坎地沙坦對腦缺血再灌注大鼠SOD及MDA的影響

李國春 宋嵐 尹加珍 張紅 黃新武

摘要：目的 ?觀察坎地沙坦對腦缺血再灌注大鼠腦缺血體積及血清和腦組織SOD及MDA的影響，了解其抗氧化作用。方法 ?120只SD雄性大鼠，隨機(jī)分為正常組、腦缺血再灌注模型組、坎地沙坦大、小劑量組;每組再隨機(jī)分為再灌注24h和72h亞組，每組15只。給藥干預(yù)2周后采用雙側(cè)頸總動脈夾閉法夾閉頸總動脈導(dǎo)致大鼠全腦急性缺血，缺血2小時后實(shí)現(xiàn)再灌注，制備腦缺血再灌注大鼠模型。各組另10只大鼠腹主動脈取血，低溫離心分離血清，取腦組織制作10%組織勻漿，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清、腦組織勻漿中的SOD、MDA水平。結(jié)果 ?大鼠血清及腦組織SOD、MDA水平測定結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組血清及腦組織SOD水平明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;模型組血清及腦組織MDA水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組比較，坎地沙坦各劑量24h組和72h組血清及腦組織SOD水平均明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;坎地沙坦各劑量24h組及72h組血清及腦組織MDA水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ?坎地沙坦可明顯減少腦缺血大鼠腦梗死體積;降低血清及腦組織MDA水平，增高血清及腦組織SOD水平，提示坎地沙坦對腦缺血再灌注大鼠具有抗氧化損傷作用。

關(guān)鍵詞：坎地沙坦;腦缺血再灌注損傷;SOD;MDA

【中圖分類號】R338.2 ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A ? ?【文章編號】2107-2306（2019）01-021-02

腦血管疾病有高發(fā)病率，高致死致殘率的特點(diǎn)，是神經(jīng)內(nèi)科最為常見的疾病之一。70%以上為缺血性腦卒中[ 1]，由于腦組織的供血動脈狹窄或閉塞、腦組織供血不足導(dǎo)致的疾病。目前治療缺血性腦卒中主要以恢復(fù)改善腦組織供血為首要目的，但在恢復(fù)血流灌注后存在再灌注損傷[2]。腦缺血再灌注損傷機(jī)制復(fù)雜，活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）在腦缺血再灌注損傷的病程發(fā)展中發(fā)揮重要作用[3]。

本研究采用雙側(cè)頸總動脈夾閉法制備全腦缺血2h再灌注24h和72h，模擬腦缺血再灌注對大鼠的損傷，經(jīng)給予坎地沙坦干預(yù)，觀察再灌注24h和72h時對大鼠腦組織及血清中SOD、MDA等水平的影響。

1 ?材料與方法

1.1 ?動物與分組

健康SD雄性大鼠120只，體重（250±10）g，SPF級，來自西南醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心。隨機(jī)分為正常組（假手術(shù)組），腦缺血再灌注模型組、坎地沙坦小劑量組（0.2mg/kg）、坎地沙坦大劑量組（1mg/kg）;各組分別分為再灌注24h組和再灌注72h組兩個亞組，每組15只。

1.2 ?藥物及試劑

坎地沙坦酯片，廣州白云山天心藥業(yè)有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號：201705;氯代三苯基四氮唑（TTC）， Macklin 貨號：T819365;大鼠（Rat）超氧化物歧化酶（SOD）ELISA檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所，貨號：RA20008;大鼠（Rat）丙二醛（MDA）ELISA檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所，貨號：RA20007。

1.3 ?給藥與造模

正常組和模型組給予生理鹽水1ml/d灌胃，坎地沙坦小劑量組給予坎地沙坦0.2mg/（kg.d）灌胃，坎地沙坦大劑量組給予坎地沙坦1mg/（kg.d）灌胃，給藥采用等容積灌胃，各組給藥時間均為2周。對模型組及給藥組大鼠均采用雙側(cè)頸總動脈夾閉法制備腦缺血再灌注模型。正常組（假手術(shù)組）操作與模型組相同，但無夾閉雙側(cè)頸總動脈操作。

