p16/Ki67雙染在宮頸病變患者篩查中的價值

陳春燕，張仁超，王少曉

［1.深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院 病理科，廣東 深圳 518000；2.中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（光明）病理科，廣東 深圳518000］

宮頸癌是的常見婦科腫瘤之一，其發(fā)病與生 物學(xué)因素、行為因素及遺傳因素相關(guān)，是多種因素綜合產(chǎn)生的結(jié)果，近年來其發(fā)病率逐漸增加，全世界每年新發(fā)約50 萬例，死亡約20 萬例，給女性生命健康安全造成嚴重威脅［1］。宮頸薄層細胞學(xué)（TCT）和人乳頭瘤病毒（HPV）篩查是當前宮頸癌篩查的主要手段［2］。而HPV 檢測并不能區(qū)分一過性病毒感染和持續(xù)性病毒感染，細胞學(xué)檢測則受限于醫(yī)生的操作技術(shù)和本身的靈敏度，使得尋找更為相關(guān)的客觀指標，及早篩查宮頸病變患者，是當前重要的研究問題［3］。本研究中對80例宮頸病變患者的p16/Ki67 進行免疫染色檢測，探究p16/Ki67 染色在臨床病變篩查中的應(yīng)用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2017 年1 月至2020 年1 月在深圳市寶安區(qū)福永人民醫(yī)院進行篩查的宮頸病變患者80 例為研究對象。納入標準：①年齡34～62 歲；②經(jīng)子宮頸刮片細胞學(xué)檢測為意義不明的不典型鱗狀細胞（ASC-US）及以上；③通過宮頸活體組織檢查確定病變等級；④能夠配合研究且資料完整。排除標準：①存在盆腔放療史；②存在宮頸病史；③懷孕患者；④應(yīng)用免疫性藥物治療；⑤存在免疫系統(tǒng)疾病。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2 方法

以取樣刷采集宮頸脫落細胞，用消化液（清洗液∶冰醋酸為9∶1）處理洗去黏液和血液，4℃環(huán)境下保存。由操作經(jīng)驗豐富的醫(yī)師制備細胞涂片、制片并閱片，參照TBS 標準描述診斷結(jié)果［4］。細胞學(xué)檢測陽性（ASC-US 及以上）的患者采集子宮頸活體組織進行病理檢查，根據(jù)結(jié)果進行對癥處理。

使用APTIMA HPV Assay 試劑盒（美國豪洛捷）和PANTHER System 檢測系統(tǒng)（美國豪洛捷）對樣本中HPV E6 和E7 的表達進行檢測，操作步驟按照說明書進行。此方法僅可對定性檢測高危型HPV，不可區(qū)分病毒的確切類型。

使用p16/Ki67 檢測試劑盒（福州邁新）進行免疫組織化學(xué)染色，步驟嚴格按照說明書要求操作，由專業(yè)技術(shù)人員觀察染色結(jié)果并判斷。判斷標準為：同一細胞細胞核呈褐色或黃色且細胞質(zhì)呈紅色為陽性，同一細胞僅見一種顏色或未見顏色為陰性［5］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以百分率（%）表示，行χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸病變檢查結(jié)果

80 例研究對象中TCT 檢查為ASC-US 59 例，不能排除高度上皮內(nèi)病變的不典型鱗狀上皮（ASC-H）4 例，低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）14例，高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）3 例。p16/Ki67染色陽性共45 例，ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 分級患者中p16/Ki67 陽性比例分別為45.76%、75.00%、85.71% 和100.00%，隨著TCT分級增加，p16/Ki67 染色的陽性率增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；HPV 陽性共54 例，ASCUS、ASC-H、LSIL 和HSIL 分級患者中HPV 陽性比例分別 為 66.10%、50.00%、71.43% 和100.00%，不同TCT 分級患者的HPV 陽性率間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 p16/Ki67 染色和HPV 檢測在不同宮頸病變患者中的比較（例）

2.2 p16/Ki67 染色和HPV 檢測的敏感性和特異性

組織學(xué)檢查為金標準，80 例患者中診斷為LSIL 及以上病變者17 例，LSIL 以下病變者63 例。p16/Ki67 雙染診斷LSIL 及以上病變的敏感性為88.24%，特異性為52.38%；HPV 檢測LSIL 以下病變的敏感性為76.47%，特異性為34.92%。p16/Ki67染色和HPV 檢測的敏感性間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.366,P=0.545），特異性間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.904,P=0.048）。見表2。

