依托泊苷納米混合膠束的制備及其理化性質(zhì)

張欣欣 許潔 蔣巖 趙麗艷 張萬明

摘 要：為提高依托泊苷制劑的水溶性和穩(wěn)定性，采用星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化依托泊苷納米混合膠束（ETP mPEG-PLA/P123）的處方工藝。在單因素試驗基礎(chǔ)上，以投藥量、mPEG-PLA所占質(zhì)量比和水化體積為自變量，以依托泊苷包封率、載藥量以及粒徑為因變量，進行3因素5水平的星點設(shè)計-效應(yīng)面法實驗，采用熒光探針法測定臨界膠束濃度（CMC），并對所制備的膠束制劑進行理化性質(zhì)和釋放行為的評估。結(jié)果表明，ETP mPEG-PLA/P123膠束制劑的最優(yōu)處方工藝如下：mPEG-PLA與P123質(zhì)量比為38∶62，投藥量為5 mg，水化體積為6 mL;采用最優(yōu)處方制得的混合膠束的包封率為87.4%，載藥量為4.19%，粒徑為115.6 nm，PDI為0.216，Zeta電位為-16.3 mV;熒光探針法測定的CMC值為1.7×10-3 g/L，mPEG-PLA/P123膠束穩(wěn)定性良好;體外釋放實驗中，依托泊苷可從膠束中緩慢而持續(xù)地釋放，在48 h內(nèi)釋放量可達80%。采用優(yōu)化處方制得的ETP mPEG-PLA/P123納米混合膠束，能顯著增加依托泊苷的溶解度，膠束制劑穩(wěn)定性好，且有一定的緩釋作用，可為進一步拓寬依托泊苷新型制劑的應(yīng)用范圍提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：藥劑學(xué);依托泊苷;P123;膠束;UPLC;薄膜水化法;星點設(shè)計-效應(yīng)面法

中圖分類號：TQ460.7;R961?? 文獻標(biāo)識碼：A

doi：10.7535/hbkd.2021yx04009

收稿日期：2021-04-13;修回日期：2021-05-09;責(zé)任編輯：張士瑩

基金項目：國家自然科學(xué)基金（81274005）;河北省教育廳高校基本科研業(yè)務(wù)費（JYT2020002）;河北省衛(wèi)生健康委科研基金（20180812）

第一作者簡介：張欣欣（1994—），女，河北石家莊人，碩士研究生，主要從事藥物分析、藥劑學(xué)方面的研究。

通訊作者：張萬明教授。E-mail： 429269523@qq.com

張欣欣，許潔，蔣巖，等.依托泊苷納米混合膠束的制備及其理化性質(zhì)[J].河北科技大學(xué)學(xué)報，2021，42（4）：389-399.ZHANG Xinxin， XU Jie， JIANG Yan， et al.Preparation and evaluation of physicochemical properties of etoposide nano-mixed micelles[J].Journal of Hebei University of Science and Technology，2021，42（4）：389-399.

Preparation and evaluation of physicochemical properties of etoposide nano-mixed micelles

ZHANG Xinxin1，XU Jie1，JIANG Yan1，ZHAO Liyan1，2，ZHANG Wanming1，2

（1.School of Pharmacy，Hebei North University，Zhangjiakou，Hebei 075000，China;2.Hebei Key Laboratory of Neuropharmacology，Zhangjiakou，Hebei 075000，China）

Abstract：In order to enhance the aqueous solubility and stability of etoposide preparation，the central composite design-response surface method was used to optimize the prescription technology of etoposide nano-mixed micelles （ETP mPEG-PLA/P123）.Based on the results of single factor test，central composite design-response surface method of three factors and five levels was carried out to optimize the prescription technology with drug dosage，the mass ratio of mPEG-PLA and hydration volume as independent variables，and the entrapment efficiency，drug loading and particle size as dependent variables.The critical micelle concentration （CMC） was determined by fluorescence probe method，and the physicochemical properties and release behavior of the prepared micelle preparations were evaluated.The results showed that the optimal prescription of ETP mPEG-PLA/P123 micelle preparation was that mPEG-PLA∶P123=38∶62，the drug dosage was 5 mg，and the hydration volume was 6 mL.After optimization，the? entrapment efficiency and drug loading were 87.4% and 4.19%，the particle size was 115.6 nm，PDI was 0.216，and Zeta potential was -16.3 mV.The CMC value was 1.7×10-3 g/L，so mPEG-PLA/P123 micelles had high stability.In vitro release experiments，etoposide could be released from micelles slowly and continuously，up to 80% within 48 h.The optimized ETP mPEG-PLA/P123 nano-mixed micelles were able to enormously improve the aqueous solubility of etoposide，and the micelle preparation had good stability and a certain slow-release effect.The results of this study could provide theoretical guidance for further broadening the range of application of new etoposide preparations.

