升陽益胃顆粒的制備工藝研究

王宏,馬全龍,姜亮,李鵬,王坤

(1.山東慈德醫藥有限公司,山東 濟南 250100；2.濟南龍華醫藥技術有限公司,山東 濟南 250032；3.山東仙河藥業有限公司,山東 東營 257231；4.山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南 250101)

升陽益胃顆粒是在升陽益胃湯基礎上制成的顆粒劑，升陽益胃湯是金元時期著名醫家李東垣《脾胃論》中的經典名方，已入選國家中醫藥管理局古代經典名方目錄，由黃芪、半夏、人參、甘草、防風、白芍藥、羌活、獨活、橘皮、茯苓、澤瀉、柴胡、白術、黃連、生姜和大棗組成[1]。主治脾胃之虛，怠惰嗜臥，四肢不收，時值秋燥令行，濕熱少退，體重節痛，口苦舌干，食無味，大便不調，小便頻數，不嗜食，食不消；兼見肺病，瀝淅惡寒，慘慘不樂，面色惡而不和[2]。本試驗對升陽益胃顆粒的提取和成型工藝進行了優化篩選。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 AL204電子分析天平[梅特勒-托利多國際貿易(上海)有限公司]；CAV313C電子分析天平(上海皆準儀器設備有限公司)；LC-15C高效液相色譜儀(島津)；UC-120D超聲波清洗器(寧波市雙嘉儀器有限公司)；DHG型鼓風干燥箱(鄭州宏華儀器有限公司)。

1.2 試藥 黃芪、半夏、人參、甘草、防風、白芍、羌活、獨活、橘皮、茯苓、澤瀉、柴胡、白術、黃連、生姜和大棗等藥材飲片均購自山東博康中藥飲片有限公司；糊精(曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號：F20209990413)；蔗糖(湖南新綠方藥業有限公司，批號：F20170000474)；可溶性淀粉(山東聊城阿華制藥股份有限公司，批號：F20190000179)；芍藥苷對照品(20 mg,批號：110736-201943，純度為95.1%，含量測定用)、甘草苷對照品(20 mg,批號：113280-201928，純度為97.4%，含量測定用)購自中國食品藥品檢定研究院；乙醇(山東龍玉泉藥用輔料有限公司，批號：F20170000523)；乙腈(東莞市斯巴達化學有限公司)；磷酸(天津賽孚瑞科技有限公司)為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.2 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；SB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm，安捷倫)；以乙腈-0.1%磷酸(15∶85)為流動相，檢測波長230 nm[3]。

2.1.3 混合對照品溶液制備 精密稱取芍藥苷對照品12.89 mg置于50 mL量瓶中，甘草苷對照品12.58 mg置于100 mL量瓶中，分別加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得質量濃度分別為245.17 μg·mL-1和122.53 μg·mL-1的單一對照品儲備液。分別精密量取芍藥苷與甘草苷對照品儲備液各2.0 mL置于同一10 mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，得混合對照品溶液(芍藥苷49.03 μg·mL-1，甘草苷24.51 μg·mL-1)。

2.1.4 試驗樣品溶液制備 取各試驗項下提取液，濾過后合并，精密吸取5 mL，水浴蒸至近干，用70%甲醇轉移至5 mL量瓶中，用70%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.1.5 顆粒樣品溶液制備 取顆粒劑適量，混勻，研細，取約6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇100 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得[4]。

2.1.6 陰性對照溶液的制備 按處方組成比例，稱取除甘草、白芍外的其余藥味，制成不含甘草、白芍的陰性樣品，同法制成陰性對照品溶液。

2.1.7 方法學考察 按《中國藥典》2015年版(通則9101)藥品質量標準分析方法驗證指導原則進行，結果甘草苷在12.18～73.06 μg·mL-1范圍內，回歸方程為Y=283 863X-16 496(R2=0.999 5)，精密度RSD=0.63%、重復性RSD=0.83%、加樣回收率范圍96.59%～101.25%、RSD=1.38%，在12 h內穩定性RSD=1.55%；芍藥苷在24.52～147.10 μg·mL-1范圍內，回歸方程為Y=836 229X-19 615(R2=0.999 7)，精密度RSD=1.12%、重復性RSD=0.87%、加樣回收率范圍98.96%～101.89%、RSD=1.52%，在12 h內穩定性RSD=1.29%。

2.2 提取工藝 分別稱取黃芪165 g、半夏82.5 g、人參82.5 g、甘草82.5 g、防風41.2 g、白芍41.2 g、羌活41.2 g、獨活41.2 g、橘皮33 g、茯苓24.8 g、澤瀉24.8 g、柴胡24.8 g、白術24.8 g、黃連16.5 g、生姜50 g，大棗12 g，共9份，每份共計788 g，參考文獻[5]，以甘草苷和芍藥苷含量為指標按表1進行試驗，結果見表2～3。

