馬來酸噻嗎洛爾膠漿劑制備及其體外透皮特性研究*

白瑞雪，接麗莉，楊躍輝

中國醫科大學附屬盛京醫院 藥學部，沈陽110004

嬰幼兒血管瘤是一種常見的良性腫瘤，發病率為5%，治療方式包括口服或局部應用β-受體阻斷劑、手術、激光等[1]。與口服β-受體阻斷劑相比，局部給藥副作用更小[2]。目前，β-受體阻斷劑局部給藥用于嬰幼兒血管瘤并沒有形成統一的治療方案，臨床中所用藥物的劑量、劑型各有不同。國外常用0.1%噻嗎洛爾凝膠、0.25%/0.5%噻嗎洛爾凝膠形成液、0.5%噻嗎洛爾滴眼液、1%普萘洛爾乳膏等[3]。在國內，常將噻嗎洛爾滴眼液敷于患處，使用不便，因此出現了凝膠劑、軟膏劑、貼劑等醫院制劑[4]；但仍有不足之處，如凝膠劑、軟膏劑易被衣物擦拭掉，固定的貼劑形狀尺寸不便于不規則病灶的給藥。本研究制備了馬來酸噻嗎洛爾（timolol maleate，TM）膠漿劑，其制備工藝簡單，涂于皮膚可自發形成一薄膜，為臨床提供了一種新的劑型。

1 儀器與材料

1.1 儀器與藥品、試劑

Agilent1260 高效液相色譜儀、G1314F 紫外檢測器（美國安捷倫科技公司）；TK-12B 型透皮擴散試驗儀（上海鍇凱科技貿易公司）；BP211D 電子天平（Sartorius）；FE28pH 計（梅特勒-托利多儀器上海公司）。

馬來酸噻嗎洛爾（TM，批號:170302，武漢欣欣佳麗生物科技公司，純度99.5%）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，型號：SJJ-M，安徽山河藥用輔料廠）；卡波姆940（批號：717F021）、甘油（批號：1024C0330）、三乙醇胺（批號：825A021）均購自北京索萊寶科技公司；丙二醇（批號：20190116，江西醫普生物藥業）；羥苯乙酯（批號：20180724，國藥集團化學試劑公司）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.2 實驗動物

KM 小鼠若干只，雄性，體重18～22 g，由沈陽藥科大學動物實驗中心提供，實驗動物使用許可證編號：SYXK（遼）2018-0009。

2 方法與結果

2.1 TM 膠漿劑的制備

精密稱取TM 原料藥（相當于噻嗎洛爾50 mg）溶于適量蒸餾水中，定容至10 mL，得TM 溶液。將處方量的CMC-Na 和保濕劑加入TM 溶液中，攪拌均勻，超聲使其充分溶解，除去氣泡，得TM 膠漿劑。

2.2 單因素試驗篩選處方

2.2.1 CMC-Na 用量的篩選按照“2.1”項下方法制備TM 膠漿劑，分別加入不同質量的CMC-Na（0.2、0.3、0.4 g），考察制劑的外觀性狀。結果表明，隨著CMC-Na 用量的增加，TM 膠漿劑的粘度增大，涂展性變差。當CMC-Na 用量為0.3 g 時，粘稠度適中、涂展性較好，方便涂抹給藥。

2.2.2 保濕劑品種的篩選在用量篩選預實驗中發現，不加入保濕劑的處方，雖然不影響制劑的外觀性狀，涂抹后也可形成薄膜；但是所成薄膜過于干燥，與皮膚的粘附性較差，易從給藥部位脫離。因此考慮加入保濕劑，保留適當水分，以增加制劑的粘附性。常用的保濕劑有丙二醇和甘油，故考察了這兩種化合物對制劑外觀性狀、涂抹后狀態的影響。實驗表明，加入丙二醇或甘油的膠漿劑均呈透明粘稠溶液，涂抹后均可形成一粘附性薄膜，因此保濕劑種類對制劑的外觀性狀和涂抹后狀態影響不大。權衡丙二醇既有保濕作用，又有促進滲透作用[4]，故選其作為保濕劑。

2.2.3 保濕劑用量的篩選制備膠漿劑時加入不同質量的丙二醇（0.5、1.0、1.5 g），以考察其用量對制劑外觀性狀的影響。實驗表明，所得制劑的涂展性、粘稠度均較好，因此丙二醇用量對制劑外觀性狀沒有顯著影響，故選擇丙二醇用量為0.5 g。

2.3 TM 膠漿劑的理化性質

2.3.1 性狀本品為無色、透明、均勻的粘稠液體，涂抹在皮膚上可在1 分鐘內自發形成一薄膜，且薄膜具有一定的粘附性。

2.3.2 酸堿度測定稱取TM 膠漿劑1.0mL，加10mL蒸餾水，超聲溶解，測定pH 值。結果顯示，TM 膠漿劑的pH 值為6.94，符合皮膚給藥的酸堿度要求。

2.3.3 含量測定取1 mL 膠漿劑，加入蒸餾水稀釋至100 mL，采用高效液相色譜法測定制劑中藥物含量，色譜條件參照課題組已建立的方法[4]，測得噻嗎洛爾含量為0.5%（g·mL-1）。

2.4 體外透皮實驗

2.4.1 色譜條件色譜柱：AccusiL C18（150 mm×4.6 mm，10 μm）；柱溫：30 ℃；流動相：甲醇-水-三乙胺(40∶60∶0.1)，磷酸調節pH 至5.0；檢測波長：295 nm；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：20 μL。

