風熱感冒顆粒氣相色譜特征圖譜研究

曾 楨，李婷婷，王 欣，孔衛(wèi)東，劉 莉

（四川省成都市食品藥品檢驗研究院，四川 成都 610045）

風熱感冒顆粒由經(jīng)典名方銀翹散加減藥味而來，有疏風清熱、利咽解毒功效，臨床多用于治療風熱感冒，癥見發(fā)熱、出汗、鼻塞、頭痛、咽痛、咳嗽、多痰等[1]。對風熱感冒顆粒的質(zhì)量研究多集中在板藍根、牛蒡子等成分的高效液相色譜（HPLC）方面[2－7]，而處方中的臣藥薄荷、荊芥穗均以揮發(fā)油入藥，對其研究鮮有報道。為更好地控制其質(zhì)量，保證療效，本研究中參考文獻[8－10]，采用氣相色譜法，對市售26批風熱感冒顆粒的揮發(fā)性成分進行分析，建立了氣相色譜特征圖譜，為其質(zhì)量的均一性研究提供依據(jù)。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B型氣相色譜儀，含自動進樣器、火焰離子化檢測器（美國安捷倫科技有限公司）；XPE26型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；AE－240型電子天平（德國Sartorius公司）；SK250H型超聲儀（上海科導超聲儀器有限公司）；Milli－Advantage A10型超純水裝置（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

26批市售風熱感冒顆粒[批號分別為2002201，1903209，2003210，1903202，1903207，A 20190630，A20190629，A20190563，B20200501，190604，190616，190524，190503，190602，20190703（A），20191003，20180118，20190703（B），20200309，ZJA1901，ZAA1911，ZAA2009（A），ZEA1901，ZAA2009（B），ZAA1912，ZEA2009]；β－蒎烯對照品（批號為111827－201202，供含量測定用），檸檬烯對照品（批號為100470－201302，含 量 為96.0%），薄 荷 酮 對 照 品（批 號 為111705－201105，含量為99.8%），薄荷腦對照品（批號為10725－201707，含量為99.8%），胡薄荷酮對照品（批號為111706－201907，含量為99.8%），板藍根對照藥材（批號為121177－201608），薄荷對照藥材（批號為120916－201812），荊芥穗對照藥材（批號為121424－201505），連翹對照藥材（批號為120908－201817），桑葉對照藥材（批號為121123－201806），均購自中國食品藥品檢定研究院；其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB－WAX毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.50μm），程序升溫，初始溫度為50℃，以5℃/min的速率升至140℃，保持4 min，以20℃/min的速率升至200℃，保持1min，再以50℃/min的速率升至235℃，保持3 min；檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為230℃，進樣口溫度為230℃，進樣量為1μL，分流進樣的分流比為1∶1；載氣流速為2 mL/min。

2.2 溶液制備

混合對照品溶液：分別稱取β－蒎烯、檸檬烯、薄荷酮、薄 荷 腦、胡 薄 荷 酮 對 照 品25.925 3，28.152 7，24.725 0，27.125 3，25.352 1 mg，精密稱定，置250 mL容量瓶中，加石油醚（60～90℃）溶解并定容，制成質(zhì)量 濃 度 分 別 為0.103 7，0.112 6，0.098 9，0.108 5，0.101 4 mg/mL的混合對照品溶液。

供試品溶液：取樣品50 g，置蒸餾管中，加入20%氫氧化鈉溶液50 mL，水蒸氣蒸餾，收集餾出液約250 mL，置250 mL容量瓶[預先裝入石油醚（60～90℃）5 mL]中，振搖提取，搖勻后靜置，取上層石油醚溶液，作為供試品溶液。按風熱感冒處方和工藝制備樣品Ⅱ，并按供試品溶液制備方法制得供試品溶液Ⅱ。

對照藥材溶液：取板藍根、薄荷、荊芥穗、連翹、桑葉對照藥材各5 g，加水100 mL，煎煮2 h，濾過，得濾液約50 mL，置蒸餾管中，加氫氧化鈉10 g，水蒸氣蒸餾，收集餾出液約250 mL，置250 mL容量瓶[預先裝入石油醚（60～90℃）5 mL]中，振搖提取，搖勻后靜置，取上層石油醚溶液，即得。

