烏奴龍膽的揮發(fā)性成分分析*

頓珠次仁 裴歡歡 嚴(yán)志宏**

（1.西藏藏醫(yī)藥大學(xué)，西藏 拉薩 850000；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004）

烏奴龍膽是龍膽科龍膽屬植物烏奴龍膽（Genti?anaurnulaH.Smith）的全草，別名岡噶瓊（藏名），主要分布于我國(guó)西藏、青海西南部等地。烏奴龍膽出處為《西藏常用中草藥》，收錄入《中藥大辭典》，其中記載烏奴龍膽原形態(tài)為多年生草本，高3cm～5cm。葉密集對(duì)生，似輪生狀；葉片扇形，全緣，無(wú)柄?；?～3 朵頂生，藍(lán)紫色，并帶有紫黑色條紋；萼管狀，常5 裂，裂片扇形；花冠鐘形，先端5 裂，裂片全緣；雄蕊5；子房上位。蒴果成熟時(shí)2瓣裂。

通過(guò)四種不同體系對(duì)烏奴龍膽乙醇提取物的各個(gè)極性部位體外抗氧化活性進(jìn)行比較研究。結(jié)果表明，各極性部位對(duì)DPPH 自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基均有一定的清除作用，也具有一定的還原能力。[1]藏藥烏奴龍膽（GentianaurnulaH.Smith）（龍膽科）的全草中分離到5個(gè)新的環(huán)烯醚萜甙，命名為烏奴龍膽甙（gentioumoside）A-E。[2]

烏奴龍膽的性味為性寒，味苦，功能主治為清熱解毒，止瀉。治流感發(fā)燒，咽喉腫痛，黃疸，熱性腹瀉。用于血和赤巴合并癥，木布病，血管閉塞病，中毒性發(fā)燒，熱性腹瀉，流行性感冒，咽喉腫痛，黃疸病等。烏奴龍膽中含有多種化學(xué)成分，包括醛類(lèi)、烯烴、酮類(lèi)、酯類(lèi)物質(zhì)等化學(xué)成分。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)烏奴龍膽揮發(fā)性化學(xué)成分研究較少，在指導(dǎo)藏藥烏奴龍膽向中藥應(yīng)用方面具有一定的指導(dǎo)意義。

目前對(duì)揮發(fā)性成分化學(xué)成分提取和分析的方法主要有水蒸氣蒸餾法、頂空固相微萃取（HS-SPME）、溶劑提取法、同時(shí)蒸餾萃取法、亞臨界流體、超臨界CO2萃取法等結(jié)合GC 或GC-MS。水蒸氣蒸餾和溶劑萃取法等結(jié)合GC 或GC-MS 是分析中草藥中揮發(fā)油的傳統(tǒng)方法。但是它需要相對(duì)大量的樣品，并且會(huì)造成部分分析物的損失，而HS-GC-MS的分析方法以分離和鑒定揮發(fā)油，此方法快速、準(zhǔn)確，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法的不足。其中頂空分析作為一種無(wú)有機(jī)溶劑萃取的樣品處理技術(shù)，通常與氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）技術(shù)結(jié)合用來(lái)分析復(fù)雜基質(zhì)中的揮發(fā)性有機(jī)物，具有快速、高效、環(huán)保、靈敏度高等特點(diǎn)，在常規(guī)分析中發(fā)揮著重要作用，在中草藥中揮發(fā)油的分離和鑒定方面具有廣闊的前景。

本課題首次采用HS-GC-MS 分析烏奴龍膽揮發(fā)性成分，分析時(shí)將干燥粉碎的藥材裝入頂空樣品瓶中，經(jīng)加熱平衡后，取揮發(fā)性氣體直接進(jìn)入GC-MS 系統(tǒng)進(jìn)行分析，減少了樣品預(yù)處理的復(fù)雜操作，即避免一些化學(xué)成分加熱分解、轉(zhuǎn)化的可能，又可快速分析烏奴龍膽揮發(fā)性成分，為烏奴龍膽揮發(fā)性成分的進(jìn)一步研究和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥材