2.4.2 離體動物皮膚的制備將小鼠用乙醚麻醉，剃去腹部皮膚上的毛發，脫臼處死，取下腹部去毛皮膚，用鑷子去除皮下脂肪及黏性物，生理鹽水沖洗，濾紙吸干備用。使用前檢查皮膚應無破損。

2.4.3 TM 凝膠劑的制備為了評價TM 膠漿劑的透皮性能，選擇某凝膠劑作為對照。由于國內尚未批準其凝膠劑，未能購買到市售的凝膠劑，所以選擇了自制的凝膠劑[5]作比較。制備方法：將羥苯乙酯溶于丙二醇，加入蒸餾水、甘油，充分攪拌后加入0.1 g 卡波姆940，過夜溶脹。精密稱取TM 原料藥（相當50 mg 噻嗎洛爾）以蒸餾水溶解，倒入上述溶液內，攪拌，加入適量三乙醇胺，調節pH6.5～7.5，補加蒸餾水至10 g，充分攪拌，即得0.5%TM 凝膠劑。

2.4.4 透皮量的測定取“2.3.2”項下的完好離體鼠皮，置于立式擴散池的兩個半池之間，角質層朝向給藥池，真皮層朝向接收池，夾子固定。分別在角質層上涂抹膠漿劑0.5 mL、凝膠劑0.5 g，排除氣泡，在接收池中加入7.5 mL 生理鹽水。將擴散池置于（32.0±0.5）℃恒溫水浴中，不斷攪拌。分別于1、2、4、6、8、10、12、24 h 取樣，將接收池中液體全部取出，補充相同體積生理鹽水。樣品用0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續濾液，按“2.3.1”項色譜條件進樣，記錄色譜圖，按公式計算單位面積累積透過量（M，μg·cm-2）：

其中C'n為校正的濃度；Cn為n 時間點測定的藥物濃度；Ci為不同時間點的藥物濃度；V 為取樣體積；V'為接收池中接收液的總體積；A 為有效透過面積。

以單位面積累積透過量為縱坐標，時間為橫坐標，繪制藥物經皮透過曲線，結果見圖1。

圖1 TM 膠漿劑、凝膠劑的經皮透過曲線（n=6）

實驗表明，TM 凝膠劑與膠漿劑在小鼠皮膚上的累積透過性無顯著差別（P=0.359＞0.05）。

2.4.5 藥物濃度對透皮行為的影響目前，臨床上所用的噻嗎洛爾局部給藥制劑的藥物濃度尚未統一，濃度為0.1%～0.5%。所以本部分實驗想要探究藥物濃度是否影響藥物透皮行為，為日后制劑的藥物含量的確定提供理論依據。

制備了不同濃度的噻嗎洛爾膠漿劑，透皮實驗方法與“2.3.3”項下方法相似，結果見圖2。由此表明，藥物濃度越高，透皮量越大，不同濃度制劑間的透皮行為存在顯著差別（P＜0.05）。

圖2 不同藥物濃度TM 膠漿劑的經皮透過曲線（n=6）

2.5 統計學處理

以SPSS 19.0 軟件作重復測量設計方差分析，結果經Mauchly 球形檢驗，若P＞0.05，滿足球對稱假設，不作校正，若P≤0.05，則不滿足球對稱假設，需用ε校正系數校正自由度。P＜0.05 為差異有統計學意義。

3 討論

本研究制備的膠漿劑涂抹后成膜可滯留于給藥部位，制備工藝簡單，僅需把輔料充分溶解即可。與凝膠劑相比省去了過夜溶脹、調節pH 值等繁瑣步驟，而且兩者的體外透皮實驗結果并無統計學意義，是一種簡單易得、可替代凝膠劑的一種新劑型。

含有CMC-Na 的膠漿劑在局部應用后可形成一薄膜，可避免藥物被衣物蹭掉，一定程度上增加了嬰幼兒用藥的安全性。嬰幼兒血管瘤可在身體的不同部位出現，其大小、形狀也不確定，這種涂抹成膜的膠漿劑在應用時不受病灶形狀的限制，與貼劑相比，膠漿劑使用起來更加方便。與涂膜劑相比，本研究制備的膠漿劑雖然成膜速度不如涂膜劑（涂抹后幾秒內成膜，有機溶劑一般為乙醇），但是所用輔料安全性更高，更適合嬰幼兒的使用。

一般認為，閉塞的給藥狀態可增加皮膚水化，從而增強局部用藥的經皮吸收。因此，應用半透膜或不滲透膜（或材料）覆蓋給藥部位，將是一種提高β-受體阻滯劑皮膚滲透性的方法，可獲得更有效的藥物經皮遞送。Zhang Q 等[6]在進行β-受體阻斷劑凝膠透皮實驗時，將凝膠表面覆蓋一層薄膜，構建了一種閉塞的給藥條件，結果表明，普萘洛爾凝膠和倍他洛爾凝膠24 h 的透皮量增加了2～3 倍，噻嗎洛爾在閉塞狀態下與在非閉塞條件下的藥物透皮量沒有統計學差異，這可能與噻嗎洛爾在pH7.4 時的親水性有關。在本研究中，噻嗎洛爾膠漿劑的透皮量與自制的凝膠劑沒有顯著區別，可能也與其親水性相關。

臨床噻嗎洛爾常用的濃度為0.5%，但這是否為最佳給藥濃度并不清楚，且藥物濃度與臨床療效的關系沒有統一結論，甚至有正反相悖的研究結果[7，8]。本研究從體外透皮實驗的角度發現噻嗎洛爾藥物濃度確實會影響藥物透皮量，濃度越高，透皮量越大。也就是說，藥物濃度確實會影響透皮量；但是對于療效的影響還需深入研究，找出影響藥物療效的重要因素，從而盡可能地提高制劑的有效性。