2.3 方法學考察

精密度試驗：精密吸取2.2項下供試品溶液1μL，按2.1項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于3.0%（n=6），表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取2.2項下供試品溶液（批號2002201）1μL，分別于室溫下放置0，4，8，12，24 h時進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果各色譜峰相對保留時間、相對保留峰面積的RSD均小于3.0%（n=5），表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗：取樣品（批號2002201）6份，依法制備供試品溶液，再按2.1項下色譜條件進樣測定。結(jié)果各色譜峰相對保留時間和相對保留峰面積的RSD均不超過3.0%（n=6），表明方法重復性良好。

2.4 特征圖譜的建立

共有峰及參照峰選擇：取2.2項下混合對照品溶液、供試品溶液Ⅱ、對照藥材溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（見圖1）。選取含量較高的7號峰（薄荷腦）為S峰（參照峰）。測定26批次樣品的特征圖譜，比較其色譜圖，確定8個共有特征峰，分別歸屬到5味藥材。結(jié)果見表1。

表1 風熱感冒顆粒特征圖譜共有峰歸屬表Tab.1 Common peak assignment of characteristic chromatograms of Fengre Ganmao Granules

圖1 氣相色譜圖1.β－pinene 2.borneol 5.benzyl benzoate 7.alantolactone 8.isoalantolactoneA.Mixed reference solution B.Test solutionⅡ C－G.Reference medicinal materials solution（the order of C－G was Radix Isatidis，Mentha haplocalyx，Schizonepeta tenuifolia，F(xiàn)olium Mori and Forsythia Suspensa）Fig.1 GC chromatograms

特征圖譜分析：26批次樣品的特征圖譜區(qū)別較大，主要為16批次缺失β－蒎烯峰、11批次缺失檸檬烯峰，7批次缺失薄荷酮峰、13批次缺失峰6。僅8批次的特征圖譜峰完整（見表2）。β－蒎烯和檸檬烯分屬連翹和桑葉，處方工藝中提取工藝為煎煮，兩類成分的缺失提示企業(yè)提取罐煎煮參數(shù)的差異，會造成該類抗菌成分的缺失。薄荷酮和峰6分屬薄荷，處方工藝中提取方式為提取揮發(fā)油，此類成分的缺失，結(jié)合HPLC法含量測定結(jié)果，提示企業(yè)投料的薄荷藥材質(zhì)量欠佳或投料不足。以上結(jié)果可推測，市售風熱感冒顆粒質(zhì)量參差不齊，亟須提高其質(zhì)量標準，加大其質(zhì)量品質(zhì)監(jiān)控。

表2 26批風熱感冒顆粒特征圖譜共有峰的相對保留時間Tab.2 Relative retention time for the common peaks of characteristic chromatograms of 26 batches of Fengre Ganmao Granules

3 討論

3.1 色譜柱選擇

預試驗中考察了DB－WAX（聚乙二醇）毛細管柱（30 m×0.53 mm，1.0μm），DB－WAX（聚乙二醇）毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.50μm），HP－5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），以及不同柱溫及程序變溫條件對結(jié)果的影響。結(jié)果DB－WAX（聚乙二醇）毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.50μm）在正式研究中規(guī)定的條件下，分離度好，保留時間適中，峰形較好，故被選用。

3.2 提取溶劑選擇

文獻[11－13]中揮發(fā)油提取多采用乙酸乙酯作為吸收液，但預試驗發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯有一定水溶性，會造成樣品中的部分揮發(fā)性成分因溶劑混溶而消失。而以石油醚（60～90℃）作為吸收液時，待測成分色譜峰峰面積較大，且特征信息較全面、干擾較少。故以石油醚（60～90℃）為吸收液。

3.3 提取方法選擇

預試驗中比較了BUCHIDistillation Unit K－350水蒸氣蒸餾法及藥典附錄揮發(fā)油測定法，結(jié)果水蒸氣蒸餾法提取雜質(zhì)少，峰形佳，干擾小，故被選用。

3.4 餾出液體積確定

依法制備供試品溶液，收集150，250，500 mL餾出液并進行比較，結(jié)果峰面積差異不大，為保證測定成分餾出完全，故確定餾出液體積為250 mL。

3.5 方法評價

中藥的特征圖譜能較全面地反映制劑中所含化學成分的種類和數(shù)量，能有效地體現(xiàn)中藥成分的整體性和綜合作用[14－16]。本研究中建立了風熱感冒顆粒的氣相色譜特征圖譜，標定了8個共有峰，并指認出5個特征峰。該方法操作簡便、快速，準確性和專屬性均良好，可較全面地反映風熱感冒顆粒中所含的化學成分，可為其質(zhì)量的均一性提供依據(jù)。