獻血者ELISA單試劑檢測呈反應性標本檢測結(jié)果分析

黃愛瓊 肖韶英 黃伯泉 謝君謀 黃志健

臨床用血主要利用無償獻血者血液，為實現(xiàn)有效治療，需保證血液標本安全。目前，國內(nèi)血站已經(jīng)大部分開展核酸檢測（nucleic acid test，NAT）的方法，核酸檢測被公認為是降低血清學窗口期漏檢風險及低病毒載量檢出的最佳解決方法[1]。酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）是血站普遍使用的方法。但是受到很多因素的影響，會使得ELISA單試劑呈反應性。有文獻報道，因ELISA單試劑呈反應性而淘汰的標本量為0.66%[2]，血站將對不合格的血液進行報廢處理。由于ELISA方法的局限性，難免出現(xiàn)假陽性。這樣既浪費了血液，也打擊了獻血者的熱情，造成獻血者的流失。現(xiàn)在回顧性分析本站2017年的獻血標本ELISA單試劑呈反應性的情況以及核酸檢測（NAT）結(jié)果的情況，以實施質(zhì)量控制，降低血液不合格率和淘汰率，節(jié)省血液資源，提升無償獻血者的積極性，現(xiàn)將分析結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

廣州血液中心2017年1月1日—2017年12月31日無償獻血標本共345 164例，獻血者均符合國家《獻血者健康檢查要求》（GB18467－2011）[3]。每位獻血者留取2管標本，一管為5 mL EDTA-K2真空采血管（用于ELISA檢測），一管為5 mL EDTA-K2帶分離膠核酸專用采血管（用于NAT檢測）。ELISA管保存于2~8℃冰箱且于24小時內(nèi)檢測，NAT管采集后4 h內(nèi)離心，在標本采集后24 h內(nèi)完成各項檢測。

1.2 主要儀器和試劑

自動酶聯(lián)免疫檢測分析儀（瑞士HAMILTON，F(xiàn)AME24/30），自動酶聯(lián)免疫檢測加樣儀（瑞士HAMILTON，MICROLAS STAR 8CH），酶標儀，蓋立福Procleix TIGRIS核酸系統(tǒng)以及配套檢測試劑。HBsAg試劑（試劑1：北京萬泰；試劑2：上海科華）; 抗-HCV試劑（試劑1：珠海麗珠;試劑2：上海科華）; 抗-HIV試劑（試劑1：美國伯樂:試劑2：北京萬泰）,篩查試劑均批檢合格并在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法與判定標準

用兩種ELISA和一種NAT試劑對所有標本并行檢測，ELISA結(jié)果小于Cut off值為陰性，結(jié)果大于等于Cut off值為陽性。兩種試劑均呈陰性則判為合格，兩種試劑均陽性立即判為不合格，如果單試劑陽性結(jié)果（稱為可疑），則該項目用雙試劑雙孔復檢，均為陰性者則判為合格，其中任何一種試劑呈陽性都判為不合格。NAT可同時檢測HBV、HCV和HIV三種病毒核酸，陽性結(jié)果表明其中有1～3種病毒核酸為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0進行統(tǒng)計學處理，計量資料用（±s）表示、行t檢驗。計數(shù)資料用[n（%）]表示，行χ2檢驗，符合正態(tài)分布的兩兩比較采用獨立樣本t檢驗，非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)兩兩比較采用兩個獨立樣本的非參數(shù)檢驗，P＜0.05表示具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 ELISA雙試劑陽性結(jié)果數(shù)

2017年1月1日—2017年12月31日無償獻血標本共345 164例，經(jīng)過ELISA雙試劑檢測后HBV、HCV、HIV可疑標本數(shù)為2 956，占樣本數(shù)0.86%；HBV、HCV、HIV不合格標本（包括雙試劑陽性和復檢后陽性）數(shù)為3 581，占總樣本數(shù)1.04%。詳見表1。

表1 2017年獻血者標本ELISA可疑與不合格比例

2.2 ELISA可疑標本的復檢后結(jié)果

2 956例HBV、HCV、HIV可疑標本復檢后結(jié)果劃分為合格與單試劑呈反應性不合格的標本，HBV復檢后合格數(shù)為1 068，占HBV總可疑數(shù)的67.5%。HCV復檢后合格數(shù)為343，占HCV總可疑數(shù)的49.8%。HIV復檢后合格數(shù)為347，占HIV總可疑數(shù)的50.7%，詳圖1。ELISA復檢后不合格的標本分為試劑1不合格和試劑2不合格，HBV和HIV試劑1和2陽性率有顯著差異（P＜0.01），HCV試劑1和2的陽性率沒有差異，詳見表2。

