無償獻血者血液病原體酶聯免疫吸附試驗(ELISA)與核酸檢測結果研究

吳樹

摘要：目的 分析血液病原體經2遍血清學（酶聯免疫吸附試驗（ELISA））檢測加1遍核酸檢測（NAT）與1遍血清學檢測加1遍核酸檢測在無償獻血者血液檢測中的應用效果情況，為探討更適合的無償獻血血液篩查檢測策略提供參考。方法 選擇2018年9月至2019年8月期間本血站采集的65405份無償獻血者血液標本，將其作為常規組;另選擇2019年9月至2020年8月期間本血站采集的69243份無償獻血者血液標本，將其作為實驗組。其中常規組血液標本采用2遍血清學檢測和1遍核酸檢測，實驗組血液標本采用1遍血清學檢測和1遍核酸檢測檢測。主要對比兩組中乙肝感染標志物HBsAg和HBV-DNA檢測不合格率。結果 常規組與實驗組血液標本HBsAg檢測不合格率分別是0.61%、0.38%（P<0.05），常規組與實驗組血液標本HBV-DNA檢測不合格率分別是0.21%、0.21%（P>0.05）。結論 在無償獻血者血液病原體檢測中開展1遍ELISA檢測和1遍核酸檢測，在能夠最大限度降低血液檢測成本，又能夠縮短病毒檢測“窗口期”，達到有效降低輸血感染風險，保障臨床用血安全。

關鍵詞：無償獻血者;核酸檢測;酶聯免疫吸附試驗;不合格率 ;檢測策略

【中圖分類號】Q461 ? ? ? ? ? ? 【文獻標識碼】A ? ? ? ? ? ? 【文章編號】2107-2306（2021）05-127-01

在無償獻血者血液病原體檢測中，酶聯免疫吸附試驗（ELISA）為血清學檢測常用方式之一，其在病毒抗原或抗體檢測中可發揮良好作用，但是在病毒感染病患感染窗口期以及病毒變異時會出現漏檢情況[1]，是當前影響血液安全的主要因素。核酸檢測（NAT）技術是一種新檢測技術，具有高度的敏感性和特異性。有研究表明[2]，核酸檢測可將HBV、HCV、HIV感染的平均窗口期縮短9天、59天、11天。而西班牙的Alvarez[3]研究顯示核酸檢測可將血清學陰性血液HBV的殘留風險降低。為探索更適合的無償獻血血液篩查檢測策略，本文通過分別對兩種不同檢測策略下乙肝感染標志物HBsAg和HBV-DNA檢測結果進行分析，現匯報如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2018年9月至2019年8月期間本血站采集的65405份無償獻血者血液標本，將其作為常規組;另選擇2019年9月至2020年8月期間本血站采集的69243份無償獻血者血液標本，將其作為實驗組。常規組中9月-次年8月血液標本采集例數分別是5275份、4843份、5444份、5473份、6036份、4338份、5299份、5688份、5871份、5944份、5359份、5835份。實驗組中9月-次年8月血液標本采集例數分別是5788份、5264份、5527份、6396份、5754份、3884份、5467份、6056份、6627份、6871份、6213份、5396份。兩組一般資料對比，P>0.05，可分組研究。所有獻血者均符合獻血指征。

1.2研究方法

1.2.1檢測試劑

常規組：2種HBsAg檢測試劑盒（ELISA），分別采購自伯樂公司、北京萬泰生物藥業股份有限公司。

實驗組：1種HBsAg檢測試劑盒（ELISA） ，北京萬泰生物藥業股份有限公司

核酸檢測試劑：羅氏cobas Taqman MPX test，version2.0（PCR-熒光法），華益美乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（1+2型）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光法）

1.2.2檢測方法

ELISA檢測方法（灰區設置0.9）：采集血液標本，在離心處理后，選擇血清進行HIV、HBV和HCV感染標志物檢測。常規組分別使用2個不同廠家試劑盒實施檢測，實驗組使用1個廠家試劑盒實施檢測。全部操作均嚴格按照試劑盒使用說明進行。

核酸檢測方法：核酸標本用美國BDEDTA 2K帶分離膠抗凝真空管留取5mL全血，采樣后在4h內于2-8℃低溫水平離心機以1600g離心20 min，用于核酸檢測，選擇羅氏全自動核酸檢測系統和華益美核酸檢測系統交替使用，對血清學（ELISA）檢測陰性結果標本再實施核酸檢測。全部操作均嚴格按照試劑盒使用說明進行。

