菌毒清膠囊制備工藝及質(zhì)量研究*

李卓亞，李運(yùn)景，唐 蕾，趙偉國，梁鎮(zhèn)標(biāo)

（廣東省中山市人民醫(yī)院，廣東 中山 528400）

菌毒清顆粒（粵藥制字Z20070531）是由中山市人民醫(yī)院研制的中藥復(fù)方制劑。筆者參與了探索菌毒清顆粒穩(wěn)定性和分散片處方優(yōu)選的前期工作[1－2]。研究發(fā)現(xiàn)，菌毒清顆粒具有滋陰降火、涼血利咽等功效，對(duì)流行性感冒、咽炎、EB病毒陽性患者有較好療效[3－7]。動(dòng)物研究顯示，菌毒清提取物對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE－2Z荷瘤裸鼠的病情有改善作用[8]。但菌毒清顆粒蔗糖含量較大，在潮濕條件下易結(jié)塊。硬膠囊劑可掩蓋藥物的不良?xì)馕叮岣咚幬锏姆€(wěn)定性和生物利用率，減弱藥物的刺激性[9－12]，且制備工藝成熟。本研究中參考了其他中藥制劑硬膠囊制備工藝[13－15]，將菌毒清顆粒改造為藥效更理想、服用與攜帶更方便的硬膠囊劑，旨在擴(kuò)大該藥的使用人群，提高患者的用藥依從性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；超聲儀（天津市奧特賽恩斯有限公司）；AUW220D型電子分析天平（日本Shimadzu公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司）；XL－MINI型旋轉(zhuǎn)式制粒機(jī)（常州市海江藥化機(jī)械廠）。

1.2 試藥

玄參（批號(hào)為20161115）、茜草（批號(hào)為20161012）、板藍(lán)根（批號(hào)為20161013）、丹參（批號(hào)為20161022）、金銀花（批號(hào)為20160906）、穿心蓮（批號(hào)為20161207）均購自廣州康圣藥業(yè)有限公司；微晶纖維素（河南正弘藥用輔料有限公司，批號(hào)為170803）；玉米淀粉（批號(hào)為170706）、麥芽糊精（批號(hào)為171106），均購自安徽山河藥用輔料有限公司；乳糖（批號(hào)為161215）、糖粉（批號(hào)為171210）、羧甲基淀粉鈉（批號(hào)為160922）、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉（批號(hào)為170113），均購自湖州展望藥業(yè)有限公司；滑石粉（南昌白云藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20161021）；乙醇（天津市永大化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為160625）；菌毒清膠囊（自制品，批號(hào)分別為20190706，20190713，20190720）；丹酚酸B對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為111562－201917，含量＞98%），甲醇、乙腈為色譜純，甲酸為分析純，水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備工藝

將玄參、穿心蓮、茜草、板藍(lán)根、丹參和金銀花分別粉碎成粉末。穿心蓮粉末用適量85%乙醇浸潤、攪勻后浸泡24 h，再以15倍量的85%乙醇滲漉提取，收集合并滲漉液，減壓回收乙醇至適量。其余5味藥加8倍量水煎煮1.5 h，煎2次，濾過，合并煎液，濃縮成稠膏，與穿心蓮浸膏充分混勻，置70℃烘箱內(nèi)干燥0.5 h，稱取處方量的浸膏和微晶纖維素混合后拌勻，以適量的90%乙醇溶液為潤濕劑制軟材，18目篩制粒，70℃熱風(fēng)干燥約1.5 h，測(cè)定含水量小于6%后冷卻，加適量交聯(lián)羧甲基纖維素鈉及滑石粉后混勻，先過20目篩去除粗粉，再過80目篩去除細(xì)粉，以顆粒外觀、吸濕率、休止角和膠囊的崩解時(shí)限為考察指標(biāo)，進(jìn)行工藝優(yōu)選。

2.2 制劑工藝條件篩選

填充劑種類：通過查閱相關(guān)參考文獻(xiàn)和預(yù)試驗(yàn)，選用微晶纖維素、玉米淀粉、麥芽糊精、糖粉和乳糖為填充劑，其余制備工藝不變，測(cè)定其吸濕率[16]。當(dāng)選擇玉米淀粉和微晶纖維素作為填充劑時(shí)，顆粒外觀和吸濕性均符合要求，故選用玉米淀粉與微晶纖維素作為填充劑做進(jìn)一步優(yōu)化。詳見表1。

表1 填充劑種類Tab.1 Selection of filler types

崩解劑種類：以交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和羧甲基淀粉鈉為崩解劑，其余制備工藝不變，測(cè)定其崩解時(shí)限[17]和吸濕率。結(jié)果可優(yōu)選交聯(lián)羧甲基纖維素鈉崩解時(shí)限為320 s，吸濕率為5.19%，羧甲基淀粉鈉崩解時(shí)限為440 s，吸濕率為9.71%。