1.4 ?指標(biāo)檢測

在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時間結(jié)束時，各組另10只大鼠，用3﹪戊巴比妥鈉（0.15ml·100g-1 ）腹腔注射麻醉，用未加有抗凝劑的真空采血管腹主動脈取血，室溫放置待血液凝固后，低溫離心3000r/min離心15min，取上清液分裝于EP管中，得血清標(biāo)本，放于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩８鹘M大鼠取血后，立即斷頭取腦，迅速分離大鼠大腦組織，制備10%腦組織勻漿，低溫3000r/min離心15min，取上清液分裝于EP管中，得腦組織勻漿標(biāo)本，放于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｑ寮澳X組織勻漿中SOD、MDA采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，按南京建成生物研究所大鼠（Rat）超氧化物歧化酶（SOD）ELISA檢測試劑盒、大鼠（Rat）丙二醛（MDA）ELISA檢測試劑盒說明書操作步驟進(jìn)行測定。

1.5 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果以 表示，采用單因素方差分析，P<0.05則認(rèn)為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 ?對大鼠SOD水平的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清及腦組織SOD水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組比較，坎地沙坦小劑量72h組血清SOD水平有所增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;坎地沙坦小劑量24h組、坎地沙坦大劑量24h組、坎地沙坦大劑量72h組大鼠血清SOD水平與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。坎地沙坦各劑量24h組和72h組大鼠腦組織SOD水平明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 ?對大鼠MDA水平的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清及腦組織中MDA含量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組相比，坎地沙坦大、小劑量24h組及72h組血清和腦組織中MDA含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與坎地沙坦小劑量組比較，坎地沙坦大劑量組MDA含量有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3討論

在腦缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制的研究中，多數(shù)學(xué)者致力于自由基研究，逐漸證實(shí)自由基連鎖反應(yīng)參與腦缺血重要病理變化過程，缺血腦組織可激化自由基連鎖反應(yīng)使之加重腦缺血再灌注損傷[4]。生物體內(nèi)自由基主要包括超氧自由基、一氧化氮自由基等，其中超氧自由基在生物體內(nèi)分布最為廣泛，參與自由基連鎖反應(yīng)的啟動環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠在發(fā)生腦缺血再灌注后，血清及腦組織中SOD水平較正常組均有不同程度的降低，模型組大鼠血清及腦組織MDA水平較正常組大鼠均明顯升高，可見大鼠體內(nèi)的氧化系統(tǒng)及氧化防御系統(tǒng)已被破壞失衡，氧自由基大量生成而清除減少，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)而造成腦缺血再灌注損傷。

本實(shí)驗(yàn)中坎地沙坦明顯減少腦缺血再灌注大鼠腦梗死體積，降低血清及腦組織MDA水平;增高血清及腦組織SOD水平，提示坎地沙坦對腦缺血再灌注大鼠具有抗氧化腦保護(hù)作用。其機(jī)制可能與坎地沙坦拮抗血管緊張素，舒張血管等作用有關(guān)，增加了大腦的供血供氧，促進(jìn)了氧的充分還原，減少了氧自由基的生成，由此減少了SOD的消耗。說明使用坎地沙坦能明顯減輕腦缺血再灌注大鼠腦組織及血清中自由基損傷，提高其抗氧化能力，坎地沙坦小劑量組與大劑量組均出現(xiàn)相似效果。作為治療高血壓的一線藥物坎地沙坦在有效控制血壓水平的同時能很好改善腦并發(fā)癥，具有實(shí)驗(yàn)和臨床意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳懷珍.《急性缺血性腦血管病中西醫(yī)診療指南》解讀[J]. 中醫(yī)藥臨床雜志，2013，3（11）：949-954 .

[2] 周迎春，邵念芳. 急性缺血性中風(fēng)病因病機(jī)探討[J]. ?湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，1999，9 （2） ：19-20.

[3] A Lewén，P Matz，PH Chan.Free radical patways in CNS injury[J]. Journal of Neurotrauma，2000，17（10）：871-875.

[4] 陳勇，白小紅，陳章. 腦缺血再灌注損傷自由基的改變及其與腦組織損傷的關(guān)系[J]. 西南軍醫(yī)，2009，11（3）：465-466.

（ 1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院，四川 瀘州 646000;2.西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，四川 瀘州 646000）