Keywords：

pharmaceutics;etoposide;P123;micelles;UPLC;thin film hydration method;central composite design-response surface method

鬼臼毒素是從小蘗科鬼臼屬植物華鬼臼的根和莖中提取的木脂類抗腫瘤成分。由鬼臼毒素結(jié)構(gòu)改造而得的衍生物依托泊苷（etoposide，ETP）作為一種臨床常用化療藥物，對于肺癌、白血病、淋巴瘤、睪丸腫瘤、神經(jīng)母細胞瘤等多種惡性腫瘤均有治療作用[1]。研究發(fā)現(xiàn)，依托泊苷能與拓撲異構(gòu)酶Ⅱ結(jié)合，形成牢固的藥-酶-DNA復(fù)合物，阻礙TopoⅡ?qū)NA的修復(fù)[2-3]。然而，依托泊苷在臨床應(yīng)用中存在水溶性差（153 mg/L）、易代謝失活、生物利用度低以及劑量限制性血液毒性等問題[4-5]。此外，市售的依托泊苷注射液中添加的輔料如無水乙醇、苯乙醇、聚山梨酯80等，也可能引發(fā)機體的超敏反應(yīng)[6]。因此，構(gòu)建依托泊苷新型給藥系統(tǒng)，對增加依托泊苷的溶解性、提高其生物利用度和靶向緩釋特性具有重要意義。

膠束制劑可以改變活性物質(zhì)原有的藥代動力學(xué)和生物分布，在提高藥效、降低藥物毒性方面具有獨特優(yōu)勢[7-11]。近年來，國內(nèi)外科研人員在對依托泊苷的研究中發(fā)現(xiàn)其膠束制劑的抗腫瘤作用明顯優(yōu)于依托泊苷注射液，但對膠束本身的穩(wěn)定性和載藥量仍有待深入研究。本研究以普郎尼克P123和甲氧基聚乙二醇-聚乳酸（mPEG-PLA）共同作為載體材料制備負載ETP的混合膠束制劑。普朗尼克P123是由親水性的聚氧乙烯嵌段和疏水性的聚氧丙烯嵌段構(gòu)成的兩親性共聚物，具有安全、易降解、無免疫原性、良好生物相容性[12]、免于被肝臟和腎臟清除和高載藥[13]性能等優(yōu)點。甲氧基聚乙二醇-聚乳酸中的聚乙二醇能提供膠束微粒間的空間位阻[14]，提高納米載藥體系的穩(wěn)定性。聚乳酸（PLA）因水分子間的排斥作用，促使疏水鏈間相互吸引而締合，為脂溶性藥物提供疏水內(nèi)腔，提高膠束的載藥量和穩(wěn)定性。

本研究采用薄膜水化法制備依托泊苷納米混合膠束，通過單因素考察與星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化處方，建立mPEG-PLA/P123比例、投藥量和水化體積3個因素對膠束包封率、載藥量和粒徑的函數(shù)關(guān)系，并對制備的新型膠束制劑進行粒徑、電位、臨界膠束濃度等理化性質(zhì)的評估，以及差示掃描量熱分析和釋放行為考察，為進一步研究依托泊苷新型制劑的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 主要儀器

ACQUITY UPLC色譜儀，PDA檢測器，Empower3.0化學(xué)工作站（美國Waters公司提供）;Standby sartorius ME/SE系列微量電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司提供）;HJ-4D數(shù)顯恒溫測速磁力加熱攪拌器（金壇市友聯(lián)儀器研究所提供）;GAOKE旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市英峪高科儀器廠提供）;SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司提供）;DZF-6020型真空干燥箱（寧波市江南儀器廠提供）;JPCQ1028型數(shù)控超聲波清洗機（武漢嘉鵬電子科技有限公司提供）;SHA-B水浴恒溫振蕩器（國旺儀器公司提供）;Milli-Q純水系統(tǒng)（美國Millipore公司提供）;Lab Tech UV2100紫外-可見分光光度儀（北京萊伯泰科有限公司提供）;HH-S6數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市金南儀器制造有限公司提供）;ZETASIZER Nano series納米粒度電位儀（英國馬爾文儀器有限公司提供）;HITACHI F-700熒光光譜儀（日立公司提供）;ZNCL-TS加熱套（鞏義市英裕儀器公司提供）;RC8CD溶出儀，RZQ-8D取樣收集系統(tǒng)（天大天發(fā)公司提供）;DSC1差示掃描量熱儀（瑞士梅特勒托利多公司提供）。

