高效液相色譜-串聯質譜法同檢雞肉氟喹諾酮類與金剛烷胺殘留分析

周燦 隆雪明 楊彥寧 陳福華 歐海軍 張港 魏唯

（湖南省獸藥飼料監察所 410006）

近年來，禽肉產品中藥物殘留檢測成為是畜禽產品中安全監控的重點，特別是氟喹諾酮類藥物及抗病毒藥物的監測成為重中之重，國家制定了嚴格的法律法規，加強了食品安全監測工作。

目前，關于這些抗菌抗病毒藥物的檢測方法較多，有液相色譜法、液相色譜-質譜聯用法、酶聯免疫法等。但這些方法大多針對單一類藥物檢測，存在檢測耗時耗力、效率不高等弊端。本試驗旨在建立高效液相-串聯質譜法同時檢測雞肉中金剛烷胺與8 種氟喹諾酮類藥物殘留量，該方法操作簡單、快速、準確、靈敏度高，便于推廣應用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

HPLC-30A/QTRAP 4500 超高效液相色譜-串聯三重四級桿質譜聯用儀（SCIEX，日本島津公司），高效冷凍離心機（Tmermo MμLTIFμGE X1R），純水儀（Millipore 公司）。

諾氟沙星、氧氟沙星、甲磺酸培氟沙星、鹽酸洛美沙星、甲磺酸達氟沙星均為德國Dr 公司，鹽酸沙拉沙星、恩諾沙星、鹽酸環丙沙星均為中國獸醫藥品監察所，金剛烷胺為曼哈格，恩諾沙星D5、環丙沙星D8、金剛烷胺D15、沙拉-D8、環丙-D8、諾氟-D5 為阿爾塔。甲醇、乙腈、乙酸、甲酸均為色譜純、正己烷為分析純、實驗室用水符合GB/T 6682 規定的一級水。

1.2 標準品溶液配制

分別精密稱取各標準品，用純甲醇溶解定容至刻度，配制成質量濃度為500mg/L 的混合標準品溶液，置于棕色瓶中，于-20℃冰箱中保存。再根據需要用流動相稀釋為系列標準曲線濃度。

1.3 樣品前處理

稱取均質后的試樣2.00g 于50ml 離心管中，加入100ng/ml的混合內標溶液0.05ml，加入10ml 1%乙酸乙腈溶液，蓋上塞子，于渦旋混合儀上渦旋2min，以14000r/min 的速度離心5min，將上清液轉移至另一離心管中，氮吹至近干，用1.00ml 0.1%甲酸水乙腈（9+1）溶解，加入2ml 的乙腈飽和后的正己烷，渦旋1min，高速離心5min 后取下層清液過0.22μm 濾膜，待測。

1.4 測定方法

1.4.1 色譜條件

色譜柱型號為BEH C18（100mm×2.1mm，1.7μm），流動相A 為0.1%甲酸水溶液，流動相B 為乙腈溶液，梯度洗脫條件見表1。流速為0.3ml/min，柱溫：35℃；進樣量：5μL。

1.4.2 質譜條件

離子源：電子噴霧離子源（ESI），掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測（MRM）；電噴霧電壓（IS）：5500V；離子源溫度(TEM)：550℃；氣簾氣 (CμR) ∶10psi；霧化氣（GS1）：50psi；輔助加熱氣 (GS2)：50psi；碰撞氣 (CAD)：Mediμm；其余質譜參數見表2。

表2 質譜參數

2 結果分析

2.1 樣品前處理條件的優化

喹諾酮類藥物極性較大，且該化合物結構式中含有羧基和哌嗪基，屬于酸堿兩性，金剛烷胺是堿性化合物，本實驗參照相關標準考察了1%乙酸乙腈，乙酸乙酯，1%甲酸甲醇，1%甲酸乙酸乙酯作為提取溶劑，實驗表明，乙酸乙酯、酸化乙酸乙酯只對恩諾沙星有一定的提取效果，其他幾種藥物提取效率均很低。甲醇的極性較強，提取的雜質較多，且氮氣難吹干，不利于實驗的開展。采用1%乙酸乙腈提取時，乙腈對生物蛋白沉淀作用較好，能起到一定的凈化作用，對雞肉的8 種氟喹諾酮類及金剛烷胺有較好的回收率。為了簡化過程本方法采用1%乙酸乙腈提取一次，結果表明，用內標校正能獲得較好的回收率。

2.2 凈化條件優化

食品獸藥殘留分析常用凈化方法有冷凍去脂法，有機溶劑液液去脂法，固相萃取柱法等。比較了固相萃取與正己烷液液萃取，結果表明，固相萃取對回收率有一定影響。本方法采用正己烷去脂，同時采用內標法校正，回收率更高，定性更準確。

2.3 線性方程、檢出限、定量限

9 種藥物在0.5～20μg/L 范圍內線性關系良好，相關系數（R2）均大于0.99，以空白樣品添加濃度信噪比S/N≥3 確定方法檢出限（LOD），以S/N≥10 倍信噪比的添加濃度確定定量限（LOQ），LOD 為0.05～0.5μg/kg，LOQ 為0.1～1μg/kg。

2.4 回收率和精密度

在1、2、5μg/kg 添加濃度下對雞肉進行氟喹諾酮類及金剛烷胺類的加標回收和精密度實驗（n=6），其中試樣添加回收率在70%～115%之間，相對標準偏差為1.3%～12.2%。

3 結論

本文建立了LC-MS/MS 快速測定雞肉中8 種氟喹諾酮類藥物及金剛烷胺的方法。前處理過程簡單高效，通過內標法有效的補償基質效應帶來的影響。該方法檢出限、定量限完全滿足標準要求，精密度好，準確度高，適用于雞肉中氟喹諾酮類及金剛烷胺的檢測分析。