曲克蘆丁片的質(zhì)量風險監(jiān)測與評價

于瑋潔，劉明鷺

(青島市食品藥品檢驗研究院，山東 青島 266071)

曲克蘆丁，又名維腦路通或維生素P4，目前曲克蘆丁是以蘆丁與環(huán)氧乙烷為原料，以甲醇與水為介質(zhì)，在堿催化劑存在下合成的，以三羥乙基蘆丁為主，同時含有一羥乙基蘆丁、二羥乙基蘆丁和四羥乙基蘆丁等組分的多組分混合物。曲克蘆丁是臨床治療心腦血管疾病的基本藥物。我國曲克蘆丁制劑于1979 年批準上市，但因其含有較多工藝雜質(zhì)，很難進一步純化，造成其在臨床使用中的一些風險。不良反應(yīng)主要有惡心、嘔吐、腹痛等消化系統(tǒng)，胸悶、憋氣、呼吸困難、呼吸急促等呼吸系統(tǒng)，寒戰(zhàn)、發(fā)熱、水腫、過敏反應(yīng)、過敏性休克等全身性反應(yīng)等[1-5]。經(jīng)國家局網(wǎng)站查詢，曲克蘆丁片共238個批準文號，涉及232家生產(chǎn)企業(yè)，非國家基本藥物。國內(nèi)現(xiàn)行標準為《中國藥典》2015年版(二部)，EP和BP收載原料藥，USP和JP均未收載。

本次為2018年山東省質(zhì)量風險監(jiān)測工作，共抽樣30批次，覆蓋全省4個市，規(guī)格均為60 mg，涉及批準文號9個，占總批準文號的3.8%，涉及生產(chǎn)企業(yè)9家，占總生產(chǎn)企業(yè)的3.9%，抽自生產(chǎn)企業(yè)2批，經(jīng)營企業(yè)24批，醫(yī)療機構(gòu)4批。我們按照法定標準進行了檢驗并進行了統(tǒng)計分析，根據(jù)藥品質(zhì)量風險點進行了探索性研究，以期為該品種的質(zhì)量標準提高與質(zhì)量監(jiān)管提供技術(shù)支持。

1 法定標準檢驗

依據(jù)《中國藥典》2015年版(二部)[6]檢驗30批次曲克蘆丁片，所有項目均符合規(guī)定，合格率為100%。

1.1 性狀 30批樣品合格率為100%。2批次為薄膜衣片，出去包衣后顯黃綠色。28批次為糖衣片，除去包衣后顯黃綠色。

1.2 鑒別 包括紫外光譜鑒別和液相色譜鑒別兩項，30批次樣品鑒別結(jié)果均符合規(guī)定。

1.3 其他組分 按峰面積歸一化法計算，除曲克蘆丁峰外，單個最大組分峰面積不得大于總峰面積的10.0%，其他單個組分峰面積不得大于總峰面積的5.0%，各組分峰面積的和不得大于總峰面積的20.0%。30批次樣品的檢驗結(jié)果均符合規(guī)定，合格率100%，30批次樣品單個最大組分分布于2.29～6.31%之間，平均值為4.26，極差為4.02；其他單個最大組分檢驗結(jié)果分布于2.01～3.91%之間，平均值為2.87，極差為1.90；各組分的和檢驗結(jié)果分布于10.94～14.46%之間，平均值為13.05，極差為3.52。詳見圖1。各個生產(chǎn)企業(yè)單個最大組分差異較大，根據(jù)數(shù)據(jù)分析單個最大組分為四羥乙基衍生物或二羥乙基衍生物，對抽樣量最大的兩個生產(chǎn)企業(yè)的數(shù)據(jù)進行了比較，結(jié)果兩家生產(chǎn)企業(yè)批間離散程度均較大，提示企業(yè)應(yīng)重視產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。

圖1 曲克蘆丁片其他組分檢測結(jié)果直方圖

1.4 溶出度 現(xiàn)行標準為溶出度與釋放度測定法第二法槳法，75 r·min-1，45 min取樣，標準規(guī)定限度為80%。30批樣品溶出度的檢驗結(jié)果均符合規(guī)定，合格率100%。詳見圖2，30批曲克蘆丁片溶出度檢測結(jié)果散點圖。雖然結(jié)果均符合藥典規(guī)定，但從圖中可以看出，有些廠家和批次6片之間溶出度數(shù)據(jù)離散程度大，不均勻，且有的低于或者接近80%的限度規(guī)定。

圖2 30批曲克蘆丁片溶出度檢測結(jié)果散點圖

1.5 重量差異 2批薄膜衣樣品重量差異均符合規(guī)定，合格率為100%。

1.6 含量測定 含量限度為標示量的90.0%～110.0%。30批樣品的含量測定結(jié)果均符合規(guī)定，合格率100%。詳見圖3，含量最大值105.1%，最小值96.0%，均值100.09%，呈正態(tài)分布(P>0.05)。