1.2 試藥

依托泊苷（批號為EC220094，質(zhì)量分數(shù)為98%），安耐吉化學(xué)試劑有限公司提供;P123（批號為MKBQ0305V），Sigma公司提供;甲氧基聚乙二醇-聚乳酸（濟南岱罡生物科技有限公司提供）;乙腈，色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠提供;甲醇、丙酮、無水乙醇，均為分析純;水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 ETP mPEG-PLA/P123的制備

采用薄膜水化法制備負載依托泊苷的mPEG-PLA/P123共聚物膠束。將一定量的mPEG-PLA，P123和ETP溶解于適量甲醇中，攪拌至溶解（1 000 r/min，15 min）。使用旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器至甲醇完全蒸發(fā)并形成干燥藥膜，之后真空干燥過夜以除去殘留的有機溶劑。再加入適量超純水，超聲處理，于50 ℃恒溫振蕩1 h后，通過0.45 μm濾膜過濾，除去未包封的藥物和共聚物的聚集體，得到ETP膠束制劑。

2.2 色譜條件

Waters BEH C18 色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），檢測波長為284 nm（ETP），流動相為乙腈/水（二者體積比為50∶50），體積流量為0.3 mL/min，柱溫為35 ℃，進樣量為1 μL。

2.2.1 專屬性試驗

以“2.2”項下色譜條件分別對mPEG-PLA/P123空白膠束溶液和ETP mPEG-PLA/P123載藥膠束溶液進樣。結(jié)果如圖1所示，在284 nm波長下，輔料對依托泊苷的含量測定無干擾。

2.2.2 線性關(guān)系考察

精密稱取10 mg依托泊苷，放入10 mL容量瓶中，乙腈定容，制得質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL的依托泊苷儲備液。將質(zhì)量濃度依次稀釋至80，40，20，10，5 μg/mL，進樣。以樣品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得到線性回歸方程為y=2.029 9x+2.109，R2=0.999 9。在5～80 μg/mL范圍內(nèi)，依托泊苷的線性關(guān)系良好。

2.3 ETP載藥量和包封率的測定

精密吸取0.2 mL ETP mPEG-PLA/P123膠束溶液，放入10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即為所得供試品溶液。按“2.2”項下色譜條件進樣，將所得峰面積帶入線性方程，根據(jù)稀釋倍數(shù)計算ETP mPEG-PLA/P123膠束溶液中ETP的含量。

ETP載藥量=膠束中ETP含量/（膠束中ETP含量+載體材料總量）×100%，

ETP包封率=膠束中ETP含量/ETP的投藥量×100%。

2.4 單因素考察

2.4.1 投藥量

固定載體材料mPEG-PLA和P123各50 mg，有機溶劑為甲醇，水化體積4 mL，其他條件與2.1項下一致，考察投藥量為2，4，6，8，10 mg時對膠束包封率、載藥量和粒徑的影響，結(jié)果見表1。

由表1可知，隨著投藥量的增加，包封率和粒徑均呈下降趨勢，載藥量則先升高后降低。故對投藥量項進行后續(xù)星點設(shè)計-效應(yīng)面法分析。

2.4.2 mPEG-PLA所占質(zhì)量比

固定載體材料（mPEG-PLA與 P123）總量為100 mg，投藥量為4 mg，其他條件不變，考察mPEG-PLA占載體材料總量為0.2，0.3，0.5，0.7和0.8時，對膠束包封率、載藥量和粒徑的影響，結(jié)果見表2。

由表2可知，隨著mPEG-PLA占比的增加，包封率和載藥量先降再升，而粒徑呈現(xiàn)先升后降的趨勢。因此，將mPEG-PLA與P123的比例作為后續(xù)處方優(yōu)化考察因素之一。