表2 ELISA可疑標本復檢后不合格的分布情況

圖1 ELISA可疑標本復檢結(jié)果

2.3 ELISA單試劑反應性且核酸陽性的結(jié)果

HBV試劑2單試劑反應性不合格且核酸陽性標本占了HBV單試劑反應性標本的11.61%，其余試劑均少于1%，詳見表3。

表3 ELISA單試劑反應性不合格標本且核酸陽性的結(jié)果

3 討論

近年來，血液的檢測模式一直在發(fā)展，2010年國內(nèi)逐漸開展血液核酸檢測，此后檢測HBV、HCV、HIV都是采用兩種酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）的試劑和一種核酸（Nucleic Acid Test）的試劑。雖然核酸檢測已經(jīng)于2015年覆蓋全國[4]，但是ELISA作為重要的檢測方法之一，仍然需要不斷提高檢測靈敏度和特異性。對2017年本站血液的ELISA實驗分析，可疑標本數(shù)為2 956，占了總標本量的0.86%，表明ELISA初檢需要加強預防假陽性的各種措施，導致假陽性的原因可能會有標本、試劑污染，人為操作等。

目前HBV試劑和HIV試劑盒檢測可疑標本的陽性率是有顯著差異的，HCV兩種試劑并沒有差異。在2012年公布的新版《血站技術(shù)操作規(guī)程》[5]規(guī)定，明確血液HIV、HBV、HCV的篩查可以采用一種ELISA試劑和一種Nucleic Acid Test試劑的檢測模式。目前對于選擇哪種試劑盒也是一個難題。只采用1種ELISA檢測試劑進行初篩，可能存在漏檢的風險[6]，為了血液的安全，大部分血站還是采用原來的模式進行檢測。血清學ELISA單試劑檢測呈反應性獻血者大部分核酸是陰性的，已經(jīng)有證實[7]有一部分是潛在合格的獻血者，對于目前召回獻血者的策略是合理的，防止打擊獻血者的信心，預防獻血者的流失。但是對于召回后的復查仍然是單試劑呈反應性值得繼續(xù)探討。

在現(xiàn)有臨床研究中發(fā)現(xiàn)，血液篩查檢驗要求越來越高。臨床管理中，只有做好血液篩查評估管理方案，這樣才能滿足患者血液檢驗篩查需求。通過相關(guān)研究分析發(fā)現(xiàn)，血液篩查分析過程中，實施ELISA單試劑檢驗能夠評估血液樣本檢查的質(zhì)量，對血液自身情況能夠做出分析[8]。尤其是在血液篩查過程中，能夠從疾病篩查視角做好疾病的篩查和評估處置，對存有疑似的樣本進行重點篩查和分析，從而剔除有問題樣本。同時在獻血者血液篩查過程中，實施上述檢驗分析，能夠了解到獻血者供血情況，對血液的篩查和評估有重要指導意義，因而為了能夠更為有效的提高血液篩查管理質(zhì)量，應該重點完善上述檢查分析內(nèi)容，進而保障在患者檢查過程中可以改善其臨床癥狀[9-10]。

胡文佳等指出，無償獻血者在供血結(jié)束后，需要對其血液樣本進行篩查和分析，該過程中，實施ELISA單試劑檢驗能夠了解樣本的自身情況，對樣本核酸的檢驗安全性控制有一定指導意義，所以可在臨床檢驗中將ELISA單試劑檢驗技術(shù)推廣，以此提高臨床檢驗指導水平[11]。孫婧等表示，獻血者在獻血結(jié)束后，應該及時為患者進行血液篩查分析，這個過程中，可以通過ELISA單試劑檢驗分析，篩查血液樣本中存有的缺陷，提升樣本篩查檢驗質(zhì)量[12]。同時能夠在血液樣本篩查分析過程中，做好篩查評價，尤其是對于疑似樣本的篩查和處置更是需要及時作出評價。盧青松等指出，ELISA單試劑檢能夠?qū)ρ簶颖局械囊伤茦颖具M行篩查，從HCV陽性篩查分析著手，做好血液樣本的檢驗和評估，提高血液樣本篩查指導能力，以此為血液疾病篩查提供幫助，提高無償獻血者血液安全檢查能力[13]。馮濤等人通過研究指出，在給予血液篩查分析過程中，以ELISA單試劑檢驗能夠為患者篩查提供幫助，對改進患者臨床病癥有一定幫助，所以可將該篩查方式完善，以此為患者診斷篩查質(zhì)量控制奠定基礎[14-16]。本研究結(jié)果與上述學者研究成果相符，表明ELISA單試劑檢對血液疾病篩查和分析具有重要指導意義，所以可滿足血液檢查診斷需求。

總結(jié)上述，ELISA仍是目前重要血液檢測手段之一，但需要不斷提高靈敏度和特異性，縮短窗口期，預防假陽性。既要小心風險，又要杜絕浪費現(xiàn)象。