表1 因素水平表

表2 正交試驗設計與結果

表3 甘草苷含量方差分析

從表2～4分析，以甘草苷與芍藥苷為共同指標時，A3明顯優于A2、A1，B3明顯優于B2、B1，C因素各組間無明顯區別，可任意選擇；從可操作和生產成本等方面綜合考慮，最終確定提取工藝A3B3C1(加8倍量水提取3次，每次30 min)。

表4 芍藥苷含量方差分析

2.3 提取驗證試驗 按“2.2”項下分別稱取升陽益胃顆粒處方中黃芪等飲片3份，每份788 g，按優選的工藝(加8倍量水提取3次，每次30 min)提取驗證3次，測定出膏率、甘草苷和芍藥苷含量(見表5)。

表5 提取工藝驗證試驗結果表

結果表明，按優選的升陽益胃顆粒提取工藝提取驗證3次，出膏率及含量穩定。

2.4 成型工藝研究

2.4.1 潤濕劑的選擇 分別按升陽益胃顆粒處方稱取黃芪等飲片共4份，每份788 g，分別按優選的提取工藝提取，合并濾液，制成干膏，結合本品日服量，經預試驗，加入適量輔料，混勻，以不同潤濕劑制軟材，以尼龍篩網制粒，干燥，整粒(見表6)。

表6 潤濕劑選擇結果

由上表可知，干膏粉與賦形劑混勻后以20%乙醇制軟材，顆粒合適，可操作性強。

2.4.2 賦形劑的選擇 分別按升陽益胃顆粒處方稱取黃芪等飲片4份，每份788 g，分別按優選的提取工藝提取，制成干膏，粉碎，混勻，平均分成4份，與不同比例輔料混勻，制成制粒，以顆粒的成型率、制粒可操作性為評價指標，結果見表7。

表7 賦形劑選擇結果

結果：糖粉∶可溶性淀粉∶糊精=2∶3∶5為賦形劑時，顆粒的成型性好，可操作性強。

2.5 中試工藝驗證 按升陽益胃顆粒處方160倍投料，分別稱取黃芪13.2 kg、半夏6.6 kg、人參6.6 kg、甘草6.6 kg、防風3.3 kg、白芍藥3.3 kg、羌活3.3 kg、獨活3.3 kg、橘皮2.64 kg、茯苓1.98 kg、澤瀉1.98 kg、柴胡1.98 kg、白術1.98 kg、黃連1.32 kg、生姜4.0 kg、大棗0.96 kg，中試生產3批，對生產工藝進行驗證，結果見表8。

表8 升陽益胃顆粒中試表

結果經3批中試驗證，升陽益胃顆粒的出干膏率、成品率和含量等指標穩定可行。

3 討論

3.1 升陽益胃湯是補氣升陽名方，以黃芪為君，健脾益氣，升舉清陽；黨參、甘草健脾益胃，助黃芪補氣健脾之功；白術苦溫燥濕，茯苓淡滲利濕，白術與茯苓既能補脾益氣，又能化濕除濁，而助脾土健運；陳皮、半夏行氣和胃，調暢脾胃氣機升降；澤瀉甘寒利水滲濕，助白術茯苓健脾化濕；柴胡、羌活、獨活、防風四味皆為風藥，具有燥濕之功；風藥升散，又助黃芪升舉清陽；白芍養陰補血；黃連苦寒燥濕，以清除滯留余熱，配白芍可制風藥辛燥的作用[6]。全方令濁陰降、清陽升，脾氣健旺，氣機調暢，虛實并治，攻補兼施，補中有散，發中有收，氣足陽升，濕熱自除[7]。

3.2 為保持升陽益胃顆粒的經典名方特色，保證臨床療效，也符合國家關于古代經典名方除成型工藝外的其他制備方法應當與古代醫籍記載基本一致的相關規定[8]，結合日服用飲片量及出膏率等因素，宜制成顆粒劑。升陽益胃湯原方煎法為加水三盞，同煎至一盞，去渣，溫服[2]，經文獻考證[9-11]，金元時期一中盞者，約五合，1升=700 mL；1斤約合如今的660 g，生姜1片約等于5 g，棗1枚約等于3 g，每服三錢，相當于飲片劑量約12.4 g，每次服用干膏約3 g，加入糖粉、可溶性淀粉和糊精制成顆粒劑，單劑量包裝為10 g，每次服用1袋，便于患者攜帶和服用。

3.3 對升陽益胃顆粒提取工藝驗證3次，結果出膏率及含量穩定；以顆粒的成品率和制粒可操作性為評價指標，優選后顆粒的潤濕劑為低濃度乙醇，賦形劑為糖粉、可溶性淀粉和糊精，制成的顆粒硬度合適，溶化性好；按升陽益胃顆粒處方量的160倍投料，進行了3批中試生產，結果升陽益胃顆粒劑的成品率，甘草苷和芍藥苷含量穩定，優選的升陽益胃顆粒劑工藝適用于生產。