圖3 含量測定結(jié)果直方圖

法定標準檢驗分析發(fā)現(xiàn)存在以下問題：①曲克蘆丁片其他組分含量均>10%，檢出包括其他組分在內(nèi)的20多個色譜峰，有關(guān)物質(zhì)是藥物安全性的一個重要指標，而現(xiàn)行標準中缺少對有關(guān)物質(zhì)的控制，有待進一步的研究；②溶出度測定中45 min時有的生產(chǎn)企業(yè)藥物溶出不完全，接近限度，甚至有的未達到限度，為保證藥物的療效，對該品種的溶出行為應(yīng)進一步的研究。

2 探索性研究

結(jié)合法定標準檢驗的結(jié)果和調(diào)研情況，針對兩個風險點進行了以下探索性研究。

不同放置條件和貯藏條件下草莓裸根苗的生理變化………………………………… 付崇毅，姜 偉，杜金偉，白紅梅，薛國萍（99）

2.1 有關(guān)物質(zhì)的研究

2.1.1 試驗條件 色譜柱：Agela Venusil MP C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；檢測波長254 nm；流速：0.5 mL·min-1；流動相A:磷酸鹽緩沖液(0.1 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液，用磷酸調(diào)pH至4.4)；流動相B:乙腈，按表1進行洗脫。

表1 洗脫流程

2.1.2 溶液的配制 供試品溶液：取供試品細粉適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成1 mg·mL-1的溶液。取曲克蘆丁系統(tǒng)適用性對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋制成0.05 mg·mL-1的溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗溶液。精密量取系統(tǒng)適用性試驗溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖4，曲克蘆丁峰的保留時間約為18 min，四羥乙基蘆丁峰、一羥乙基蘆丁峰、蘆丁峰、曲克蘆丁峰和二羥乙基蘆丁峰的相保留時間分別約為0.5、0.8、0.9、1.0和1.1，上述各峰之間的分離度均符合要求。

圖4 曲克蘆丁片有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)適用性圖譜

2.1.3 雜質(zhì)來源的分析與破壞試驗 結(jié)合相關(guān)文獻、廠家提供的原料藥合成路線以及破壞試驗，分析各種雜質(zhì)的來源及藥物的降解途徑。曲克蘆丁的雜質(zhì)可分為兩種，一是工藝雜質(zhì)，二是降解雜質(zhì)。

工藝雜質(zhì)分析：曲克蘆丁原料的合成是以蘆丁和環(huán)氧乙烷為合成起始物，經(jīng)過多步反應(yīng)生成的三羥乙基蘆丁。其中間產(chǎn)物有一羥乙基蘆丁、二羥乙基蘆丁，反應(yīng)過量會生成四羥乙基蘆丁。在合成過程中用到了甲醇、水作為溶劑，以氫氧化鈉或三乙胺為催化劑。反應(yīng)溫度和反應(yīng)時間的控制、原料蘆丁的純度會直接影響最終產(chǎn)品的收率，也直接影響有關(guān)物質(zhì)的生成。分析在該合成反應(yīng)中可能產(chǎn)生的工藝雜質(zhì)有蘆丁、一羥乙基蘆丁、二羥乙基蘆丁和四羥乙基蘆丁。

降解雜質(zhì)分析：分別取曲克蘆丁原料和樣品，精密稱定5份，進行酸破壞(加1 mol·L-1鹽酸溶液2 mL，室溫放置2 h，用1 mol·L-1氫氧化鈉溶液2 mL中和)、堿破壞(加1 mol·L-1氫氧化鈉溶液2 mL，室溫放置2 h，用1 mol·L-1鹽酸溶液2 mL中和)、氧化破壞(加30%過氧化氫溶液2 mL，室溫放置4 h)、高溫破壞(120 ℃放置6 h)、光照破壞(光照放置24 h)。破壞結(jié)束后，加流動相制成1 mg·mL-1的供試品溶液。按“2.1.1”項下色譜條件測定。結(jié)果曲克蘆丁片在酸、堿、氧化、光照、加熱等條件下，沒有明顯的新雜質(zhì)生成，但各雜質(zhì)有所增大，各雜質(zhì)的總和明顯增加。酸破壞、光照破壞和加熱破壞均導(dǎo)致四羥乙基蘆丁增加。

2.1.4 檢測限與定量限 取供試品溶液，用流動相稀釋至0.5 μg·mL-1的溶液作為靈敏度溶液，計算曲克蘆丁的檢測限為27 ng·mL-1，定量限為89 ng·mL-1。