常規組血液標本采用2遍ELISA檢測和1遍核酸檢測，先開展2遍ELISA檢測，對ELISA陰性結果標本再實施核酸檢測。實驗組血液標本采用1遍ELISA檢測和1遍核酸檢測，先選擇一個廠家的試劑盒實施ELISA檢測，對ELISA陰性結果標本再實施核酸檢測。

1.3觀察項目

（1）對比兩組HBsAg檢測不合格率。（2）對比兩組HBV-DNA檢測不合格率。

1.4數據處理

在本次研究中，數據均使用SPSS22.0軟件開展計算，計數資料采用百分比的形式表達，實施 X2檢測，當檢測結果顯示 P<0.05時，表明數據存在研究價值。

2研究結果

2.1對比兩組HBsAg檢測不合格率

常規組血液標本HBsAg檢測不合格率高于實驗組（P<0.05）。見下表1：

2.2對比兩組HBV-DNA檢測不合格率

常規組64443份血液標本中，核酸檢測中HBV-DNA不合格數量為136份;實驗組68503份血液標本中，ELISA檢測中HBV-DNA不合格數量為142份。兩組血液標本HBV-DNA檢測不合格率對比無明顯差異（P>0.05）。見下表2：

3討論

機體血液一方面可以維持內環境穩定，另一方面也可發揮防御效果，機體營養物質也會通過血液進行運輸，進而維持生命。同樣血液也會給病毒傳播提供途徑，例如HIV、HBV、HCV等。無償獻血一定程度上會增加病毒傳播機率，使得傳染性疾病發病率升高。為避免增加傳染性疾病患病率，需要對無償獻血者血液開展病原體檢測。如何最大限度地降低經血傳播疾病的危險，確保血液及血液制品的安全，成為各國該領域研究者面臨的主要問題。

ELISA檢測對于生物酶活性能夠發揮良好催化效果，操作方便，檢測成本低，并且具有較高的敏感。但是對于變異病毒以及處于窗口期的抗原檢測效果不佳，進而出現漏診率高等情況。本次對乙肝感染標志物研究中，常規組血液標本HBsAg在ELISA檢測不合格率高于實驗組（P<0.05），同時證明實驗組HBsAg檢出率更低，漏檢率更高，但常規組與實驗組HBV-DNA的核酸檢測不合格率卻一致。核酸檢測方法對“窗口期”、隱匿性感染標本在檢測方面有明顯優勢，同一地區的疾病流行水平下，如果實驗組漏檢率更高，經ELISA檢測后進入核酸檢測中潛在陽性標本應會更多，實驗組HBV-DNA不合格率理應升高，但實際結果卻是一致的，這可能是由于常規組與實驗組對象分別來自兩個年度下不同的個體，本身就存在一定的流行病學差異，從實驗組HBV-DNA的不合格率并未發生偏高，可以推論血液標本實施“1遍血清學檢測加1遍核酸檢測”對比“2遍血清學檢測加1遍核酸檢測”策略的血液殘余風險并未升高，也可以達到2遍血清學檢測加1遍核酸檢測的血液檢測安全水平。鑒于本次研究中，均未對血清學陽性、核酸檢測陽性樣本進行確認試驗，也沒進行相關流行病學追蹤檢測，但也對探尋更優的無償獻血者血液篩查檢測策略具有一定的參考意義。

綜上，在無償獻血者血液病原體檢測中開展1遍ELISA檢測和1遍核酸檢測，能夠最大限度降低血液檢測成本，減少經濟投入，又能夠縮短病毒檢測“窗口期”，達到有效降低輸血感染風險，保障臨床用血安全。

參考文獻：

[1]劉永霞，劉歡，劉燕，等.全自動核酸檢測分析系統在無償獻血者病毒檢測中的應用[J].實用臨床醫藥雜志，2020，24（23）：113-115.

[2] 任芙蓉. 核酸檢測技術在國內外血液篩檢中的應用[J].北京醫學，2008，30（8）.

[3] Alvarez M，Oyonarte S，Rodríguez PM，et al.Estimated risk of transfusiontransmitted viral infections in Spain.Transfusion，2002，42 （8）：994-998.

[4]張毓，田豐，孫國棟，等.化學發光法應用于無償獻血者HBsAg陰性/HBV DNA陽性標本檢測及其與核酸檢測的關聯分析[J].中國輸血雜志，2020，33（7）：651-654.