表2 p16/Ki67 染色和HPV 檢測的敏感性和特異性（例）

3 討論

宮頸癌是威脅女性生命安全的第二大惡性腫瘤，在中低收入國家中其發(fā)病和死亡情況均僅次于乳腺癌，位居第2 位，進行有效篩查和預(yù)防是宮頸癌防治的重要措施［6］。進行宮頸癌篩查和接種HPV 疫苗是國際上推薦的防控方案，但HPV疫苗接種率仍處于較低水平，有效篩查仍是女性預(yù)防宮頸癌及宮頸病變的重要手段［7］。細胞學(xué)檢查、陰道鏡檢查和組織學(xué)檢查是宮頸病變診斷的主要步驟，TCT 是宮頸病變檢查的第一步，根據(jù)TBS 分類標準可將患者分為：正常范圍（NILM）、ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL，診斷為ASC-US及以上的患者為陽性，陽性患者進行陰道鏡檢查和組織學(xué)檢查，而細胞學(xué)檢查對技術(shù)人員操作有一定要求，且有漏檢的情況［8］。

美國陰道鏡和宮頸病例學(xué)會和美國病理醫(yī)師學(xué)會在2012 年發(fā)布的指南中提出，分子生物學(xué)標志物Ki67 和p16 可用于宮頸癌前上皮細胞病變的輔助診斷［9］。p16 能夠通過抑制細胞周期依賴性蛋白激酶的活性抑制增殖，HPV 整合感染可導(dǎo)致p16 蛋白表達上調(diào)，Ki67 表達在細胞的有絲分裂期，是細胞增殖的有效標記［10-11］。本研究中所有研究對象均為TCT 檢查陽性患者，其中ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 患者所占比例分別為73.75%、5.00%、17.50%和3.75%，p16/Ki67 染色陽性在不同分級的患者中陽性率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，病變越嚴重，陽性率越高，與宮頸病變的發(fā)展導(dǎo)致細胞迅速增殖有關(guān)。

HPV 感染是宮頸病變的風險因素，持續(xù)的病毒感染可能伴隨HPV DNA 整合至宿主細胞基因組中，導(dǎo)致E6 和E7 蛋白過表達，下調(diào)抑癌基因LRP1B 和FHIT 的表達，上調(diào)癌基因HMGA2 和MYC 的表達，引發(fā)宮頸上皮細胞癌變［12］。本研究中HPV 檢測陽性在ASC-US、ASC-H、LSIL 和HSIL 患者所占比例分別為66.10%、50.00%、71.43% 和100.00%，陽性率有升高的趨勢，朱梅娟［13］對260 例行組織學(xué)檢查的患者分析，結(jié)果顯示患者病變越嚴重，HPV 檢測陽性率越高，與本研究結(jié)果一致，提示對女性群體進行HPV 感染的檢測能夠輔助診斷宮頸病變，有利于對HPV 陽性患者及早干預(yù)。

官燕飛等［14］對p16/Ki67 雙染和HPV 檢測對低級別鱗狀上皮內(nèi)病變分流診斷的價值進行分析，結(jié)果顯示p16/Ki67 染色、HPV 檢測和聯(lián)合檢測均顯示出良好的診斷效率，在患者分流管理中有積極的臨床意義。有報道顯示p16/ki67 染色可降低陰道鏡轉(zhuǎn)診率，本研究中p16/Ki67 染色用于診斷的敏感性為88.24%，與HPV 檢測的敏感性無顯著性差異，p16/Ki67 染色用于診斷的特異性為52.38%，顯著高于HPV 檢測的特異性。和細胞學(xué)檢查及HPV 檢測比較起來，p16/Ki67 染色無創(chuàng)高效，操作簡單，便于掌握，且價格經(jīng)濟，更適合推廣至醫(yī)療設(shè)施和經(jīng)濟發(fā)展不夠發(fā)達的農(nóng)村地區(qū)，重要的臨床意義。

綜上所述，p16/Ki67 染色陽性與患者的病變分級相關(guān)，在對宮頸癌病變的診斷中顯示出良好的敏感性和特異性，可用于宮頸癌篩查的輔助診斷，有重要的參考價值。