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 7697A 自動(dòng)頂空進(jìn)樣器、7890A 型氣相色譜儀、5975C 單四極桿質(zhì)譜儀（安捷倫公司，美國(guó)）；電子天平（型號(hào)YHC-11002B 瑞安市英衡電器有限公司監(jiān)制）。20 ml頂空瓶（安捷倫公司，美國(guó)）。

1.2 藥材

烏奴龍膽藥材來(lái)自西藏。經(jīng)西藏藏醫(yī)藥大學(xué)嘎務(wù)副教授鑒定為龍膽科龍膽屬植物烏奴龍膽（Genti?anaurnulaH.Smith）。

1.3 樣品制備

烏奴龍膽藥材經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單剪碎處理，再用分析稱(chēng)精密稱(chēng)取0.6g 的不同產(chǎn)地烏奴龍膽樣品分別裝入未使用過(guò)潔凈的20 mL頂空瓶中密封，待測(cè)。

2 方法

2.1 頂空進(jìn)樣條件

樣品用量為0.60g；樣品瓶加熱溫度130℃；定量環(huán)溫度140℃；傳輸線(xiàn)150℃；樣品瓶加熱時(shí)間為20 min；樣品環(huán)平衡時(shí)間0.05 min；進(jìn)樣時(shí)間1min。

2.2 氣相色譜條件

HP-5 毛細(xì)管柱型彈性色譜柱（0.25μm×250μm×30m）；載氣：高純氮?dú)?，純?9.999%；柱流量1.0mL/min；分流進(jìn)樣，分流5：1；進(jìn)樣量1.0 mL，走兩針，進(jìn)樣口溫度為250℃；溶劑延時(shí)為3min。程序升溫條件：初始溫度為40℃（保持3min），以10℃/min 的速度升溫至300℃（保持5min），

2.3 質(zhì)譜條件

EI 離子源，電子能量70 e V；離子源溫度230℃；傳輸線(xiàn)溫度為280℃；四級(jí)桿溫度為150℃；全掃描模式；掃描范圍：m/z50～650。

2.4 數(shù)據(jù)處理

總離子流圖中的各個(gè)峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，利用氣相色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)通過(guò)NIST11.L 譜庫(kù)檢索并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)鑒定檢測(cè)出的成分，對(duì)檢出的峰按峰面積歸一化法計(jì)算各成分在總揮發(fā)性成分中的相對(duì)百分含量。

3 檢測(cè)結(jié)果

從烏奴龍膽中分離和鑒定出的成分個(gè)數(shù)為57種?？傠x子流圖見(jiàn)圖1，成分表見(jiàn)表1。

表1 烏奴龍膽中分離和鑒定的成分表

表1 （續(xù)）

圖1 烏奴龍膽總離子流圖

4 結(jié)論與討論

采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法檢測(cè)烏奴龍膽的揮發(fā)性成分，在檢測(cè)并鑒定出的揮發(fā)性成分中，均以烯烴類(lèi)成分為主，含量最高的是（+）-檸檬烯（45.055%），其他含量較高的成分還有γ-松油烯、左旋-alpha-蒎烯、α-松油醇、左旋-beta-蒎烯、4-異丙基甲苯，由此可知這6 種成分可能是其揮發(fā)性成分中的主要成分。

本次還從烏奴龍膽中新發(fā)現(xiàn)了異戊醛、香葉醇、檸檬醛、芳樟醇、無(wú)水醋酸鈉、反式石竹烯、橙花醇、（Z）-3，7-dimethylocta-2，6-diena、germacreneD，1-meth?yl-5-methylene-8-（1-methylethyl）-1，6-cyclodecadi?ene、3-異丙基-6-亞甲基-1-環(huán)己烯、（E）-Β-羅勒烯、醋酸、松油烯、4-萜烯醇、羅勒烯等成分，為烏奴龍膽藥材的揮發(fā)性成分的進(jìn)一步研究和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。