火焰原子吸收光譜法同時測定養血軟堅片中鈣、鋅、鎂含量

李彥超，李宜鮮

（河南省食品藥品檢驗所·國家藥品監督管理局中藥材及飲片質量控制重點實驗室，河南 鄭州 450018）

養血軟堅膠囊是上海中醫藥大學附屬曙光醫院的醫院制劑，具有養血活血、軟堅通絡功效，臨床多用于治療骨關節炎及骨關節疼痛等癥[1－3]。養血軟堅方中牡蠣為牡蠣科動物長牡蠣Ostrea gigasThunberg的貝殼，經去肉、洗凈、干燥、碾碎而得，具有重鎮安神、潛陽補陰、軟堅散結功效，多用于驚悸失眠、眩暈耳鳴、瘰癖痰核、瘕痞塊等證的治療[4]，其主要成分為碳酸鈣、無機鹽、微量元素等[5]。本研究中采用火焰原子吸收光譜法同時測定養血軟堅片中鈣（Ca）、鎂（Mg）和鋅（Zn）的含量，為牡蠣在其復方中的提取純化工藝的選擇提供參考。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AAS－ZEEnit700型原子吸收分光光度計（德國Analytik Jena AG公司）；XR205SM－DR型分析天平（瑞士Precisa公司）；AS－1型Ca，Zn，Mg空心陰極燈（北京有色金屬研究院）；ETHOSA微波消解系統（意大利Milestone公司）；ED16型智能樣品處理器（北京萊伯泰科儀器有限公司）；Milli－Q型超純水處理系統（美國Millipore公司）。

1.2 試藥

鈣標準溶液（批號為12053032），鋅標準溶液（批號為11010672），均購自國家鋼鐵材料測試中心鋼鐵研究總院，質量濃度均為1 000 mg/L；鎂標準溶液（國家有色金屬及電子材料分析測試中心，批號為13622－2，質量濃度為1 000 mg/L）；65%硝酸（優級純，美國Merck公司）；35%過氧化氫水溶液（優級純，美國Alfa Aesar公司）；氧化鑭（優級純，天津市光復精細化工研究所）；鹽酸（優級純，北京化工廠分廠）；水為超純水。白芍、秦艽、甘草、牡蠣等藥材均購自禹州金地中藥飲片有限公司，經河南省食品藥品檢驗所李振國主任藥師鑒定為正品。

2 方法與結果

2.1 試驗條件[6-8]

采用火焰原子吸收光譜法測定Ca，Zn，Mg含量，主要光源為空心陰極燈和無極放電燈，輸入波長、電流及狹縫寬度見表1。

表1 各元素原子吸收分光光度計工作條件Tab.1 Working conditions of atomic absorption spectrophotometer for each element

2.2 樣品及溶液制備

樣品溶液：取白芍、秦艽、甘草、牡蠣等藥材各適量，以8倍量水浸泡30 min后，煎煮1 h，濾過；藥渣加6倍量水煎煮45 min，濾過；合并濾液，將濾液濃縮至相對密度為1.10～1.15[（60±3）℃]，放冷至室溫，得60 mL藥液（相當于牡蠣0.333 3 g/mL）[9－10]；取30 mL藥液作復方水煎液（樣品1）；另取30 mL藥液加乙醇至藥液含醇量達50%，靜置36 h，濾過，回收乙醇，濃縮至30 mL，即得水提醇沉液（樣品2）。取牡蠣30 g，同上述藥液制備方法制備牡蠣單煎液（相當于牡蠣0.333 3 g/mL），即得對照樣品。

供試品溶液：精密量取上述樣品溶液各5 mL，置消解罐中，蒸至近干，加入8 mL硝酸，90℃預消解至無明顯棕色氣體溢出，取出，放冷；加2 mL過氧化氫，補硝酸至10 mL。將消解罐置微波消解儀中，按微波消解程序（用10 min升溫至140℃后，再用10 min升溫至200℃、維持10 min）消解，放冷，取出消解罐，加熱以除去多余的氮氧化物；放冷，用去離子水轉入25 mL容量瓶中并定容，搖勻，備用。取適量，稀釋，分別作為Mg和Zn的供試品溶液；精密吸取備用液適量，用20 g/L氧化鑭溶液（稱取23.45 g氧化鑭，先用少量水濕潤，再加75 mL鹽酸于1 000 mL容量瓶中溶解，加去離子水定容）稀釋，即得Ca供試品溶液。

