乳腺癌組織中黑色素瘤相關抗原-As的表達及臨床意義

李鳳蓮，王玉新，杜麗新，霍立剛，劉俊芳，桑梅香，李書清

(1.河北省衡水市第五人民醫院檢驗科，河北 衡水 053000；2.河北醫科大學第四醫院科研中心免疫室，河北 石家莊050011；3.河北省衡水市人民醫院，河北 衡水 053000)

0 引言

現今乳腺癌是國內外女性的疾病殺手之一[1]，盡管治療手段多樣化[2]，其危害性依然強大。近年來，腫瘤相關抗原的研究已經成為腫瘤免疫治療研究的熱點。作為癌/睪丸抗原家族成員之一的MAGE，由于其表達特性以及對腫瘤病理指標變化的影響，為臨床免疫治療效果提供參考。本研究采用免疫組織化學法研究在乳腺癌組織及相應乳腺正常組織中MAGE-A 家族 (包括 MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12，以下簡稱為MAGE-As)的表達；分析了MAGE-As蛋白與乳腺癌患者的臨床病理學指標之間的相關性，為臨床乳腺癌治療提供理論依據及參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇衡水市第五人民醫院2018年至2019年住院患者110名女性患者，患者診斷方法采用現今常用的經典經針吸細胞學或冰凍病理切片法，年齡34～76歲，其排除標準：未進行化療、放療和內分泌治療。患者基本情況：＜55歲者60例，≥55歲者50例 。腫瘤大小：≤2 cm3的患者量為13例，＞5cm3的患者量為75例，在上述兩者之間的患者量為22例。根據國際抗癌聯盟UICC的乳腺癌分期標準對乳腺癌患者進行分期：I期，Ⅱ期，Ⅲ期的人數分別為24例，69例，17例；組織學分期，I，II級，Ⅲ級級患者數量依次為28例，68例，14例； ER呈陽性及陰性患者分別有70例，40例； PR陽性及陰性患者分別有69例，41例；臨床病理學檢測顯示： HER-2是陽性(+++)47例，HER-2陰性(-)者63例； VEGF陽性及陰性分別有99例，11例；抑癌基因P53陽性者及PR陰性者依次為46例， 64例。腋淋巴結轉移患者54例，腋淋巴結未轉移患者56例。

1.2 實驗材料

乳腺癌組織的收集：離體半小時內的新鮮的組織，正常乳腺組織的收集：距乳腺癌組織大于5 cm的福爾馬林溶液(10%)固定，石蠟包埋。

1.3 實驗方法

采用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶法 (streptavidin peroxdase conjugated method，S-P)，試劑盒來源是北京中杉生物技術有限公司，操作步驟完全依照說明書進行。鼠抗人MAGE-A(6C1)單克隆抗體(Abcam公司)1:200稀釋。陽性對照是人的正常睪丸組織，陰性對照是乳腺的正常組織。

1.4 統計學處理

所有數據應用SPSS 20.0統計分析，采用卡方檢驗及Spearsman檢驗進行相關數據的分析，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 判定標準

將組織標本放在光學顯微鏡下進行觀察，隨機選取計數細胞大于2000個的高倍鏡視野20個，對這20個視野進行綜合判斷分析，得出細胞陽性率及其染色強度。

本實驗的病理判斷標準如下：MAGE-As的陽性病理分級主要依據顯微觀察范圍內的陽性細胞數目及細胞內細顆粒顏色判斷。細胞質/細胞核內有棕黃色細顆粒，陽性細胞的數目少于25%，標記為MAGE-As(-)；陽性細胞的數目約26%～50%，細胞內顆粒顏色呈淡黃色標記為(+)；陽性細胞數約51%～75%，細胞內顆粒顏色呈棕黃色，標記為(++)；陽性細胞數占76%-100%，細胞內顆粒顏色呈棕色，以上為(+++)。

圖1 正常組織MAGE-As蛋白的表達(包含MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10、-A12)

圖2 正常組織MAGE-As蛋白的表達

圖3 MAGE-As 在乳腺癌組織中的陰性表達

圖4 MAGE-As 在乳腺癌組織中的陽性表達

2.2 MAGE-As在乳腺癌和相應癌旁正常組織中的表達

研究表明：通過對110例患者的癌旁正常乳腺組織研究可知，所有正常乳腺組織均未發現MAGE-As的蛋白表達，有48例患者組織的MAGE-As蛋白表達呈陽性，即陽性率為43.6%，結果提示MAGE-As是腫瘤特異性抗原，見表1。

