GP73和HSP90α在低濃度甲胎蛋白原發性肝癌診斷中的應用價值

丁華洋，王興宇，劉學謙，劉付寶

1 材料與方法

1.1 病例資料

選取2018年4月-2019年9月在本院進行診治的人員150例，血清AFP低濃度肝病(PHC組50例，肝硬化組30例，肝炎組30例)患者110例，其血清AFP濃度在1.1～108.0 μg/L；其余40例為同期在本院體檢的健康對照者，血清AFP為陰性，排除肝硬化、肝炎以及肝臟良惡性腫瘤等。PHC組，男35例，女15例，年齡34～82(59.44±11.15)歲。肝硬化組，男18例，女12例，年齡34～78(58.27±10.39)歲。肝炎組，男19例，女11例，年齡30～74(56.97±11.49)歲。健康對照組，男21例，女19例，年齡31～84(57.12±12.12)歲。4組研究對象在年齡、性別等一般臨床因素上的差異均無統計學意義，具有可比性。

1.2 研究方法

4組研究對象使用促凝管于清晨空腹抽取肘靜脈血3 ml，3 000 r/min離心10 min 分離血清，-80℃冰箱保存。GP73測定采用ELISA方法，試劑盒購自北京熱景生物技術有限公司；HSP90α測定采用ELISA方法，試劑盒購自煙臺普羅吉生物科技發展有限公司。

檢測4組血清GP73和HSP90α水平并比較其差異；分析單獨檢測GP73、HSP90α以及聯合檢測對AFP低濃度PHC患者診斷的靈敏度、特異度和準確度差異，探討其在AFP低濃度PHC診斷中的應用價值。

2 結果

2.1 各組血清GP73和HSP90α檢測結果比較

各組血清GP73表達水平比較，差異有統計學意義(

P

<0.01)，其中PHC組高于肝硬化組、肝炎組和健康對照組(

P

<0.01)，肝硬化組、肝炎組高于健康對照組(

P

<0.05)；各組血清HSP90α表達水平比較，差異有統計學意義(

P

<0.01)，其中PHC組高于肝硬化組、肝炎組和健康對照組(

P

<0.01)，肝硬化組高于健康對照組(

P

<0.01)，肝炎組與健康對照組比較，差異無統計學意義。見表1。

表1 各組血清GP73和HSP90α表達水平比較

2.2 血清GP73和HSP90α在PHC組中與淋巴結轉移、門脈侵犯和腫瘤大小之間的關系

PHC組患者有淋巴結轉移和門脈侵犯22例，無淋巴結轉移和門脈侵犯28例，比較兩組間血清GP73和HSP90α，差異有統計學意義(

P

<0.05)。 PHC組患者腫瘤大小≥5cm 有29例，腫瘤大小<5cm有21例，比較兩組間血清GP73和HSP90α，差異無統計學意義。見表2。

表2 血清GP73和HSP90α在PHC組中與淋巴結轉移、門脈侵犯和腫瘤大小之間的關系

2.3 通過ROC曲線分析血清GP73和HSP90α單獨檢測對PHC的診斷效果

繪制ROC曲線，分析血清GP73和HSP90α單獨用于診斷PHC的效果，并確定最佳臨界值。通過ROC曲線分析，血清GP73和HSP90α曲線下面積分別為0.873(95%

CI

：0.818～0.928)和0.965(95%

CI

：0.938 ～0.992)，

P

均<0.001。根據約登指數最大的原則，血清GP73和HSP90α用于鑒別診斷PHC的最佳臨界值分別是87.46、90.76 ng/ml。見圖1。

2.4 血清GP73和HSP90α單獨檢測和聯合檢測對PHC診斷的應用價值

PHC患者中，GP73陽性39例，陽性率78.0%；肝硬化患者中陽性13例，陽性率43.3%；肝炎患者中陽性7例，陽性率23.3%；健康對照組中陽性3例，陽性率7.5%。PHC患者中GP73陽性率高于肝硬化組、肝炎組和健康對照組，差異有統計學意義(χ=9.905、22.929、44.377，