崩解劑和填充劑用量：以微晶纖維素和浸膏用量的比值為因素A，以玉米淀粉和浸膏用量的比值為因素B，以交聯(lián)羧甲基纖維素鈉占處方百分率為因素C，因素水平見表2。以吸濕率為考察指標(biāo)，采用L16（45）正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見表2及表4。可見，各因素對(duì)處方影響的大小順序?yàn)锳＞B＞C，其中A有顯著性影響，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況最優(yōu)配方選擇A2B1C2，即微晶纖維素和浸膏用量的比值為3∶1，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉占處方的5%。以微晶纖維素為填充劑，以交聯(lián)羧甲基纖維素鈉為崩解劑，用滑石粉為潤滑劑，以90%乙醇為潤濕劑制備3批顆粒，測(cè)定吸濕率和觀察顆粒外觀，結(jié)果批號(hào)為20190706，20190713，20190720的樣品均為棕黃色顆粒，吸濕率分別為5.26%，5.28%，5.22%。

表2 因素水平表Tab.2 The levels of factors

表4 方差分析結(jié)果Tab.4 Results of the ANOVA

潤濕劑：以體積分?jǐn)?shù)為85%，90%，95%的乙醇作潤濕劑，其余制備工藝不變，測(cè)定其崩解時(shí)限。結(jié)果，顆粒外觀分別為長條狀、棕黃色、棕黃色，崩解時(shí)限分別為284 s，320 s，356 s。故優(yōu)選90%乙醇作潤濕劑。

潤滑劑：以4%，5%，6%的滑石粉作潤滑劑，其余制備工藝不變，測(cè)定其休止角[18]。結(jié)果分別為35.1°，33.4°，31.2°，差異不大，故優(yōu)選4%滑石粉作潤滑劑。

膠囊殼型號(hào)：測(cè)定3批樣品的平均堆密度為0.83 g/mL，每粒膠囊裝0.40 g，所占體積約0.48 mL，與1號(hào)膠囊（0.50 mL）接近，故選用1號(hào)膠囊殼。

表3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Tab.3 Design and results of the orthogonal test

2.3 處方工藝驗(yàn)證

基于上述篩選和優(yōu)化，菌毒清膠囊的最優(yōu)處方工藝為：以1 000粒投料量計(jì)算，菌毒清浸膏91 g，微晶纖維素273 g，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉20 g，滑石粉16 g。浸膏在70℃條件下干燥0.5 h，與微晶纖維素混合，拌勻。以適量的90%乙醇為潤濕劑制軟材，18目篩制粒，70℃熱風(fēng)干燥約1.5 h，測(cè)定干顆粒含水量小于6%，冷卻后加入交聯(lián)羧甲基纖維素鈉以及滑石粉混合均勻，先過20目篩除去粗粉，再過80目篩除去細(xì)粉，整粒，在相對(duì)濕度小于60%環(huán)境中裝入1號(hào)膠囊。檢測(cè)3批樣品，結(jié)果各項(xiàng)指標(biāo)均符合2015年版《中國藥典（四部）》對(duì)膠囊劑的質(zhì)量要求[19]，表明該工藝可行。詳見表5。

表5 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Tab.5 Results of the validation test of the technology

2.4 丹酚酸B含量測(cè)定

色譜條件：色譜柱為Eclipse XDB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇－乙腈－0.5%甲酸水溶液（28∶10∶62，V/V/V）；流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長為286 nm；柱溫為25℃；進(jìn)樣量為10μL。

樣品處理：取樣品內(nèi)容物2.0 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加75%甲醇適量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理30 min，用75%甲醇定容，搖勻，濾過，即得。

方法學(xué)考察：精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均小于2.0%，符合規(guī)定。

樣品含量測(cè)定：經(jīng)測(cè)定，批號(hào)20190706，20190713，20190720的樣品中丹酚酸B含量分別為0.213，0.186，0.203 mg/g，平均0.201 mg/g。

3 討論

預(yù)試驗(yàn)中，曾采用正交試驗(yàn)法考察乙醇體積分?jǐn)?shù)、乙醇用量、提取時(shí)間、浸泡時(shí)間對(duì)處方中丹酚酸B含量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)丹酚酸B含量均太低，其為丹參中主要水溶性活性成分[20]，且其含量較高，故選用正式研究中的提取工藝并以丹酚酸B為含量測(cè)定指標(biāo)。以微晶纖維素和浸膏用量比值為3∶1，2∶1，1∶1，0進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)比值為3∶1時(shí)制備效果最好，于是加大微晶纖維素和浸膏用量比為4∶1時(shí)，發(fā)現(xiàn)仍然是3∶1時(shí)制備效果最佳，故選擇微晶纖維素和浸膏用量比值為3∶1。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，相對(duì)濕度超過60%時(shí)，顆粒含水量明顯增多，因此膠囊應(yīng)在相對(duì)濕度小于60%的環(huán)境中分裝和保存。曾嘗試以甲醇－乙腈－5%甲酸水（31∶10∶59，V/V/V）[21]為流動(dòng)相，但分離效果欠佳，改用正交試驗(yàn)的流動(dòng)相，結(jié)果較滿意。

菌毒清顆粒是我院用量較大的驗(yàn)方制劑，但大量蔗糖的加入嚴(yán)重影響了該藥的適用人群，菌毒清膠囊可有效避免上述缺點(diǎn)。本方法可行性較強(qiáng)，重復(fù)性較好，為菌毒清膠囊的進(jìn)一步研究奠定了理論基礎(chǔ)。