空白對照溶液：按樣品制備方法制備空白樣品，再按供試品溶液制備方法制備缺相應物質的空白對照溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取1.2項下標準溶液，以20 g/L氧化鑭溶液制成Ca質量濃度分別為5，10，20，30，40μg/mL的系列標準溶液，以2%硝酸制成Zn質量濃度分別為0.1，0.3，0.5，0.7，1.0μg/mL，Mg質量濃度分別為0.2，0.4，0.6，0.8，1.0μg/mL的系列標準溶液。取上述溶液適量，按2.1項下試驗條件進樣檢測，記錄吸光度。以標準品質量濃度（X）為橫坐標、吸光度（Y）為縱坐標進行線性回歸，得Ca，Zn，Mg回歸方程分 別 為Y1=0.024 7X1+0.029 5（r=0.999 8）、Y2=0.284 9X2+0.011 0（r=0.999 3）、Y3=0.702 6X3+0.030 8（r=0.999 1）。結果表明，Ca，Zn，Mg質量濃度分別在5～40μg/mL、0.1～1.0μg/mL、0.2～1.0μg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

檢測限與定量限考察：取2.2項下空白對照溶液適量，按2.1項下試驗條件重復進樣測定11次，記錄吸光度，并計算其標準偏差，以3倍、11倍標準偏差對應的各待測元素質量濃度作為檢測限及定量限[11－14]。結果Ca，Zn，Mg的檢測限分別為0.8，0.3，0.4 mg/L，定量限分別為2.6，1.0，1.3 mg/L。

精密度試驗：取20 mg/L的Ca、0.5 mg/L的Zn、0.6 mg/L的Mg標準溶液各適量，按2.1項下試驗條件連續進樣測定6次，記錄吸光度。結果Ca，Zn，Mg吸光度的RSD分別為0.32%，1.35%，0.49%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.2項下供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，6，8，10，12 h時按2.1項下試驗條件進樣測定，記錄吸光度。結果Ca，Zn，Mg吸光度的RSD分別為1.65%，1.81%，2.01%（n=7），表明供試品溶液在室溫放置12 h內基本穩定。

重復性試驗：精密量取2.2項下單煎液適量，各6份，按2.2項下方法制備供試品溶液，再按2.1項下試驗條件進樣測定，記錄吸光度。結果Ca，Zn，Mg吸光度的RSD分別為0.93%，1.78%，1.13%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的對照樣品適量，每份2.5 mL，共9份，分別加入低、中、高質量濃度的標準溶液，按2.2項下方法制備供試品溶液，再按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄吸光度，并計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果（n=9）Tab.2 Results of the recovery test（n=9）

2.4 樣品含量測定

取3種樣品各適量，分別按2.2項下方法制備供試品溶液，再按2.1項下試驗條件進樣測定，平行測定3次，記錄吸光度，并計算樣品含量，結果見表3。結果顯示，復方水提液、水提醇沉液中Ca和Zn的含量明顯高于單煎液，Mg在3種溶液中的含量差異不大。

表3 樣品含量測定結果（mg/L，n=2）Tab.3 Content determination of calcium，zinc and magnesium in the samples（mg/L，n=2）

3 討論

中藥常規提取純化方法主要有水提醇沉法、乙醇回流法、提取后柱純化法等，養血軟堅片優選工藝為水提醇沉法；方中牡蠣采用水提取后醇沉，牡蠣主要成分為碳酸鈣、無機鹽、微量元素等，復方水提醇沉法似有不妥。經驗證，復方水煎液、水提醇沉液中Ca和Zn的含量明顯高于單煎液，由于牡蠣中Ca在單煎液中溶解度小，而在復方水煎液及水提醇沉液中存在如皂苷、樹膠、蛋白質等能降低表面活性物質的混合物，上述混合物濃度較高時，就會在溶液中聚合成“膠團”，原來在水中不溶解或部分溶解的物質分子可鉆進膠團的內部，分布在膠團的中心或夾縫中，顯著升高溶解度[15]。另一方面，中藥煎劑屬膠體溶液，由許多難溶物質以分子形式組成微粒混懸于介質中成為溶膠或粗分散體系，也是使物質在溶液中含量增加的一個重要因素[15]。目前，對于含礦物質及貝殼類藥材的中藥復方制劑，仍選用合煎為主。

供試品均為水溶液，嘗試用2%硝酸稀釋（Ca供試品溶液用2 g/L氧化鑭溶液稀釋）后經微孔濾膜濾過進樣，但重復性差，譜圖有肩峰或峰分裂，原因為樣品未消解，有機或無機雜質干擾所致，因此樣品仍需消解后再檢測。

綜上所述，該方法操作簡便、準確，穩定性、重復性好，可用于同時測定養血軟堅片中Ca，Zn，Mg的含量。