酶聯免疫吸附試驗與化學發光法在抗磷脂綜合征患者檢測中的應用價值

李賓堂，徐國超

(1.延津縣人民醫院 醫學檢驗科，河南 新鄉 453200；2.新鄉市中心醫院 檢驗科，河南 新鄉 453000)

抗磷脂綜合征(antiphospholipid syndrome，APS)屬于異質性自身免疫性疾病，主要表現為反復發生靜脈血栓、動脈血栓及妊娠期并發癥等，其血清中抗磷脂抗體(antiphospholipid antibodies，aPLs)表現為持續陽性[1-2]。aPLs為磷脂、磷脂結合蛋白為靶抗原的自身抗體，根據APS分類標準，APS患者至少需要存在狼瘡抗凝物、抗心磷脂抗體(anti-cardiolipin antibody，aCL)、抗β2糖蛋白Ⅰ抗體(anti-β2-glycoprotein Ⅰ antibody，aβ2GPⅠ)中的一種呈陽性，其中aCL、aβ2GPⅠ屬于疑似APS患者非標準抗體指標[3]。當前臨床多通過采用酶聯免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測aCL、aβ2GPⅠ，但其耗時較長、操作繁瑣、標準化程度差等，導致臨床應用受限。近年來隨著自動化技術的成熟，多種自動化檢查方式逐漸被應用于臨床檢測中，如化學發光法(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，其通過磁性顆粒獲取樣本中的抗體，經處理后加入抗體示蹤劑，經全自動生化分析儀處理獲取抗體濃度[4]。本研究旨在探討CLIA在APS患者檢測中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年1月至2020年12月延津縣人民醫院收治的68例APS患者為觀察組，再選取同期延津縣人民醫院73名健康體檢者為對照組。本研究經醫院醫學倫理委員會審核通過。研究對象均簽署知情同意書。對照組：女42例，男31例；年齡27～59歲，平均(43.08±5.54)歲；體質量指數18.7～26.8 kg·m-2，平均(22.53±1.48)kg·m-2。觀察組：女39例，男29例；年齡28～57歲，平均(42.63±5.36)歲；體質量指數18.6～26.9 kg·m-2，平均(22.63±1.51)kg·m-2。兩組性別、年齡、體質量指數比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 選取標準(1)納入標準：①觀察組患者符合《抗磷脂抗體檢測的臨床應用專家共識》[5]診斷標準；②對照組體健。(2)排除標準：①合并重要器官功能障礙；②伴惡性腫瘤；③精神異常、認知障礙等無法配合研究；④伴其他免疫系統疾病。

1.3 檢測方法采集所有入選者晨起空腹靜脈血約3 mL，離心(轉速3 000 r·min-1，時間10 min，半徑8 cm)，分離血清，取上清液，置于-20 ℃冰箱內保存待測。分別采用ELISA、CLIA檢測aCL和aβ2GPⅠ的免疫球蛋白A(immunoglobulin A，IgA)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M，IgM)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)。試劑盒均購自上海酶聯生物科技有限公司。所有操作均由高年資檢驗科醫生嚴格按照試劑盒及儀器說明書進行。

1.4 陽性評估標準ELISA檢查：aCL IgA≥12 U·mL-1或aCL IgG≥12 U·mL-1或aCL IgM≥12 U·mL-1即為陽性，aβ2GPⅠ IgA≥20 RU·mL-1或aβ2GPⅠ IgG≥20 RU·mL-1或aβ2GPⅠ IgM≥20 RU·mL-1即為陽性，任意一項為陽性即為陽性。CLIA檢查：aCL IgA≥10 U·mL-1或aCL IgG≥10 U·mL-1或aCL IgM≥10 U·mL-1即為陽性，aβ2GPⅠ IgA≥20 RU·mL-1或aβ2GPⅠ IgG≥20 RU·mL-1或aβ2GPⅠ IgM≥20 RU·mL-1即為陽性，任意一項為陽性即為陽性。

2 結果

2.1 ELISA檢測血清aCL和aβ2GPⅠ的IgA、IgG、IgM水平觀察組血清aCL和aβ2GPⅠ的IgA、IgG、IgM水平均高于對照組(P<0.05)。見表1。

2.2 CLIA檢測血清aCL和aβ2GPⅠ的IgA、IgG、IgM水平觀察組血清aCL和aβ2GPⅠ的IgA、IgG、IgM水平均高于對照組(P<0.05)。見表2。

表1 ELISA檢測兩組血清aCL和aβ2GPⅠ的IgA、IgG、IgM水平比較

表2 CLIA檢測兩組血清aCL和aβ2GPⅠ的IgA、IgG、IgM水平比較

2.3 ELISA、CLIA的檢測結果經ELISA檢出64例陽性、77例陰性，經CLIA檢出70例陽性、71例陰性。見表3。

2.4 ELISA、CLIA對APS的診斷效能CLIA診斷APS的靈敏度、準確度高于ELISA，漏診率低于ELISA(P<0.05)；CLIA診斷APS的特異度、誤診率與ELISA比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表3 ELISA、CLIA的檢測結果(n)

表4 ELISA、CLIA對APS的診斷效能比較(%)

3 討論

APS缺乏特異性癥狀，早期診斷較困難，而明確診斷APS又是治療的前提，故采用準確的方式對aCL、aβ2GPⅠ等實驗室指標進行檢測十分重要[6]。

aCL屬于aPLs的一種，其與APS的關系比較密切，為診斷APS和評估病情程度的重要指標，可分為IgA、IgG、IgM共3個亞型，其中IgG與APS的關系更密切[7]。aβ2GPⅠ由肝細胞合成，為單鏈血漿糖蛋白，高滴度aβ2GPⅠ與APS患者的血栓形成、習慣性流產密切相關。aβ2GPⅠ不僅為診斷APS的輔助性指標，還是該病的自身靶抗原。研究證實aβ2GPⅠ相較于aCL具有較高的特異性，故通過檢測aβ2GPⅠ水平有助于提高APS的準確度[8]。ELISA、CLIA均為檢測aCL、aβ2GPⅠ水平的方式，但臨床對于何種檢查方式的效率更高仍存在一定爭議。本研究結果顯示，ELISA、CLIA檢測觀察組的血清aCL和aβ2GPⅠ的IgA、IgG、IgM水平均高于對照組。進一步研究發現，CLIA診斷APS的靈敏度、準確度高于ELISA，漏診率低于ELISA，特異度、誤診率與ELISA比較無明顯差異。這表明采用CLIA診斷APS可提高靈敏度、準確度，降低漏診率。CLIA操作簡單，自動化程度高，可為診斷提供可靠的依據，有助于指導臨床治療。CLIA為全自動化技術，檢查時間約為30 min，檢查時間短，可減少操作者手工處理，避免了操作人員技術問題造成的檢測偏差，同時自動化操作還能減少實驗室內和室間的變異性，增加結果重復性，故具有較高的診斷價值[9]。

綜上所述，CLIA和ELISA均可對APS患者進行診斷，但采用CLIA可提高診斷靈敏度、準確度，降低漏診率，為臨床治療提供可靠依據。