨床需要及時開展研究，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選擇南寧市第二人民醫(yī)院2019年1月至2021年1月收入的50例結(jié)腸癌患者作為研究組，抽取同期正常健康人30例作為對照組。納入標準：①研究組患者均經(jīng)過病理結(jié)果證實；②均為未經(jīng)放、化療處理的癌組織；③知曉本文相關(guān)內(nèi)容。排除標準：①健康者合并其他惡性腫瘤；②相關(guān)資料不完善者。研究組男27例，女23例，年齡35～81歲，平均（56.47±4.05）歲。根據(jù)臨床Dukes標準進行分期：A期3例、B期17例、C期24例和D期6例。組織學分化程度進行分組：高分化組16例、中分化組25例、低分化組15例，4例分化程度缺失。對照組男11例，女19例，年齡35～82歲，平均（56.21±4.11）歲。兩組基本資料，無差異，P＞0.05，可研究。

1.2 方法。免疫阻化使用兔抗人Numb單克隆抗體，DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清來自Hyclone公司，相關(guān)要求均按照試劑盒說明書進行。免疫組織檢測：使用Numb表達陽性病例的切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照組，對組織芯片實施常規(guī)免疫組化染色。一抗Numb單克隆抗體濃度為1:200。結(jié)果需要由2名病理醫(yī)師在雙盲情況下實施判定，光學顯微鏡下隨機觀察10個高倍鏡視野，視野下隨機100個細胞，計算陽性細胞百分比。其中陽性細胞分別為0～4分，細胞染色強度分別為0～3分，根據(jù)AB之和計算陽性表達強度，其中陰性（-）0分，弱陽性（+）1～2分，陽性（++）3～5分，強陽性（+++）6～7分。細胞培養(yǎng)：將結(jié)腸癌細胞培養(yǎng)在平皿上，37℃下5%CO2的孵箱中，使用含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，3～4 d傳代1次[4]。

1.3 觀察指標。正常組織與癌組織Numb表達情況，不同組織Numb陽性表達情況[5]。

1.4 統(tǒng)計學處理。本研究采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對本文數(shù)據(jù)進行分析，計量資料用（）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 正常組織與癌組織Numb表達情況。正常組織與癌組織之間Numb陽性率無差異，Dukes分期之間陽性率無差異（P＞0.05）；不同分化程度之間存在明顯差異，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 正常組織與癌組織Numb表達情況

2.2 正常組織與癌組織Numb陽性表達情況。Dukes分期陽性表達情況無差異（P＞0.05）；隨著Numb表達陽性不斷增強，高分化不斷增高，低分化不斷降低，在正常組織癌組織、分化程度之間存在明顯差異（P＜0.05）。見表2。

表2 正常組織與癌組織Numb陽性表達情況

3 討論

隨著人們生活習慣及飲食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)腸癌發(fā)病人數(shù)呈不斷上升趨勢，早期診斷治療，對患者具有重要意義。而結(jié)腸癌在組織病理學上表現(xiàn)為細胞極性丟失，上皮細胞向間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)變[6]。通過研究Numb在結(jié)腸癌的表達情況，能夠深入了解結(jié)腸癌發(fā)病機制，尋求治療新途徑，研究中Numb能夠參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，但目前關(guān)于其的報道研究并不多見[7]。

本文通過研究Numb與結(jié)腸癌組織之間的關(guān)系，將癌組織與正常組織進行分析，結(jié)果顯示：正常組織與癌組織之間Numb陽性率無差異，P＞0.05；Dukes分期陽性表達情況無差異，P＞0.05；結(jié)果證實了在高分化組織具有較高的陽性，說明Numb作為調(diào)控細胞分化分子，能夠維持正常的結(jié)腸腺上皮細胞形態(tài)功能，并具有重要意義[8]。Numb表達程度與腫瘤分化之間，也存在一定關(guān)系，不同分化程度之間存在明顯差異，P＜0.05。高分化不斷增高，低分化不斷降低，隨著Numb表達陽性不斷增強，在正常組織癌組織、分化程度之間存在明顯差異，P＜0.05。說明Numb在正常細胞中調(diào)控作用，會隨著腫瘤惡性程度增高，出現(xiàn)破壞，Numb作為維持細胞正常的保護機制，隨著腫瘤惡性程度增加，而出現(xiàn)著較大的變化。但本文結(jié)果中Dukes分期之間陽性率無差異，但在結(jié)腸癌細胞中，不同分期的腫瘤細胞Numb表達量是存在差異的。而不同分期的結(jié)腸癌組織，均有Numb高表達及低表達的發(fā)生，Numb表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期為負相關(guān)，證實了Numb分子可通過Numb-Notch拮抗抑制腫瘤的發(fā)生。而低分化的結(jié)腸癌組織中陽性率下降，說明Numb在正常細胞調(diào)控作用下，隨著腫瘤惡性程度增高，出現(xiàn)破壞。目前在不同的腫瘤中，Numb生物學功能也存在不同，認為其在結(jié)腸癌中可能發(fā)揮抑癌基因的作用，通過調(diào)控P53的表達水平，抑制腫瘤發(fā)生，維持干細胞穩(wěn)定狀態(tài)，并抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化誘導的腫瘤，達到抑癌效果[9]。

綜上所述，Numb分子能夠很好抑制結(jié)腸癌患者腫瘤細胞，具有良好的調(diào)控作用，對這類患者具有重要意義，值得應用。