2.4.3 有機溶劑種類

固定載體材料m（mPEG-PLA）∶m（P123）=3∶7 （30 mg∶70 mg），投藥量為4 mg，其他條件不變，考察有機溶劑分別為甲醇、乙腈和丙酮時對膠束包封率、載藥量和粒徑的影響，結(jié)果見表3。

由表3可知，有機溶劑的改變，對包封率、載藥量和粒徑均無顯著影響。由于丙酮揮發(fā)性和毒性較強，乙腈沸點較高，故本實驗選取甲醇作為有機溶劑。

2.4.4 超聲時間

固定載體材料m（mPEG-PLA）∶m（P123）=3∶7 （30 mg∶70 mg），投藥量為4 mg，有機溶劑為甲醇，其他條件不變，考察超聲時間為5，10，20，30，60 min時，對膠束包封率、載藥量和粒徑的影響，結(jié)果見表4。

由表4可知，隨著超聲時間的增加，僅粒徑略有下降，當(dāng)超聲時間達到10 min后，粒徑基本不變。故選取10 min為本實驗的超聲時間。

2.4.5 水化體積

固定載體材料m（mPEG-PLA）∶m（P123）=3∶7 （30 mg∶70 mg），投藥量為4 mg，有機溶劑為甲醇，超聲時間為10 min，其他條件不變，考察水化體積為2，4，6，8，10 mL時，對膠束包封率、載藥量和粒徑的影響，結(jié)果見表5。

由表5可知，隨著水化體積的增加，會導(dǎo)致膠束粒徑減小，而包封率和載藥量則呈先升后降的趨勢。因此，將水化體積作為后續(xù)處方優(yōu)化考察因素之一。

2.5 星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化處方

在單因素考察基礎(chǔ)上，通過星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化ETP mPEG-PLA/P123膠束。以投藥量（X1）、mPEG-PLA占比（X2）和水化體積（X3）作為3個自變量，建立對依托泊苷納米膠束包封率（Y1）、載藥量（Y2）和粒徑（Y3）的函數(shù)關(guān)系。利用Design Expert 10 （32-bit） 軟件進行3因素5水平的CCD中心組合實驗設(shè)計，各因素的取值范圍如下：投藥量2～10 mg，mPEG-PLA占比0.3～0.7，水相體積2～10 mL。各水平取值見表6，實驗安排及結(jié)果見表7。

根據(jù)Design Expert 10 （32-bit） 軟件對各因素及指標(biāo)進行多元線性及二項式擬合，確定最優(yōu)處方參數(shù)。統(tǒng)計結(jié)果顯示，二次多項式回歸模型是描述各因素與指標(biāo)關(guān)系的最佳模型，數(shù)學(xué)模型如下：

Y1=71.78-22.98X1-2.98X2+0.39X3+0.25X1X2+2.70X1X3-

0.90X2X3-4.78X21+2.43X22-3.88X23（r2=0.980 0，P<0.01）;

Y2=4.13+0.11X1-0.16X2+0.06X3-0.05X1X2+0.16X1X3-

0.03X2X3-0.73X21+0.10X22-0.24X23（r2=0.969 3，P<0.01）;

Y3=116.80-7.01X1+2.07X2+3.04X3+0.77X1X2-0.45X1X3-

0.45X2X3+2.17X21-0.41X22+0.21X23（r2= 0.884 2，P<0.01）。

方差分析見表8—表10。

由表8—表10可知，各模型P<0.000 1，表明以上二次多項式方程的顯著性極高，也顯示了獨立變量X1，X2和X3對因變量Y1，Y2和Y3 的影響;失擬項均大于0.05，說明各回歸方程與其實驗結(jié)果擬合度良好，使用二項式數(shù)學(xué)模型預(yù)測的實驗數(shù)據(jù)結(jié)果可取。

根據(jù)二項式擬合方程繪制因素對各指標(biāo)影響趨勢的三維效應(yīng)面與等高線圖，描述各獨立變量（投藥量、mPEG-PLA占比、水化體積）對因變量（包封率、載藥量和粒徑）響應(yīng)的影響，結(jié)果如圖2所示。

2.6 最優(yōu)處方的驗證試驗

為獲得最大的包封率、載藥量及最小粒徑，使用Design-Expert軟件評估了獨立變量對響應(yīng)影響的顯著性，使用響應(yīng)面圖確定了制備膠束的最佳條件。最優(yōu)處方：m（mPEG-PLA）∶m（P123）=38∶62，投藥量為5 mg，水化體積為6 mL。預(yù)測此條件下膠束的包封率為86.05%，載藥量為4.21%，粒徑為118.05 nm。根據(jù)最佳條件將預(yù)測值與最新制備的3批ETP mPEG-PLA/P123膠束的實驗值進行比較，以證明該模型的適用性，結(jié)果見表11。