圖1 PHC患者中GP73、HSP90α的ROC曲線

PHC患者中，HSP90α陽性42例，陽性率84.0%；肝硬化患者中陽性4例，陽性率13.3%；肝炎患者中陽性1例，陽性率3.3%；健康對照組中無陽性，陽性率0.0%。PHC患者中HSP90α陽性率高于肝硬化組、肝炎組和健康對照組，差異有統計學意義(χ=38.315、49.079、63.000，

P

=0.000)。而肝炎組的陽性率與健康對照組的差異無統計學意義(χ=1.353，

P

=0.245)。見表3。

表3 各組血清GP73和HSP90α陽性率的比較(%)

聯合檢測中，50例PHC患者中GP73陽性的患者有39例，HSP90α陽性的患者有42例，兩項指標均陽性的患者有34例，GP73陽性而HSP90α陰性的患者有5例，HSP90α陽性而GP73陰性的患者有8例，兩項指標均陰性的患者有3例。GP73和HSP90α平行試驗(GP73/ HSP90α)的靈敏度最高，達到94.0%；GP73和HSP90α系列試驗(GP73+ HSP90α)的特異度最高，達到96.0%。見表4。

3 討論

PHC的發生主要是慢性乙型、丙型肝炎病毒感染、受黃曲霉菌污染的食品、大量飲酒、肥胖、吸煙和2型糖尿病等危險因素作用的結果。我國是全球PHC發病率最高的國家，其進展快、惡性程度高、早期癥狀不明顯，發現時已是中晚期，預后差，故早期發現PHC具有重要意義。目前，AFP是臨床上應用最多的PHC血清腫瘤標志物，但其敏感度和特異度不高，對AFP低濃度PHC易漏診，使其臨床應用價值受限。GP73和HSP90α是兩種新型PHC血清腫瘤標志物。GP73是整合在高爾基體上的跨膜糖蛋白，僅在肝膽管上皮細胞中表達，而在肝細胞中表達水平極低。Zhou et al通過薈萃分析顯示，GP73在診斷PHC的靈敏度和特異度上可以與AFP相媲美，可作為一項獨立的血清腫瘤標志物。Shi et al通過對GP73蛋白、mRNA檢測分析發現，GP73診斷療效優于AFP。Zhang et al研究發現，AFP陰性PHC患者血清GP73表達水平有不同程度的升高，GP73可作為在AFP陰性PHC中的新型腫瘤標志物。HSP90α是一種具有多功能的分子伴侶，其廣泛參與細胞信號轉導、激素應答以及轉錄調控等生理活動，維持著細胞正常的生理功能，在腫瘤細胞中呈活躍狀態，在正常細胞中呈靜默狀態。研究表明，HSP90α可分泌到胞外，與HSP70等形成復合物，在肝癌細胞轉移、侵襲和微血管浸潤中起關鍵作用。Wang et al通過使用HSP90α抗體或其抑制劑可抑制HSP90α的過表達，對肝癌細胞的增殖和分裂起阻礙作用，為PHC的靶向治療提供理論基礎。

表4 血清GP73和HSP90α單獨檢測和聯合檢測對PHC診斷的應用價值

本文主要通過對50例AFP低濃度PHC患者的GP73和HSP90α的血清水平進行檢測分析，探討其在AFP低濃度PHC診斷中的應用價值。結果顯示，在AFP低濃度PHC患者中，血清GP73和HSP90α含量以及陽性檢出率顯著高于肝硬化、肝炎、健康對照者，差異有統計學意義(

P

均<0.01)。因此，可將GP73和HSP90α作為臨床診斷AFP低濃度PHC的有效腫瘤標志物。本研究顯示有淋巴結轉移和門脈侵犯的AFP低濃度PHC患者血清GP73和HSP90α含量高于無淋巴結轉移和門脈侵犯的PHC患者，差異有統計學意義(

P

<0.05)。因此，也可將GP73和HSP90α用于判斷PHC患者有無淋巴結轉移和門脈侵犯的依據。

本研究結果表明，GP73和HSP90α聯合檢測可提高對AFP低濃度PHC診斷的靈敏度和特異度。GP73或HSP90α(GP73/HSP90α)任一陽性診斷AFP低濃度PHC的靈敏度最高，達到94.0%，可作為排除PHC的指標。而GP73和HSP90α(GP73+HSP90α)同時陽性診斷AFP低濃度PHC的特異度最高，達到96.0%，聯合檢測可用于確診PHC。