表1 MAGE-As在乳腺癌和相應癌旁正常組織中的表達

2.3 MAGE-As蛋白的表達與乳腺癌患者臨床病理學指標之間的相關性

見表2。

表2 MAGE-As蛋白表達與乳腺癌臨床病理學指標的相關性

在110例乳腺癌患者的組織中，HER-2表達陰性患者63 例 (-～++)，、陽性患者 47 例 (+++)；MAGE-As表達陽性的患者在HER-2表達陰性者中所占的比例為31.7%(20/63)；MAGE-As表達陽性的患者在HER-2表達陽性者中所占的比例為占61.7%(29/47)，明顯高于HER-2表達陰性組 (χ2=9.779，P=0.002)。MAGE-As蛋白的表達與 HER-2 及ER的表達呈正相關。

ER研究結果表明： ER表達呈陰性的患者有40例(-～++)，其中 MAGE-As表達呈陽性占 35.0%(14/40)，ER 表達呈陽性(+++)的患者有70例，其中MAGE-As表達呈陽性的患者占57.1%(40/70)，明顯高于ER表達的陰性組(χ2=4.994，P=0.025)。

除此之外，MAGE-As蛋白的表達與乳腺癌患者的其它臨床參數均無明顯相關性 (P＞0.05)，如 VEGF(χ2=0.565，P=0.331)，P53(χ2=0.659，P=0.417)、乳腺癌患者年齡 (χ2=1.509，P=0.219)，PR 狀態 (χ2=1.182，P=0.0277)、臨床分期 (χ2=4.885，P=0.087)、腫瘤大小 (χ2=7.648，P=0.122)、組織學分級 (χ2=5.96，P=0.051)、淋巴結轉移 (χ2=0.044，P=0.835)。

3 討論

乳腺癌屬于異質性疾病中的一種，是女性最常見且最恐懼的惡性腫瘤之一。乳腺癌的發生與多種因素有關，如年齡、避孕藥、飲酒、焦慮、病毒感染等因素，針對乳腺癌形成可能有關的因素，結合腫瘤免疫學和分子生物學的綜合研究，現今最乳腺癌進行治療的方法主要是以腫瘤特異性抗原為基礎的進行的治療，該治療方法具有無創傷、特異性強等優點。對一些復發、晚期和轉移腫瘤具有較好的療效。

MAGE-A家族成員存在同源結構域，制備對MAGE-A家族所有成員都起作用的特異性的抗體難以實現，因此限制了該家族成員蛋白水平的研究[3,4]。本研究利用MAGEA(6C1)抗體，由于其可與MAGE-As發生交叉反應，可同時檢測。乳腺癌組織及其癌旁正常組織中的MAGE-As蛋白的表達研究表明：MAGE-As蛋白在110例乳腺癌組織中陽性率為43.6%(P＜0.05)，MAGE-As蛋白在非乳腺癌的正常組織不表達，說明MAGE-As蛋白是乳腺癌組織的特異性抗原。

MAGE-As蛋白表達與乳腺癌患者臨床一般特征(包含年齡、VEGF、腫瘤大小、PR狀態、淋巴轉移、病理類型、P53、臨床分期、組織學分級等)研究表明：兩者均無顯著關系。乳腺癌患者中HER-2呈陽性者MAGE-As的表達率61.7%(29/47)，明顯高于 HER-2 呈陰性組 41.3%(26/63)(χ2=9.779，P=0.002)，該統計結果可得出以下結論：MAGE-As與HER-2具有相關性，并且是呈正相關。Kufer等人研究顯示[5,6,7]HER-2的表達呈陽性會對乳腺癌患者的預后產生不良影響，MAGE-As與HER-2又是呈彼高此高的正相關，分析MAGE-As蛋白的高表達同樣對乳腺癌患者的預后產生不良影響，可能是其預后不良的重要標志。

分析ER陽性的乳腺癌患者MAGE-As蛋白的表達，結果表明，此類患者MAGE-As蛋白的陽性表達率為57.1%(40/70)，明 顯 高 于 ER 陰 性 患 者 35.0%(14/40)(χ2=4.994，P=0.025)。MAGE-As蛋白在乳腺癌組織中高表達可推測MAGE-As蛋白可作為乳腺癌治療的參考指標之一。

重組蛋白MAGE可作為免疫原產生的抗體，可與MAGE-A12、MAGE-A1-A4，MAGE -A10、MAGE-A6發 生 反 應，推測可研究MAGE-As的多價疫苗。另外，腫瘤中抗原表位的呈遞具有HLA型別的限制，CTA的表達不均質，僅僅應用CTA免疫療法不理想，應該依據受體患者及腫瘤個體特異性，設計包含多類型表位的CTA多價疫苗。