由表11可知，該膠束實際的平均包封率為87.4%，平均載藥量為4.19%，粒徑為116.6 nm，該方法的實驗值與預(yù)測值的絕對值均小于5%。結(jié)果表明，該數(shù)學(xué)模型預(yù)測的實驗數(shù)據(jù)結(jié)果可取。

3 ETP mPEG-PLA/P123混合膠束制劑理化性質(zhì)

3.1 膠束粒徑及Zeta電位

利用Zetasizer粒度儀測定ETP mPEG-PLA/P123膠束的粒徑和Zeta電位。將2.1項下膠束溶液用超純水適當(dāng)稀釋，濾膜過濾，測定其電位和粒徑（d），結(jié)果見圖3和圖4。

由圖3和圖4可知，ETP mPEG-PLA/P123膠束粒徑分布均一，平均粒徑為115.6 nm，PDI為0.216，Zeta電位為-16.3 mV。

3.2 臨界膠束濃度

在室溫下，使用芘作為熒光探針，通過熒光分光光度計，測定mPEG-PLA/P123混合膠束的臨界膠束濃度（CMC）。 將適量芘溶解在丙酮中，然后分別加入到9個10 mL容量瓶中，并在氮氣下蒸發(fā)丙酮。將以超純水稀釋的質(zhì)量濃度分別為6.4×10，3.2×102，1.6×103，8×103，4×104，2×105，1×106，5×106，2.5×107 μg/mL的空白膠束溶液加入上述容量瓶中，稀釋至刻度，

使混合膠束溶液中芘的最終濃度保持在5×10-7 mol/L。將所得溶液于45 ℃恒溫振蕩2 h，冷卻到室溫過夜平衡。采用熒光分光光度計測定各濃度溶液中芘的熒光激發(fā)光譜，發(fā)射波長為390 nm，激發(fā)波長的范圍為300～360 nm，發(fā)射波長和激發(fā)波長的狹縫寬度均為5 nm，記錄337.2 nm和334.8 nm處的熒光強度I337.2和I334.8。以I337.2和I334.8的強度比與聚合物濃度（c）的對數(shù)作圖，CMC值為拐點處曲線的切線與低濃度點上水平切線的交點，結(jié)果見圖5。由圖5可知，mPEG-PLA/P123空白膠束的CMC為2.5×10-3 g/L，該臨界膠束質(zhì)量濃度與mPEG-PLA（1.7×10-3 g/L）相近，低于P123（CMC為5×10-2 g/L）。因此，在體內(nèi)稀釋條件下，mPEG-PLA/P123混合膠束具有更高的穩(wěn)定性和保證膠束完整性的能力。

3.3 熱性能

采用差示掃描量熱儀測定天然依托泊苷、mPEG-PLA/P123空白膠束、依托泊苷和mPEG-PLA/P123的物理混合物以及ETP mPEG-PLA/P123載藥膠束的熱性能，以空標(biāo)準鋁坩堝為空白對照。溫度掃描設(shè)定為40～200 ℃，速度為20 ℃/min，結(jié)果見圖6。

圖6中，a—d分別為天然依托泊苷、mPEG-PLA/P123空白膠束、ETP mPEG-PLA/P123載藥膠束以及依托泊苷和mPEG-PLA/P123的物理混合物的熱分析圖。

由圖6可知，天然依托泊苷在189 ℃時出現(xiàn)放熱峰，此為依托泊苷的特征峰;在空白膠束中，58 ℃處出現(xiàn)一個放熱峰，當(dāng)其與依托泊苷物理混合后，在58 ℃和185 ℃處出現(xiàn)兩者的疊加峰，說明依托泊苷以晶體形式存在;在載藥膠束中，未發(fā)現(xiàn)依托泊苷的特征峰，表明膠束內(nèi)部的依托泊苷可能處于分散的無定形或無序結(jié)晶相形式。