A.空白輔料；B.原料；C.片劑

表2 曲克蘆丁原料和樣品有關(guān)物質(zhì)結(jié)果

由典型圖譜和表中的結(jié)果可見羥乙基蘆丁峰主要來源于原料，除三羥乙基蘆丁外，其他的羥乙基蘆丁的藥理活性和毒性目前沒有文獻報道，且除羥乙基蘆丁外，仍有多個較明顯雜質(zhì)，且曲克蘆丁片大部分的雜質(zhì)來源于原料。因此原料質(zhì)量的好壞直接影響到制劑的質(zhì)量。曲克蘆丁片按照歸一化法，其他組分含量均大于10%，檢出包括其他組分在內(nèi)的20多個色譜峰，曲克蘆丁的原料是由蘆丁與環(huán)氧乙烷合成制得，而蘆丁為中藥提取物，蘆丁中雜質(zhì)的多少直接影響曲克蘆丁中雜質(zhì)的含量，蘆丁中多含有槲皮素雜質(zhì)，在合成曲克蘆丁時，槲皮素易與環(huán)氧乙烷生成羥乙基槲皮素雜質(zhì)。因此應(yīng)從源頭控制原料的質(zhì)量。

2.2 溶出度的研究

2.2.1 試驗條件 采用現(xiàn)行標準溶出度的實驗方法測定9家生產(chǎn)企業(yè)樣品在水中的溶出曲線，初步進行曲克蘆丁片溶出行為的研究[7-8]，評價企業(yè)間溶出曲線差異，考察處方及工藝對溶出曲線的影響，更好的評價本品的質(zhì)量。具體試驗條件如下：溶出介質(zhì)：水900 mL；轉(zhuǎn)速：75 r·min-1；取樣時間點：5、10、15、20、30、40、45、60 min。供試品溶液：取續(xù)濾液作為供試品溶液；對照品溶液：取曲克蘆丁對照品約33 mg，置50 mL量瓶中，加水振搖使溶解，加水稀釋至刻度，精密量取5 mL置50 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 試驗結(jié)果及分析 本次抽驗的曲克蘆丁片劑有糖衣和薄膜衣，選取9個生產(chǎn)企業(yè)的一批樣品，按照上述方法繪制6片平均溶出量的溶出曲線，詳見圖7和圖8。薄膜衣片在20 min 時已基本溶出完全，而糖衣片由于包衣層的崩解過程影響了片芯的溶出，在前10 min 均有明顯的溶出時滯，由于各個廠家包衣處方和厚度的不同導(dǎo)致包衣層崩解的速度也不同，從而溶出曲線有較大差異。

圖7 糖衣片樣品不同企業(yè)平均溶出曲線圖

圖8 薄膜衣片樣品企業(yè)平均溶出曲線圖

糖衣片樣品包衣材料溶解緩慢，造成片芯溶出遲滯。9家生產(chǎn)企業(yè)樣品在水中的溶出曲線差異較大，有的屬于“突釋”，有的屬于“緩釋”，還有介于兩者之間。試驗中發(fā)現(xiàn)溶出均勻性差并不是個別現(xiàn)象，有兩家生產(chǎn)企業(yè)的曲克蘆丁片存在包衣溶解不佳的情況，影響藥物的溶出。因此將這兩個企業(yè)所抽樣品均進行了溶出曲線的考察，詳見圖9和圖10。兩家生產(chǎn)企業(yè)不同批號的樣品溶出曲線差距較大，其中觀察D企業(yè)樣品的溶出過程，發(fā)現(xiàn)1批樣品的糖衣在15 min時仍未溶解，只是從中間裂開，片芯由中間裂開的縫中溶解，直至60 min，仍有大片的包衣，嚴重影響了片芯的溶出，但另一批號樣品的溶出過程未發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象，懷疑包衣的處方或工藝有所更改；C企業(yè)不同批號樣品的溶出曲線差距較大，提示企業(yè)生產(chǎn)工藝中存在不合理因素，影響藥物的溶出均勻性，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)關(guān)注制粒工藝、片劑的硬度等各項參數(shù)的合理性，進一步提升企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量，保證藥物療效穩(wěn)定性。

圖9 D企業(yè)樣品的溶出曲線

圖10 C企業(yè)樣品的溶出曲線

3 影響本品質(zhì)量主要因素分析

3.1 曲克蘆丁原料質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到制劑的質(zhì)量。應(yīng)從源頭控制原料的選擇。

3.2 不同企業(yè)糖衣的處方和厚度也各不相同，糖衣溶解的快慢直接影響到片芯的溶出。

3.3 生產(chǎn)工藝中存在不穩(wěn)定因素，導(dǎo)致了藥物的溶出均一性差。

4 分析及建議

風險點1：曲克蘆丁片在同一溶出度標準下，制劑質(zhì)量差異較大，同一生產(chǎn)企業(yè)藥物的溶出均勻性差，影響臨床有效性。建議對該品種進行溶出度一致性評價，淘汰質(zhì)量低劣的產(chǎn)品。

風險點2：曲克蘆丁原料中的未知雜質(zhì)及其他羥乙基蘆丁的含量，直接影響曲克蘆丁制劑的有關(guān)物質(zhì)，因此，建議生產(chǎn)企業(yè)精選原料曲克蘆丁，或者通過反應(yīng)時間以及催化劑的選擇等因素來改進原料的合成工藝，從而降低原料及制劑中的雜質(zhì)。