3.4 體外釋放行為

采用動態(tài)透析袋法研究依托泊苷在不同制劑中的體外釋放行為。將依托泊苷注射液、依托泊苷原料藥溶液以及負載依托泊苷的膠束溶液置于透析袋（截留Mw=3 500）中，然后放入200 mL釋放介質(zhì)（含有0.5%十二烷基硫酸鈉的磷酸鹽緩沖溶液）中，恒溫保持在（37±0.5）℃，并以100 r/min攪拌。分別于1，3，5，7，9，12，24，36，48 h時收集樣品2 mL ，并以同等體積空白釋放介質(zhì)替換，最后通過UPLC測定釋放的ETP濃度，計算累計釋放率。釋放曲線如圖7所示。

由圖7可以看出，在1～5 h內(nèi)，依托泊苷注射液和原料藥溶液釋放速率較快，在7 h已達到釋放末期，累計釋放率均在80%以上;與之相比，依托泊苷膠束溶液釋放緩慢，此時釋放率僅為30%左右;當(dāng)釋放時間為48 h時，膠束制劑中依托泊苷的最大釋放率達到82%，因此ETP mPEG-PLA/P123膠束制劑符合緩釋制劑的特點。

4 結(jié) 論

1）臨界膠束濃度（CMC）是衡量兩親性聚合物膠束性能的主要指標(biāo)之一，反映了膠束制劑的稀釋穩(wěn)定性。CMC值越小，形成膠束的聚合物所需濃度越低，膠束的結(jié)構(gòu)也更穩(wěn)定。一般而言，與混合膠束相比，單一聚合物形成的膠束受其鏈段限制，常出現(xiàn)載藥量較低和穩(wěn)定性較差等問題。本實驗成功制備了以P123和mPEG-PLA為載體的依托泊苷納米混合膠束。普朗尼克P123是一種結(jié)構(gòu)簡單、安全性高的多功能藥用輔料，以P123自組裝形成的膠束，具有較高的包封率和載藥量[15]，但其穩(wěn)定性較差，且隨保存時間的延長，粒徑變大、PDI增加。而mPEG-PLA的加入顯著增強了該膠束的穩(wěn)定性[16]。實驗結(jié)果表明，該混合膠束的臨界膠束質(zhì)量濃度（2.5×10-3 g/L）與mPEG-PLA（1.7×10-3 g/L）相近，低于P123（CMC為5×10-2 g/L），表明與P123相比，mPEG-PLA/P123混合膠束具有更高的自身穩(wěn)定性、完整性和抗稀釋能力。

2）載藥膠束制劑的釋放采用動態(tài)透析袋法。為滿足漏槽條件，選擇磷酸鹽緩沖液（pH值為7.4，0.5%十二烷基硫酸鈉）為釋放介質(zhì)考察依托泊苷聚合物膠束的體外釋放特性。由于依托泊苷在PBS水溶液中的溶解度極低，為了使釋放介質(zhì)中藥物濃度遠低于其飽和濃度[17]（即維持漏槽條件），采用添加表面活性劑的方法提高藥物的溶解度。藥物釋放實驗中常用的釋放介質(zhì)包括磷酸鹽（PBS）緩沖溶液[18-19]、含Tween 80的PBS溶液[20-21]以及含十二烷基硫酸鈉（SDS）的PBS溶液[22]等。實驗結(jié)果表明，依托泊苷在以上3種釋放介質(zhì)中的溶解度分別為0.36，1，2.5 mg/mL。本實驗選用含SDS的磷酸鹽緩沖溶液研究疏水藥物依托泊苷的釋放行為。相較于傳統(tǒng)制劑，ETP mPEG-PLA/P123膠束在7 h內(nèi)的釋放率僅為30%。因此，該膠束制劑具有顯著的緩釋作用，可延長依托泊苷的血液循環(huán)時間，維持血藥濃度，增加藥物在腫瘤細胞中的累積率。

3）本研究以P123和mPEG-PLA共同作為載體材料，采用薄膜水化法制備了負載ETP的納米混合膠束制劑，通過單因素考察與星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化處方，對制備的新型膠束制劑進行了理化性質(zhì)評估。研究結(jié)果表明，以mPEG-PLA/P123為載體材料制備的ETP膠束制劑，在水溶性、安全性、緩釋性、穩(wěn)定性和載藥量等方面均具有顯著優(yōu)勢，是一種極具應(yīng)用前景的納米制劑。

今后，關(guān)于ETP mPEG-PLA/P123納米膠束制劑的藥代動力學(xué)、組織分布以及抗腫瘤活性與機制方面還有待作進一步的研究。

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